谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)试剂盒说明书

2021年2月7日发(作者：滴虫病的治疗)

货号：
MS1202
规格：
100
管
/96
样

谷胱甘肽过氧化物酶（
GSH-Px
）试剂盒说明书

微量法

注意：正式测定之前选择
2-3
个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

GSH-Px
是谷胱甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱甘肽
（
GSH
）
氧化的主 要酶之一。
GSH-Px
不仅能够特异地催化还原型谷胱甘肽与
ROS
反应， 生成氧化型谷胱甘肽
GSSG
，从而保护生物膜
免受
ROS
的损害， 维持细胞的正常功能；而且具有保护肝脏、提高机体免疫力、拮抗有害金属
离子对机体的伤害和增加机体 抗辐射等能力。

测定原理：

GSH-Px
催化
H
2
O
2
氧化
GSH
，
产生
GSSG
；< br>谷胱甘肽还原酶
（
GR
）
催化
NADPH
还原
GSSG
，
再生
GSH
，
同时
NADPH
氧化生 成
NADP
+
；
NADPH
在
340nm
有特征吸 收峰，而
NADP
+
没有；通过测定
340nm
光吸收
减少 速率来计算
GSH-Px
活性。

自备仪器和用品：

低温 离心机、
水浴锅、
可调节移液器、
紫外分光光度计
/
酶标仪、
微量石英比色皿
/96
孔板、

和蒸馏水。

试剂组成和配置：

试剂一：液体×
1
瓶，室温保存。

试剂二：粉剂×
1
瓶，
4
℃保存。

试剂三：液体×
1
支，
-20
℃保存。

混合试剂配制：临用前，在试剂二中加入试剂一
20mL
，充分震荡溶解后加入全部试剂三，
混匀。（当天用完）

试剂四：液体×
1
瓶，
4
℃保存。

粗酶液提取：

1.
组织：按照组织质量（
g
）：试剂一 体积
(mL)
为
1
：
5~10
的比例（建议称取约
0.1g
组织，加
入
1mL
试剂一）进行冰浴匀浆。
8000g，
4
℃离心
10min
，取上清置冰上待测。

2.
细菌、真菌：按照细胞数量（
10
4
个）：试剂一体积（
mL
）为
500~1000
：
1
的比例（建议
500
万细胞加 入
1mL
试剂一）
，
冰浴超声波破碎细胞
（功率
300w< br>，
超声
3
秒，
间隔
7
秒，
总时间
3min
）
；
然后
8000g
，
4
℃，离心10min
，取上清置于冰上待测。

3.
血清等液体：直接测定。

GSH-Px
测定操作：

1.
分光光度计
/
酶标仪预热
30min
，调节波长到< br>340nm
，蒸馏水调零。

2.
混合试剂在
25
℃或者
37
℃（哺乳动物）水浴中预热
30min
。

3.
空白管：依次在微量石英比色皿或
96
孔板中加入
20
μ
L
蒸馏水、
160
μ
L
预热的混合试剂，
20
μL
试剂四，迅速混匀后于
340nm
处测定第
10s
和第190s
的吸光值，分别记为
A
空
1
和
A
空< br>2
。
△
A
空白管
= A
空
1
﹣
A
空
2
。

4. 测定管：依次在微量石英比色皿或
96
孔板中加入
20
μ
L上清液、
160
μ
L
预热的混合试剂，

20
μ
L
试剂四，迅速混匀后于
340nm
处测定第
10s
和第
190s
的吸光值，分别记为
A
测
1
和
A
测
2
。
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