中药提取分离技术

2021年2月19日发(作者：最好的减肥食谱)
中药提取分离纯化

中草药提取液或提取物仍然是混合物，需进一步除去杂质，分离并 进行精制。具体
的方法随各中草药的性质不同而异，以后将通过实例加以叙述，此处只作一般原则
性的讨论。


一、溶剂分离法：



一 般是将上述总提取物，选用三、四种不同极性的溶剂，由低极性到高极性分步
进行提取分离。水浸膏或乙 醇浸膏常常为胶伏物，难以均匀分散在低极性溶剂中，
故不能提取完全，可拌人适量惰性填充剂，如硅藻 土或纤维粉等，然后低温或自然
干燥，粉碎后，再以选用溶剂依次提取，使总提取物中各组成成分，依其 在不同极
性溶剂中溶解度的差异而得到分离。例如粉防己乙醇浸膏，碱化后可利用乙醚溶出
脂溶 性生物碱，再以冷苯处理溶出粉防己碱，与其结构类似的防己诺林碱比前者少
一甲基而有一酚羟基，不溶 于冷苯而得以分离。利用中草药化学成分，在不同极性
溶剂中的溶解度进行分离纯化，是最常用的方法。




广而言之，自中草药提取溶液中加入另一种溶剂，析出其中 某种或某些成分，
或析出其杂质，
也是一种溶剂分离的方法。
中草药的水提液中常含有 树胶、
粘液质、
蛋白质、糊化淀粉等，可以加入一定量的乙醇，使这些不溶于乙醇的成分自溶液 中
沉淀析出，而达到与其它成分分离的目的。例如自中草药提取液中除去这些杂质，
或自白及水 提取液中获得白及胶，可采用加乙醇沉淀法；自新鲜括楼根汁中制取天
花粉素，可滴人丙酮使分次沉淀析 出。目前，提取多糖及多肽类化合物，多采用水
溶解、浓缩、加乙醇或丙酮析出的办法。




此外，
也可利用其某些成分能在酸或碱中溶解，
又在 加碱或加酸变更溶液的
pH
后，成不溶物而析出以达到分离。例如内酯类化合物不溶于水，但遇 碱开环生成羧
酸盐溶于水，
再加酸酸化，
又重新形成内酯环从溶液中析出，
从 而与其它杂质分离；
生物碱一般不溶于水，遇酸生成生物碱盐而溶于水，再加碱碱化，又重新生成游离< br>生物碱。这些化合物可以利用与水不相混溶的有机溶剂进行萃取分离。一般中草药
总提取物用酸水 、碱水先后处理，可以分为三部分：溶于酸水的为碱性成分（如生
物碱），溶于碱水的为酸性成分（如有 机酸），酸、碱均不溶的为中性成分（如甾
醇）。还可利用不同酸、碱度进一步分离，如酸性化台物可以 分为强酸性、弱酸性
和酷热酚性三种，它们分别溶于碳酸氢钠、碳酸钠和氢氧化钠，借此可进行分离。< br>有些总生物碱，如长春花生物碱、石蒜生物碱，可利用不同
rH
值进行分离。但有
些特殊情况，如酚性生物碱紫董定碱（
corydine
）在氢氧化钠溶液中仍能为乙醚抽< br>出，蝙蝠葛碱（
dauricins
）在乙醚溶液中能为氢氧化钠溶液抽出，而溶于氯仿 溶液
中则不能被氢氧化钠溶液抽出；有些生物碱的盐类，如四氢掌叶防己碱盐酸盐在水
溶液中仍 能为氯仿抽出。这些性质均有助于各化合物的分离纯化。


二、两相溶剂萃取法：



1
．萃取法：两相溶剂提取又 简称萃取法，是利用混合物中各成分在两种互不相
溶的溶剂中分配系数的不同而达到分离的方法。萃取时 如果各成分在两相溶剂中分
配系数相差越大，
则分离效率越高、
如果在水提取液中的有 效成分是亲脂性的物质，
一般多用亲脂性有机溶剂，如苯、氯仿或乙醚进行两相萃取，如果有效成分是偏 于
亲水性的物质，在亲脂性溶剂中难溶解，就需要改用弱亲脂性的溶剂，例如乙酸乙
酯、丁醇等 。还可以在氯仿、乙醚中加入适量乙醇或甲醇以增大其亲水性。提取黄
酮类成分时，
多用乙酸乙 脂和水的两相萃取。
提取亲水性强的皂甙则多选用正丁醇、
异戊醇和水作两相萃取。不过，一般 有机溶剂亲水性越大，与水作两相萃取的效果
就越不好，
因为能使较多的亲水性杂质伴随而出，
对有效成分进一步精制影响很大。




两相溶剂萃取在操作中还要注意以下几点：




1）先用小试管猛烈振摇约
1
分钟，观察萃取后二液层分层现象。如果容易产
生乳化 ，大量提取时要避免猛烈振摇，可延长萃取时间。如碰到乳化现象，可将乳
化层分出，再用新溶剂萃取； 或将乳化层抽滤，或将乳化层稍稍加热；或较长时间
放置并不时旋转，令其自然分层。乳化现象较严重时 ，可以采用二相溶剂逆流连续
萃取装置。




2
）

水提取液的浓度最好在比重
1
．
1
～
1
．
2
之间，过稀则溶剂用量太大，影
响操作。




3
）

溶剂与水溶液应保持一定量的比例， 第一次提取时，溶剂要多一些，一般
为水提取液的
1/3
，以后的用量可以少一些，一 般
1/4-1/6
。




4
）一般萃 取
3
～
4
次即可。但亲水性较大的成分不易转入有机溶剂层时，须增
加萃取次数，或改变萃取溶剂。



萃取法所用设备，如为小量萃取，可在 分液漏
斗中进行；如系中量萃取，可在较大的适当的下口瓶中进行。在工业生产中大量萃
取，多 在密闭萃取罐内进行，用搅拌机搅拌一定时间，使二液充分混合，再放置令
其分层；有时将两相溶液喷雾 混含，以增大萃取接触，提高萃取效率，也可采用二
相溶剂逆流连续萃取装置。




2
．逆流连续萃取法：是一种连续的两相溶剂萃取法。其装置可具有一根 、数
根或更多的萃取管。管内用小瓷圈或小的不锈钢丝圈填充，以增加两相溶剂萃取时
的接触面 。例如用氯仿从川楝树皮的水浸液中萃取川楝素。将氯仿盛于萃取管内，
而比重小于氯仿的水提取浓缩液 贮于高位容器内，开启活塞，则水浸液在高位压力
下流入萃取管，
遇瓷圈撞击而分散成细粒，< br>使与氯仿接触面增大，
萃取就比较完全。
如果一种中草药的水浸液需要用比水轻的苯、乙 酸乙酯等进行萃取，则需将水提浓
缩液装在萃取管内，而苯、乙酸乙酯贮于高位容器内。萃取是否完全， 可取样品用
薄层层析、纸层析及显色反应或沉淀反应进行检查。




3
．逆流分配法（
CounterCurrentDistributio n
，
CCD
）：逆流分配法又称逆
流分溶法、
逆流分布法或反流分布 法。
逆流分配法与两相溶剂逆流萃取法原理一致，
但加样量一定，并不断在一定容量的两相溶剂 中，经多次移位萃取分配而达到混合
物的分离。本法所采用的逆流分布仪是由若干乃至数百只管子组成。 若无此仪器，
小量萃取时可用分液漏斗代替。预先选择对混合物分离效果较好，即分配系数差异
大的两种不相混溶的溶剂。并参考分配层析的行为分析推断和选用溶剂系统，通过
试验测知要经多少次的 萃取移位而达到真正的分离。逆流分配法对于分离具有非常
相似性质的混合物，往往可以取得良好的效果 。但操作时间长，萃取管易因机械振
荡而损坏，消耗溶剂亦多，应用上常受到一定限制。
4
．液滴逆流分配法：液滴逆流分配法又称液滴逆流层析法。为近年来在逆流分配
法基础上 改进的两相溶剂萃取法。。对溶剂系统的选择基本同逆流分配法，但要求
能在短时间内分离成两相，并可 生成有效的液滴。由于移动相形成液滴，在细的分
配萃取管中与固定相有效地接触、摩擦不断形成新的表 面，促进溶质在两相溶剂中
的分配，故其分离效果往往比逆流分配法好。且不会产生乳化现象，用氮气压 驱动
移动相，被分离物质不会因遇大气中氧气而氧化。本法必须选用能生成液滴的溶剂
系统，且 对高分子化合物的分离效果较差，处理样品量小（
1
克以下），并要有一
定设备。应用 液滴逆流分配法曾有效地分离多种微量成分如柴胡皂甙原小檗碱型季
铵碱等。液滴逆流分配法的装置，近 年来虽不断在改进，但装置和操作较繁。目前，
对适用于逆流分配法进行分离的成分，可采用两相溶剂逆 流连续萃取装置或分配柱
层析法进行。


三、沉淀法：



是在中草药提取液中加入某些试剂使产生沉淀，以获得有效成分或除去杂质的方
法。




1
．

铅盐沉淀法：铅盐沉淀法为分离某些 中草药成分的经典方法之一。由于醋
酸铅及碱式醋酸铅在水及醇溶液中，能与多种中草药成分生成难溶的 铅盐或络盐沉
淀，故可利用这种性质使有效成分与杂质分离。中性醋酸铅可与酸性物质或某些酚
性物质结合成不溶性铅盐。因此，常用以沉淀有机酸、氨基酸、蛋白质、粘液质、
鞣质、树脂、酸性皂甙 、部分黄酮等。可与碱式醋酸铅产生不溶性铅盐或络合物的
范围更广。通常将中草药的水或醇提取液先加 入醋酸铅浓溶液，静置后滤出沉淀，
并将沉淀洗液并入滤液，于滤液中加碱式醋酸铅饱和溶液至不发生沉 淀为止，这样
就可得到醋酸铅沉淀物、碱式醋酸铅沉淀物及母液三部分。




然后将铅盐沉淀悬浮于新溶剂中，通以硫化氢气体，使分解并转为不溶性硫化
铅而沉 淀。含铅盐母液亦须先如法脱铅处理，再浓缩精制。硫化氢脱铅比较彻底，
但溶液中可能存有多余的硫化 氢，必须先通人空气或二氧化碳让气泡带出多余的硫
化氢气体，以免在处理溶液时参与化学反应。新生态 的硫化铅多为胶体沉淀，能吸
咐药液中的有效成分，要注意用溶剂处理收回。脱铅方法，也可用硫酸、磷 酸、硫
酸钠、磷酸钠等除铅，但硫酸铅、磷酸铅在水中仍有一定的溶解度，除铅不彻底。
用阳离 子交换树脂脱铅快而彻底，
但要注意药液中某些有效成分也可能被交换上去，
同时脱铅树脂再生 也较困难。还应注意脱铅后溶液酸度增加，有时需中和后再处理
溶液，有时可用新制备的氢氧化铅、氢氧 化铝、氢氧化铜或碳酸铅、明矾等代替醋
酸铅、碱式醋酸铅。例如在黄芩水煎液中加入明矾溶液，黄芩甙 就与铝盐络合生成
难溶于水的络化物而与杂质分离，这种络化物经用水洗净就可直接供药用。




2
．

试剂沉淀法：例如在生物碱盐的溶液 中，加入某些生物碱沉淀试剂（见生
物碱性质下），则生物碱生成不溶性复盐而析出。水溶性生物碱难以 用萃取法提取
分出，常加入雷氏铵盐使生成生物碱雷氏盐沉淀析出。又如橙皮甙、芦丁、黄芩甙、
甘草皂甙均易溶于碱性溶液，当加入酸后可使之沉淀析出。某些蛋白质溶液，可以
变更溶液的
pH
值利用其在等电点时溶解度最小的性质而使之沉淀析出。此外，还
可以用明胶、蛋白溶液沉 淀鞣质；胆甾醇也常用以沉淀洋地黄皂甙等。可根据中草
药有效成分和杂质的性质，适当选用。


四、盐析法：

盐析法是在中草药的水提液中、加入无机盐至一定浓度，或 达到饱和状态，可
使某些成分在水中的溶解度降低沉淀析出，而与水溶性大的杂质分离。常用作盐析的无机盐有氯化钠、硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。例如三七的水提取液中加硫酸镁
至饱和状态，三七 皂甙乙即可沉淀析出，自黄藤中提取掌叶防己碱，自三颗针中提
取小檗碱在生产上都是用氯化钠或硫酸按 盐析制备。有些成分如原白头翁素、麻黄
碱、苦参碱等水溶性较大，在提取时，亦往往先在水提取液中加 入一定量的食盐，
再用有机溶剂萃取。


五、透析法：



透析法是利用小分子物质在溶液中可通过半透膜，
而大分子物质不能通过半透 膜
的性质，达到分离的方法。例如分离和纯化皂甙、蛋白质、多肽、多糖等物质时，
可用透析法 以除去无机盐、单糖、双糖等杂质。反之也可将大分子的杂质留在半透
膜内，而将小分子的物质通过半透 膜进入膜外溶液中，而加以分离精制：透析是否
成功与透析膜的规格关系极大。透析膜的膜孔有大有小， 要根据欲分离成分的具体
情况而选择。透析膜有动物性膜、火棉胶膜、羊皮纸膜（硫酸纸膜）、蛋白质胶 膜、
玻璃纸膜等。油常多用市售的玻璃纸或动物性半透膜扎成袋状，外面用尼龙网袋加
以保护， 小心加入欲透析的样品溶液，悬挂在清水容器中。经常更换清水使透析膜
内外溶液的浓度差加大，必要时 适当加热，并加以搅拌，以利透析速度加快。为了
加快透析速度，还可应用电透析法，即在半在半透膜旁 边纯溶剂两端




放置二个电极，接通电路，则透析膜中的带有 正电荷的成分如无机阳离子、生
物碱等向阴极移动，而带负电共荷的成分如无机阴离子、有机酸等则向阳 极移动，
中性化合物及高分子化合物则留在透析膜中。透析是否完全，须取透析膜内溶液进
行定 性反应检查。




一般透析膜可以自制：动物半透膜如猪、牛的 膀胱膜、用水洗净，再以乙醚脱
脂，
，
即可供用；
羊皮纸膜可将滤纸浸入50
％的硫酸
15
～
60
分钟，
取出铺在板上，
以水冲洗制得。其膜孔大小与硫酸浓度、浸泡时间以及用水冲洗速度有关；火棉胶
膜系将火棉胶溶于乙 醚及无水乙醇，涂在板上，干后放置水中即可供用，其膜孔大
小与溶剂种类、溶剂挥发速度有关，溶剂中 加入适量水可使膜孔增大，加入少量醋
酸可使膜孔缩小；蛋白质胶（明胶）膜可用
20
％明胶涂于细布上，阴干后放水中，
再加甲醛使膜凝固，冲洗干净即可供用。近来商品有透析膜管成品出 售，国外习称
“ViskingDialysisTubing”
，有各种大小厚度规格，可供 不同大小分子量的多糖、
多肽透析时选用。


六、结晶、重结晶和分步结晶法：



鉴定中草药化学成分 ，
研究其化学结构，
必须首先将中草药成分制备成单体纯品。
在常温下，
物质 本身性质是液体的化台物，
可分别用分馏法或层析法进行分离精制。
一般他说，中草药化学成分 在常温下多半是固体的物质，都具有结晶他的通性，可
以根据溶解度的不同用结晶法来达到分离精制的目 的。研究中草药化学成分时，一
旦获得结晶，就能有效地进一步精制成为单体纯品。纯化台物的结晶有一 定的熔点
和结晶学的特征，有利于鉴定。如果鉴定的物质不是单体纯品，不但不能得出正确
的结 论，还会造成工作上的浪费。因此，求得结晶并制备成单体纯品，就成为鉴定
中草药成分、研究其分子结 构重要的一步。

1
．杂质的除去：中草药经过提取分离所得到的成分，大多仍然含有 杂质，或
者是混合成分。有时即使有少量或微量杂质存在，也能阻碍或延缓结晶的形成。所
以在 制备结晶时，必须注意杂质的干扰，应力求尽可能除去。有时可选用溶剂溶出
杂质，或只溶出所需要的成 分。有时可用少量活性炭等进行脱色处理，以除去有色
杂质。有时可通过氧化铝，硅胶或硅藻土短柱处理 后，再进行制备结晶。但应用吸
附剂除去杂质时，要注意所需要的成分也可能被吸附而损失。此外，层析 法更是分
离制备单体纯品所常用的有效方法。




如果 一再处理仍未能使近于纯品的成分结晶化，则可先制备其晶态的衍生物，
再回收原物，可望得到结晶。例 如游离生物碱可制备各种生物碱盐类，羟基化合物
可转变成乙酸化物，
碳基化台物可制备成苯踪 衍生物结晶。
美登碱在原料中含量少，
且反复分离精制难以得到结晶，但制备成
3一滇丙基美登碱结晶后，再经水解除去
澳丙基，美登碱就能制备成为结晶。




2
．溶剂的选择；制备结晶，要注意选择合宜的溶剂和应用适量的溶剂。 合宜
的溶剂，最好是在冷时对所需要的成分溶解度较小，而热时溶解度较大。溶剂的沸
点亦不宜 太高。一般常用甲醇、丙酮、氯仿、乙醇、乙酸乙醋等。但有些化合物在
一般溶剂中不易形成结晶，而在 某些溶剂中则易于形成结晶。例如葛根素、逆没食
子酸（
ellagicacid
）在 冰醋酸中易形成结晶，大黄素（
emodin
）在吡啶中易于结
晶，萱草毒素（
hemerocallin
）在
N
，
N
一二甲基甲酞胺（
DMF
）中易得到结晶，
而穿心莲亚硫酸氢钠加成物在丙酮一水中较易得到结晶。又如蝙蝠葛碱 通常为无定
形粉未，但能和氯仿或乙醚形成为加成物结晶。




3
．结晶溶液的制备：制备结晶的溶液，需要成为过饱和的溶液。一般是应用
适量的溶 剂在加温的情况下，将化合物溶解再放置冷处。如果在室温中可以析出结
晶，就不一定放置于冰箱中，以 免伴随结晶析出更多的杂质。





“
新生态
”
的物质即新游离的物质或无定形的粉未状物质，
远较晶体物质的溶解
度大， 易于形成过饱和溶液。一般经过精制的化合物，在蒸去溶剂抽松为无定形粉
未时就是如此，有时只要加入 少量溶剂，往往立即可以溶解，稍稍放置即能析出结
晶。例如长春花总弱碱部分抽松后加入
1< br>．
5
倍量的甲醇溶解，放置后很诀析出长
春碱结晶。又如蝙蝠葛碱在乙醚中很难 溶解，但当其盐的水溶液用氨液碱化，并立
即用乙醚萃取，所得的乙醚溶液，放置后即可析出蝙蝠葛碱的 乙醚加成物结晶。





制备结晶溶液，除选用单一溶 剂外，也常采用混合溶剂。一般是先将化合物溶
于易溶的溶剂中，再在室温下滴加适量的难溶的溶剂，直 至溶液微呈浑浊，并将此
溶液微微加温，使溶液完全澄清后放置。例如
J
一细辛醚重结 晶时，可先溶于乙醇，
再滴加适量水，即可析出很好的结晶。又如自虎杖中提取水溶性的虎杖甙时，在已
精制饱和的水溶液上添加一层乙醚放置，既有利于溶出其共存的脂溶性杂质，又可
降低水的极性 ，促使虎杖俄的结晶化。自秦皮中提取七叶甙（秦皮甲素），也可运
用这样的办法。




结晶过程中，一般是溶液浓度高，降温诀，析出结晶的速度也快些。但是其结晶的颗粒较小，杂质也可能多些。有时自溶液中析出的速度太快，超过化合物晶核
的形成劝分子定向 排列的速度，往往只能得到无定形粉未。有时溶液太浓，粘度大
反而不易结晶化。如果溶液浓度适当，温 度慢慢降低，有可能析出结晶较大而纯度
较高的结晶。有的化合物其结晶的形成需要较长的时间，例如铃 兰毒甙等，有时需
放置数天或更长的时间。

4
．制备结晶操作：制备结晶除 应注意以上各点外，在放置过程中，最好先塞
紧瓶塞，避免液面先出现结晶，而致结晶纯度较低。如果放 置一段时间后没有结晶
析出，可以加入极微量的种晶，即同种化合物结晶的微小颗粒。加种晶是诱导晶核
形成常用而有效的手段。一般他说，结晶化过程是有高度选择性的，当加入同种分
子或离子，结 晶多会立即长大。而且溶液中如果是光学异构体的混合物，还可依种
晶性质优先析出其同种光学异构体。 没有种晶时，可用玻璃棒蘸过饱和溶液一滴，
在空气中任溶剂挥散，再用以磨擦容器内壁溶液边缘处，以 诱导结晶的形成。如仍
无结晶析出，可打开瓶塞任溶液逐步挥散，慢慢析晶。或另选适当溶剂处理，或再
精制一次，尽可能除尽杂质后进行结晶操作。




5< br>．重结晶及分步结晶：在制备结晶时，最好在形成一批结晶后，立即倾出上
层溶液，然后再放置以 得到第二批结晶。晶态物质可以用溶剂溶解再次结晶精制。
这种方法称为重结晶法。结晶经重结晶后所得 各部分母液，再经处理又可分别得到
第二批、第三批结晶。这种方法则称为分步结晶法或分级结晶法。晶 态物质在一再
结晶过程中，结晶的析出总是越来越快，纯度也越来越高。分步结晶法各部分所得
结晶，其纯度往往有较大的差异，但常可获得一种以上的结晶成分，在未加检查前
不要贸然混在一起。< br>



6
．结晶纯度的判定：化合物的结晶都有一定的结晶 形状、色泽、熔点和熔距，
一可以作为鉴定的初步依据。这是非结晶物质所没有的物理性质。化合物结晶 的形
状和熔点往往因所用溶剂不同而有差异。原托品碱在氯仿中形成棱往状结晶，熔点
207< br>℃；在丙酮中则形成半球状结晶，熔点
203
℃；在氯仿和丙酮混合溶剂中则形
成以上两种晶形的结晶。又如
N
一氧化苦参碱，在无水丙酮中得到的结晶熔点
208< br>℃，在稀丙酮（含水）析出的结晶为
77
～
80
℃。所以文献中常在化 合物的晶
形、
熔点之后注明所用溶剂。
一般单体纯化合物结晶的熔距较窄，
有 时要求在
0
．
5
℃
左右，如果熔距较长则表示化合物不纯。




但有些例外情况，特别是有些化合物的分解点不易看得清楚。也有的化 合物熔
点一致，熔距较窄，但不是单体。一些立体异构体和结构非常类似的混合物，常有
这样的 现象。还有些化合物具有双熔点的特性，即在某一温度已经全部融熔，当温
度继续上升时又固化，再升温 至一定温度又熔化或分解。如防己诺林碱在
1760C
时熔化，至
200
℃时 又固化，再在
2420C
时分解。中草药成分经过同一溶剂进行
三次重结晶，其晶形及 熔点一致，同时在薄层层析或纸层层析法经数种不同展开剂
系统检定，也为一个斑点者，一般可以认为是 一个单体化合物。但应注意，有的化
合物在一般层析条件下，虽然只呈现一个斑点，但并不一定是单体成 分。例如鹿含
草中主成分为高熊果砍，异高熊果甙极难用一般方法分离，经反复结晶后，在纸层
及聚酞胺薄层上都只有一个斑点，
易误认为单一成分，
但测其熔点在
115
～
125
℃，
熔距很长。经制备其甲醚后，再经纸层层析检定，可以出现两个斑点，异高 熊果甙
的比移值大于高熊果甙。又如水菖蒲根茎挥发油中的
α
一细辛醚和
β< br>一细辛醚，在
一般薄层上均为一个斑点，前者为结晶，熔点
63
℃，后者为液体 沸点
296
℃，用
硝酸银薄层或气相层忻很容易区分。有时个别化合物（如氨基酸）可 能部分地与层
析纸或薄层上的微量金属离子
（如
Cu
）
、
酸 或碱形成络合物、
盐或分解而产生复斑。
因此，判定结晶纯度时，要依据具体情况加以分析。此 外，高压液谱、气相层析、
紫外光谱等，均有助于检识结晶样品的纯度。

< br>中草药提取液或提取物仍然是混合物，需进一步除去杂质，分离并进行精制。具
体的方法随各中草 药的性质不同而异，以后将通过实例加以叙述，此处只作一般原
则性的讨论。


一、溶剂分离法：



一般是将上述总提取物，选用三、四种 不同极性的溶剂，由低极性到高极性分步
进行提取分离。水浸膏或乙醇浸膏常常为胶伏物，难以均匀分散 在低极性溶剂中，
故不能提取完全，可拌人适量惰性填充剂，如硅藻土或纤维粉等，然后低温或自然干燥，粉碎后，再以选用溶剂依次提取，使总提取物中各组成成分，依其在不同极
性溶剂中溶解度的 差异而得到分离。例如粉防己乙醇浸膏，碱化后可利用乙醚溶出
脂溶性生物碱，再以冷苯处理溶出粉防己 碱，与其结构类似的防己诺林碱比前者少
一甲基而有一酚羟基，不溶于冷苯而得以分离。利用中草药化学 成分，在不同极性
溶剂中的溶解度进行分离纯化，是最常用的方法。




广而言之，自中草药提取溶液中加入另一种溶剂，析出其中某种或某些成分，
或析出 其杂质，
也是一种溶剂分离的方法。
中草药的水提液中常含有树胶、
粘液质、
蛋白质、糊化淀粉等，可以加入一定量的乙醇，使这些不溶于乙醇的成分自溶液中
沉淀析出，而达到与其 它成分分离的目的。例如自中草药提取液中除去这些杂质，
或自白及水提取液中获得白及胶，可采用加乙 醇沉淀法；自新鲜括楼根汁中制取天
花粉素，可滴人丙酮使分次沉淀析出。目前，提取多糖及多肽类化合 物，多采用水
溶解、浓缩、加乙醇或丙酮析出的办法。



此外，
也可利用其某些成分能在酸或碱中溶解，
又在加碱或加酸变更溶液的
pH< br>后，成不溶物而析出以达到分离。例如内酯类化合物不溶于水，但遇碱开环生成羧
酸盐溶于水，< br>再加酸酸化，
又重新形成内酯环从溶液中析出，
从而与其它杂质分离；
生物碱一 般不溶于水，遇酸生成生物碱盐而溶于水，再加碱碱化，又重新生成游离
生物碱。这些化合物可以利用与 水不相混溶的有机溶剂进行萃取分离。一般中草药
总提取物用酸水、碱水先后处理，可以分为三部分：溶 于酸水的为碱性成分（如生
物碱），溶于碱水的为酸性成分（如有机酸），酸、碱均不溶的为中性成分（ 如甾
醇）。还可利用不同酸、碱度进一步分离，如酸性化台物可以分为强酸性、弱酸性
和酷热酚 性三种，它们分别溶于碳酸氢钠、碳酸钠和氢氧化钠，借此可进行分离。
有些总生物碱，如长春花生物碱 、石蒜生物碱，可利用不同
rH
值进行分离。但有
些特殊情况，如酚性生物碱紫董定碱 （
corydine
）在氢氧化钠溶液中仍能为乙醚抽
出，蝙蝠葛碱（
dau ricins
）在乙醚溶液中能为氢氧化钠溶液抽出，而溶于氯仿溶液
中则不能被氢氧化钠溶液 抽出；有些生物碱的盐类，如四氢掌叶防己碱盐酸盐在水
溶液中仍能为氯仿抽出。这些性质均有助于各化 合物的分离纯化。


二、两相溶剂萃取法：



1
．萃取法：两相溶剂提取又简称萃取法，是利用混合物中各成分在两种互不相
溶的溶剂中分 配系数的不同而达到分离的方法。萃取时如果各成分在两相溶剂中分
配系数相差越大，
则分离效 率越高、
如果在水提取液中的有效成分是亲脂性的物质，
一般多用亲脂性有机溶剂，如苯、氯仿 或乙醚进行两相萃取，如果有效成分是偏于
亲水性的物质，在亲脂性溶剂中难溶解，就需要改用弱亲脂性 的溶剂，例如乙酸乙
酯、丁醇等。还可以在氯仿、乙醚中加入适量乙醇或甲醇以增大其亲水性。提取黄< br>酮类成分时，
多用乙酸乙脂和水的两相萃取。
提取亲水性强的皂甙则多选用正丁醇、异戊醇和水作两相萃取。不过，一般有机溶剂亲水性越大，与水作两相萃取的效果
就越不好，
因为能使较多的亲水性杂质伴随而出，
对有效成分进一步精制影响很大。




两相溶剂萃取在操作中还要注意以下几点：




1
）先用小试管猛烈振摇约
1
分钟，观察萃取后二液层分层现象。 如果容易产
生乳化，大量提取时要避免猛烈振摇，可延长萃取时间。如碰到乳化现象，可将乳
化 层分出，再用新溶剂萃取；或将乳化层抽滤，或将乳化层稍稍加热；或较长时间
放置并不时旋转，令其自 然分层。乳化现象较严重时，可以采用二相溶剂逆流连续
萃取装置。




2
）

水提取液的浓度最好在比重
1
．
1
～
1
．
2
之间，过稀则溶剂用量太大，影
响操作。




3
）

溶剂与水溶液应保持一定量的比 例，第一次提取时，溶剂要多一些，一般
为水提取液的
1/3
，以后的用量可以少一些 ，一般
1/4-1/6
。




4
）一 般萃取
3
～
4
次即可。但亲水性较大的成分不易转入有机溶剂层时，须增加萃取次数，或改变萃取溶剂。



萃取法所用设备，如为小量萃取， 可在分液漏
斗中进行；如系中量萃取，可在较大的适当的下口瓶中进行。在工业生产中大量萃
取 ，多在密闭萃取罐内进行，用搅拌机搅拌一定时间，使二液充分混合，再放置令
其分层；有时将两相溶液 喷雾混含，以增大萃取接触，提高萃取效率，也可采用二
相溶剂逆流连续萃取装置。




2
．逆流连续萃取法：是一种连续的两相溶剂萃取法。其装置可具有一根 、数
根或更多的萃取管。管内用小瓷圈或小的不锈钢丝圈填充，以增加两相溶剂萃取时
的接触面 。例如用氯仿从川楝树皮的水浸液中萃取川楝素。将氯仿盛于萃取管内，
而比重小于氯仿的水提取浓缩液 贮于高位容器内，开启活塞，则水浸液在高位压力
下流入萃取管，
遇瓷圈撞击而分散成细粒，< br>使与氯仿接触面增大，
萃取就比较完全。
如果一种中草药的水浸液需要用比水轻的苯、乙 酸乙酯等进行萃取，则需将水提浓
缩液装在萃取管内，而苯、乙酸乙酯贮于高位容器内。萃取是否完全， 可取样品用
薄层层析、纸层析及显色反应或沉淀反应进行检查。




3
．逆流分配法（
CounterCurrentDistributio n
，
CCD
）：逆流分配法又称逆
流分溶法、
逆流分布法或反流分布 法。
逆流分配法与两相溶剂逆流萃取法原理一致，
但加样量一定，并不断在一定容量的两相溶剂 中，经多次移位萃取分配而达到混合
物的分离。本法所采用的逆流分布仪是由若干乃至数百只管子组成。 若无此仪器，
小量萃取时可用分液漏斗代替。预先选择对混合物分离效果较好，即分配系数差异
大的两种不相混溶的溶剂。并参考分配层析的行为分析推断和选用溶剂系统，通过
试验测知要经多少次的 萃取移位而达到真正的分离。逆流分配法对于分离具有非常
相似性质的混合物，往往可以取得良好的效果 。但操作时间长，萃取管易因机械振
荡而损坏，消耗溶剂亦多，应用上常受到一定限制。
4
．液滴逆流分配法：液滴逆流分配法又称液滴逆流层析法。为近年来在逆流分配
法基础上 改进的两相溶剂萃取法。。对溶剂系统的选择基本同逆流分配法，但要求
能在短时间内分离成两相，并可 生成有效的液滴。由于移动相形成液滴，在细的分
配萃取管中与固定相有效地接触、摩擦不断形成新的表 面，促进溶质在两相溶剂中
的分配，故其分离效果往往比逆流分配法好。且不会产生乳化现象，用氮气压 驱动
移动相，被分离物质不会因遇大气中氧气而氧化。本法必须选用能生成液滴的溶剂
系统，且 对高分子化合物的分离效果较差，处理样品量小（
1
克以下），并要有一
定设备。应用 液滴逆流分配法曾有效地分离多种微量成分如柴胡皂甙原小檗碱型季
铵碱等。液滴逆流分配法的装置，近 年来虽不断在改进，但装置和操作较繁。目前，
对适用于逆流分配法进行分离的成分，可采用两相溶剂逆 流连续萃取装置或分配柱
层析法进行。


三、沉淀法：



是在中草药提取液中加入某些试剂使产生沉淀，以获得有效成分或除去杂质的方
法。




1
．

铅盐沉淀法：铅盐沉淀法为分离某些 中草药成分的经典方法之一。由于醋
酸铅及碱式醋酸铅在水及醇溶液中，能与多种中草药成分生成难溶的 铅盐或络盐沉
淀，故可利用这种性质使有效成分与杂质分离。中性醋酸铅可与酸性物质或某些酚
性物质结合成不溶性铅盐。因此，常用以沉淀有机酸、氨基酸、蛋白质、粘液质、
鞣质、树脂、酸性皂甙 、部分黄酮等。可与碱式醋酸铅产生不溶性铅盐或络合物的
范围更广。通常将中草药的水或醇提取液先加 入醋酸铅浓溶液，静置后滤出沉淀，
并将沉淀洗液并入滤液，于滤液中加碱式醋酸铅饱和溶液至不发生沉 淀为止，这样
就可得到醋酸铅沉淀物、碱式醋酸铅沉淀物及母液三部分。




然后将铅盐沉淀悬浮于新溶剂中，通以硫化氢气体，使分解并转为不溶性硫化
铅而沉 淀。含铅盐母液亦须先如法脱铅处理，再浓缩精制。硫化氢脱铅比较彻底，
但溶液中可能存有多余的硫化 氢，必须先通人空气或二氧化碳让气泡带出多余的硫
化氢气体，以免在处理溶液时参与化学反应。新生态 的硫化铅多为胶体沉淀，能吸
咐药液中的有效成分，要注意用溶剂处理收回。脱铅方法，也可用硫酸、磷 酸、硫
酸钠、磷酸钠等除铅，但硫酸铅、磷酸铅在水中仍有一定的溶解度，除铅不彻底。
用阳离 子交换树脂脱铅快而彻底，
但要注意药液中某些有效成分也可能被交换上去，
同时脱铅树脂再生 也较困难。还应注意脱铅后溶液酸度增加，有时需中和后再处理
溶液，有时可用新制备的氢氧化铅、氢氧 化铝、氢氧化铜或碳酸铅、明矾等代替醋
酸铅、碱式醋酸铅。例如在黄芩水煎液中加入明矾溶液，黄芩甙 就与铝盐络合生成
难溶于水的络化物而与杂质分离，这种络化物经用水洗净就可直接供药用。




2
．

试剂沉淀法：例如在生物碱盐的溶液 中，加入某些生物碱沉淀试剂（见生
物碱性质下），则生物碱生成不溶性复盐而析出。水溶性生物碱难以 用萃取法提取
分出，常加入雷氏铵盐使生成生物碱雷氏盐沉淀析出。又如橙皮甙、芦丁、黄芩甙、
甘草皂甙均易溶于碱性溶液，当加入酸后可使之沉淀析出。某些蛋白质溶液，可以
变更溶液的
pH
值利用其在等电点时溶解度最小的性质而使之沉淀析出。此外，还
可以用明胶、蛋白溶液沉 淀鞣质；胆甾醇也常用以沉淀洋地黄皂甙等。可根据中草
药有效成分和杂质的性质，适当选用。


四、盐析法：

盐析法是在中草药的水提液中、加入无机盐至一定浓度，或 达到饱和状态，可
使某些成分在水中的溶解度降低沉淀析出，而与水溶性大的杂质分离。常用作盐析的无机盐有氯化钠、硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。例如三七的水提取液中加硫酸镁
至饱和状态，三七 皂甙乙即可沉淀析出，自黄藤中提取掌叶防己碱，自三颗针中提
取小檗碱在生产上都是用氯化钠或硫酸按 盐析制备。有些成分如原白头翁素、麻黄
碱、苦参碱等水溶性较大，在提取时，亦往往先在水提取液中加 入一定量的食盐，
再用有机溶剂萃取。


五、透析法：



透析法是利用小分子物质在溶液中可通过半透膜，
而大分子物质不能通过半透 膜
的性质，达到分离的方法。例如分离和纯化皂甙、蛋白质、多肽、多糖等物质时，
可用透析法 以除去无机盐、单糖、双糖等杂质。反之也可将大分子的杂质留在半透
膜内，而将小分子的物质通过半透 膜进入膜外溶液中，而加以分离精制：透析是否
成功与透析膜的规格关系极大。透析膜的膜孔有大有小， 要根据欲分离成分的具体
情况而选择。透析膜有动物性膜、火棉胶膜、羊皮纸膜（硫酸纸膜）、蛋白质胶 膜、
玻璃纸膜等。油常多用市售的玻璃纸或动物性半透膜扎成袋状，外面用尼龙网袋加
以保护， 小心加入欲透析的样品溶液，悬挂在清水容器中。经常更换清水使透析膜
内外溶液的浓度差加大，必要时 适当加热，并加以搅拌，以利透析速度加快。为了
加快透析速度，还可应用电透析法，即在半在半透膜旁 边纯溶剂两端




放置二个电极，接通电路，则透析膜中的带有 正电荷的成分如无机阳离子、生
物碱等向阴极移动，而带负电共荷的成分如无机阴离子、有机酸等则向阳 极移动，
中性化合物及高分子化合物则留在透析膜中。透析是否完全，须取透析膜内溶液进
行定 性反应检查。




一般透析膜可以自制：动物半透膜如猪、牛的 膀胱膜、用水洗净，再以乙醚脱
脂，
，
即可供用；
羊皮纸膜可将滤纸浸入50
％的硫酸
15
～
60
分钟，
取出铺在板上，
以水冲洗制得。其膜孔大小与硫酸浓度、浸泡时间以及用水冲洗速度有关；火棉胶
膜系将火棉胶溶于乙 醚及无水乙醇，涂在板上，干后放置水中即可供用，其膜孔大
小与溶剂种类、溶剂挥发速度有关，溶剂中 加入适量水可使膜孔增大，加入少量醋
酸可使膜孔缩小；蛋白质胶（明胶）膜可用
20
％明胶涂于细布上，阴干后放水中，
再加甲醛使膜凝固，冲洗干净即可供用。近来商品有透析膜管成品出 售，国外习称
“ViskingDialysisTubing”
，有各种大小厚度规格，可供 不同大小分子量的多糖、
多肽透析时选用。


六、结晶、重结晶和分步结晶法：



鉴定中草药化学成分 ，
研究其化学结构，
必须首先将中草药成分制备成单体纯品。
在常温下，
物质 本身性质是液体的化台物，
可分别用分馏法或层析法进行分离精制。
一般他说，中草药化学成分 在常温下多半是固体的物质，都具有结晶他的通性，可
以根据溶解度的不同用结晶法来达到分离精制的目 的。研究中草药化学成分时，一
旦获得结晶，就能有效地进一步精制成为单体纯品。纯化台物的结晶有一 定的熔点
和结晶学的特征，有利于鉴定。如果鉴定的物质不是单体纯品，不但不能得出正确
的结 论，还会造成工作上的浪费。因此，求得结晶并制备成单体纯品，就成为鉴定
中草药成分、研究其分子结 构重要的一步。

1
．杂质的除去：中草药经过提取分离所得到的成分，大多仍然含有 杂质，或
者是混合成分。有时即使有少量或微量杂质存在，也能阻碍或延缓结晶的形成。所
以在 制备结晶时，必须注意杂质的干扰，应力求尽可能除去。有时可选用溶剂溶出
杂质，或只溶出所需要的成 分。有时可用少量活性炭等进行脱色处理，以除去有色
杂质。有时可通过氧化铝，硅胶或硅藻土短柱处理 后，再进行制备结晶。但应用吸
附剂除去杂质时，要注意所需要的成分也可能被吸附而损失。此外，层析 法更是分
离制备单体纯品所常用的有效方法。




如果 一再处理仍未能使近于纯品的成分结晶化，则可先制备其晶态的衍生物，
再回收原物，可望得到结晶。例 如游离生物碱可制备各种生物碱盐类，羟基化合物
可转变成乙酸化物，
碳基化台物可制备成苯踪 衍生物结晶。
美登碱在原料中含量少，
且反复分离精制难以得到结晶，但制备成
3一滇丙基美登碱结晶后，再经水解除去
澳丙基，美登碱就能制备成为结晶。




2
．溶剂的选择；制备结晶，要注意选择合宜的溶剂和应用适量的溶剂。 合宜
的溶剂，最好是在冷时对所需要的成分溶解度较小，而热时溶解度较大。溶剂的沸
点亦不宜 太高。一般常用甲醇、丙酮、氯仿、乙醇、乙酸乙醋等。但有些化合物在
一般溶剂中不易形成结晶，而在 某些溶剂中则易于形成结晶。例如葛根素、逆没食
子酸（
ellagicacid
）在 冰醋酸中易形成结晶，大黄素（
emodin
）在吡啶中易于结
晶，萱草毒素（
hemerocallin
）在
N
，
N
一二甲基甲酞胺（
DMF
）中易得到结晶，
而穿心莲亚硫酸氢钠加成物在丙酮一水中较易得到结晶。又如蝙蝠葛碱 通常为无定
形粉未，但能和氯仿或乙醚形成为加成物结晶。




3
．结晶溶液的制备：制备结晶的溶液，需要成为过饱和的溶液。一般是应用
适量的溶 剂在加温的情况下，将化合物溶解再放置冷处。如果在室温中可以析出结
晶，就不一定放置于冰箱中，以 免伴随结晶析出更多的杂质。





“
新生态
”
的物质即新游离的物质或无定形的粉未状物质，
远较晶体物质的溶解
度大， 易于形成过饱和溶液。一般经过精制的化合物，在蒸去溶剂抽松为无定形粉
未时就是如此，有时只要加入 少量溶剂，往往立即可以溶解，稍稍放置即能析出结
晶。例如长春花总弱碱部分抽松后加入
1< br>．
5
倍量的甲醇溶解，放置后很诀析出长
春碱结晶。又如蝙蝠葛碱在乙醚中很难 溶解，但当其盐的水溶液用氨液碱化，并立
即用乙醚萃取，所得的乙醚溶液，放置后即可析出蝙蝠葛碱的 乙醚加成物结晶。





制备结晶溶液，除选用单一溶 剂外，也常采用混合溶剂。一般是先将化合物溶
于易溶的溶剂中，再在室温下滴加适量的难溶的溶剂，直 至溶液微呈浑浊，并将此
溶液微微加温，使溶液完全澄清后放置。例如
J
一细辛醚重结 晶时，可先溶于乙醇，
再滴加适量水，即可析出很好的结晶。又如自虎杖中提取水溶性的虎杖甙时，在已
精制饱和的水溶液上添加一层乙醚放置，既有利于溶出其共存的脂溶性杂质，又可
降低水的极性 ，促使虎杖俄的结晶化。自秦皮中提取七叶甙（秦皮甲素），也可运
用这样的办法。




结晶过程中，一般是溶液浓度高，降温诀，析出结晶的速度也快些。但是其结晶的颗粒较小，杂质也可能多些。有时自溶液中析出的速度太快，超过化合物晶核
的形成劝分子定向 排列的速度，往往只能得到无定形粉未。有时溶液太浓，粘度大
反而不易结晶化。如果溶液浓度适当，温 度慢慢降低，有可能析出结晶较大而纯度
较高的结晶。有的化合物其结晶的形成需要较长的时间，例如铃 兰毒甙等，有时需
放置数天或更长的时间。