TNF―α,INF―γ的诊断意义

2021年2月7日发(作者：抽脂手术费用)
TNF
―
α
,INF
―
γ
的诊断意义






摘要：目的

为更好地为儿童急性再生障碍性贫血体
内细胞因子浓度变化提供证据。方法

采再障组（
46
例）和
对照组（
48
例）静脉血，用酶联免疫吸附法 测定所取血样标
本中肿瘤坏死因子
-
α
（
TNF-
α
）和干扰素
-
γ
（
INF-
γ
）的
含量。并用独 立样本
t
检验分析两组外周血中细胞因子是否
存在显著性差异。结果

再障组患儿外周血
TNF-
α
和
INF-
γ
的含量均高于 对照组儿童。结论

通过对
TNF-
α
和
INF-
γ
的监测，可以有效的了解再障患儿疾病进展，治疗效果和
预后情况。





关键词：再生障碍性贫血；肿瘤坏死因子
-
α
；干扰素
-
γ




再生障碍性贫血可分为急 性再障和慢性再障两型。其中
急性再生障碍性贫血发病急、进展快，骨髓衰竭是其主要病
理过程 ，
常伴内脏出血、
严重感染，
常危及生命，
预后不良。
但是现在大部 分的病例被诊断为特发性免疫异常导致的再
生障碍性
[1]
。
细胞因子失调，
包括肿瘤坏死因子
（
TNF-
α
）
，
干扰素
（
INF-
γ
）
，
今年来研究发现在再生障碍性贫血的发病
机制中起到了重要的作用
[2]
。
儿童再生障碍性贫血已经成为
继儿童白血 病之后，儿童死亡率较高的一种血液系统疾病
[3]
。
本研究为了给临床上提供更好的 关于儿童急性再障体内
细胞因子浓度变化的证据。现报告如下：




1
资料与方法




1.1
一般资料

2010
年
6
月～
20 13
年
6
月我院诊治的
46
名急性再生障碍性贫血患儿。符合我国小 儿再生障碍性贫血
的诊断及分型标准
[4]
。患儿均为急性再生障碍性贫血发作。其中男
20
例，女
26
例，中位年龄
6.3
（
2
～
14
）岁。对照组
选择同期到我院体检中心体检的正常儿童，共
48
例，男
21
例，女
27
例，中位年龄
7
（2
～
16
）岁。两组儿童的年龄比
较和性别比例上无显著性差异，
P
≥
0.05
。




1.2
方法




1.2.1
标本收集

用肝素钠抗凝管采集静脉血
5ml
用 于
TNF-
α
测定。取用无肝素采集管采集静脉血
15ml
用于INF-
γ
测定。




1.2.2TNF-
α
含量的测定

以鼠源性的抗
TNF-
α
单抗以
每孔
400ng
的量，
在
PH
值 为
9
的碳酸
-
碳酸钠缓冲液中包被
96
孔板中，置
4
℃环境过夜。取出后洗涤
3
次，加入预先备
好的待测样本及标准的
TNF-
α
（制作标准曲线用）
。
37
℃孵
育
2h
。用洗涤液洗涤
3
次，加入羊抗鼠
TNF-
α
抗体，
37
℃
孵育
2h
后，再洗涤
3
次，加入辣根过氧化物酶标 记的兔抗
羊
IgG
，
37
℃孵育
2h
后加入底物显 色。
终止显色后在自动酶
标仪上测定浓度，并以标准曲线为基准求得
TNF-
α
的含量。
以（
x
±
s
）
ng/ml
的形 式表示结果。




1.2.3INF-
γ
含量测定

将上述采得的用于
INF -
γ
测定的
静脉血在室温凝固
30m in
，
1000r /m in
离心
15m in
，收集血
清。检测
IFN-
α
用人
IFN-
α
检测
Elisa
试剂盒，操作步骤为
分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步
操作相同）
、标准孔、待测样品孔 。在酶标包被板上标准品
准确加样
50
μ
l
，待测样品孔中先加样品 稀释液
40
μ
l
，然后
再加待测样品
10
μ
l
（样品最终稀释度为
5
倍）
。将样品加于
酶标板孔底部，尽量不 触及孔壁，轻轻晃动混匀。用封板膜
封板后置
37
℃温育
30min
。将
20
倍浓缩洗涤液用蒸馏水
20
倍稀释后备用。小心揭掉封板膜，弃去液 体，甩干，每孔加
满洗涤液，静置
30s
后弃去，如此重复
5
次，拍 干。每孔加
入酶标试剂
50
μ
l
，空白孔除外。再用封板膜封板后置
37
℃
温育
30min
。小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加 满
洗涤液，静置
30s
后弃去，如此重复
5
次，拍干。每孔先加入显色剂
A50
μ
l
，
再加入显色剂
B50
μ
l
，
轻轻震荡混匀，
37
℃
避光显色
15min< br>，
每孔加终止液
50
μ
l
，
终止反应
（此时 蓝色
立转黄色）
。以空白孔调零，
450nm
波长依序测量各孔的吸
光度（
OD
值）
。终止显色后在自动酶标仪上测定浓度，并以
标准曲线为基准 求得
IFN-
α
的含量。以（
x
±
s
）
n g/ml
的形
式表示结果。




1.2.4
统计学方法

应用
SPSS1 12.0
统计学软件进行统计
学分析，
计量资料采用均
x
±

s
表示，
结果分析采用独立样
本的
t
检验，以
P <0.05
为差异有显著性。




2
结果




2.1 TNF-
α
含量的对比结果

再障组患儿外周血中
TNF-
α
含量的平均值是：
（
56.51
±
20.02
）

ng/ml
，而对照组的患
儿的平均值为（
25.88
±
1 0.11
）
ng/ml
。通过独立样本
t
检验
分析，
P=0.008<0.05
，差异具有显著性。




2.2 INF-
γ
含量的对比结果

再障组患儿外周血中
INF-
γ
含量的平均值是：
（
21.2
±
9.22
）

ng/ml
，而对照组的患儿
的平均值为
（
8.87
±
10.11
）
ng/ml
。
通过独立样本
t检验分析，
P=0.001<0.05
。




3
讨论




近年来，越来越多的证据表明， 再生障碍性贫血发病与
免疫异常有关。已经有不少学者从细胞因子水平方面研究再
生障碍性贫血
[5]
。
到目前为止虽然再生障碍性贫血精确的发
病机制还没有被完全的阐明 ，
但是大量证据表明
T
细胞介导
的免疫调节异常在再障的发病机理中发挥了重 要的作用。
Th1
功能失调被认为是再障发病的一个重要原因，
Th1
功能< br>活跃导致
TNF-
α
和
INF-
γ
过表达成为了再障 炎症改变的基
础
[6]
。




肿瘤坏 死因子，
是单核
-
巨噬细胞分泌的单核细胞刺激因
子，
在炎症和免疫 反应中起着重要的作用。
人的
TNF
具有两