如图所示的实验试管口-试管移植后想呕吐
2014
学年
秋季
学期
第
16
周
总课时:
2
课程名称
任课教师
班
级
畜禽繁殖与改良
白绪珍
三年级养殖班
时间
职称
2014
年
12
月
1
日
中学一级
2
星期
节次
教具安排
星期一
第
5-6
节
多煤体
授课时数
教学题目
第
9
章
动物繁殖新技术
第一节
胚胎移植技术
提问法、讲
教学方法
授法、练习
法
教学内容目标要求
教学内容:
⑴掌握胚胎移植的生理基础和处理程序
⑵掌握胚胎移植的基本原则
⑶了解现代动物繁殖新技术
重点难点:⑴掌握胚胎移植的生理基础和处理程序
⑵
了解现代动物繁殖新技术
情感目标
能力点:培养学生热爱生命、关爱生活的情趣
专业素质渗透点:通过讲解
“ 胚胎移植技术
”让学生了解生物界基本结构的统一性,
使学生初步建立唯物主义进化论意识。< br>
【教学过程组织】
清点人数
(
1
—
2
分钟)
复习导入:卵 巢囊肿有哪几种情况?
(
1
—
3
分钟)
?
进入新课
一、胚胎移植的意义
(
20
分钟)
1
.充分发挥优良母畜的繁殖潜力
缩短优了良母畜的繁殖周期同时可产生更多的后代。
2.
缩短世代间隔,及早进行后裔测定能
通过重复超数排卵,不断移植, 使后代总数大大地增
加,可及早地对后代进行后裔测定,
MOET
育种已成为现代育种 工作的有力手段。
3.
增加双胎率
在肉牛业和肉羊业中通过胚 胎移植增加双胎率。不但提高了供体母畜的繁殖
率,同时也提高了受体母畜的繁殖率,从而大大提高了生 产效率。
4.
保存品种资源
胚胎长期保存是保存动物品种资源 的理想方法。
冷冻胚胎和冷冻精液共同构
成动物优良性状的基因库。
5.
防止疾病传播
在养猪业中,采用胚胎移植技术代替剖腹取仔的方法可 培育无特异病原体
(
SPE
)猪群。
6.
使不孕母畜获得生育能力
对于不能妊娠的母畜,可以根据具体情况专门作为供体或受体,
继续发挥其繁殖作用。
7.
促进基础理论研究
胚胎移植技术为动物繁殖生理学、
生物化 学、
遗传学、
细胞学、
胚胎学、
免疫学、动物育种学和进化等学科开辟了新的 试验研究途径。
8.
满足畜牧业现代化的需要
胚胎移植可以使 优良母畜的繁殖效率接近或达到生物学最高限
度,并且能够迅速改进家畜的品质。
二、胚胎移植的基本原则
(
20
分钟)
(一)胚胎移植前后供体和受体所处环境的同一性
1.
在分类学上的同属性
在分类学上属于同一个种。
2.
生理上的一致性
一般供、受体发情同步差要求在±
24h
以内。
3.
解剖部位的一致性
胚胎采自供体的输卵管就移到受体的输卵管,采自供体的子宫角就移至
受体的子宫角。
(二)胚胎发育的期限
胚胎采集和移植的期限(胚胎日龄)不能超过发情周期黄体的寿命,
(三)胚胎的质量
在胚胎移植全部操作过程中,胚胎不应受任何不良因素的影响。
(四)供、受体的状况
1.
生产性能和经济价值
供体的生产性能要高于受体,经济价值要大于受体,这样才能体现胚
胎移植的优越性。
2.
全身及生殖器官的生理状况
供、受体应健康、营养良好、体质健壮, 特别是生殖器官应具
有正常生理机能,否则会影响胚胎移植效果。
三、胚胎移植技术
(
28
分钟)
胚胎移植的过程,在各种 家畜基本相同,都是要经过供体、受体的选择,供体超排处理,受体
同期发情处理,配种(输精)
,收集胚胎(采卵)和移植胚胎(移卵)等步骤。
(一)供体和受体的选择
1.
供体的选择
(
1
)生产性能高,经济价值大,具备遗传优势,在育种上有价值。
(
2
)既往繁殖史正常,无遗传缺陷,具有良好的繁殖能力,且分娩顺利。
(
3
)体质健壮,膘情适度。
2.
受体的选择
受体母畜可选用非优良品种个体,但应具有良好的繁殖性能和健康体况,可选
择与供体发情周期 同步的母畜为受体。
(二)药品和器械的准备
1.
药品
FSH
、
HCG
、
PGF
2
?
;麻醉剂;生盐理水 、
75%
酒精、
2%
碘酒、青霉素。
2.
器械
10ml
和
1ml
注射器、手术刀、剪子、镊 子、止血钳、创布、缝合针、线及手术台;冲
胚管、移胚管、显微镜、表面皿、凹玻片、拔胚针等。
(三)供体的超数排卵
超排技术通常用于单胎家畜,其目的是让优良母畜排 出大量卵子,充分发挥其繁殖潜力,是胚
胎移植中的一个重要环节。
1.
超排方法
(
1
)
PMSG
或
FSH
超排
给供体母畜注射
PMSG
或
FSH
,发情开始后
12
~< br>16h
和
20
~
24h
各配种
(输精)一次,并于第 一次配种后静脉注射
HCG
或
LH
,以便排出更多卵子。激素的应用时间和剂 量
因家畜种类不同而有差异。
(
2
)配合应用前列腺素(
PG
)
PG
的用法 通常是在应用
PMSG
以后大约
48h
进行肌注。牛的用
量因
PG
种类而异,
PGF
2
?
为
30mg
,
15
甲基
PGF
2
?
为
2mg,
氯前列烯醇为
500
?
g
;绵羊和山羊的用量为
牛的一半。
(
3
)
PMSG
与抗
PMSG
配合使用
抗
PMSG
可以消除
PMSG
的残留作用,
明显增加可用胚 胎数,
提
高超排效果。
2.
超排效果的评判标准
超排是胚胎移植中最难控制的一个环节,
在实践中只要能使一半以上
处理母畜达到满意结果 ,则认为超排是成功的。
随堂练习
(
3
—
5
分钟)
通过对当堂课内容的总结来了解学生的掌握情况,并对学生有困惑的地方进行再一次的讲解。
1
.超数排卵的方法有
、
、
2.
胚胎移植的意义有
、
、
、
、
、
、
、
3
.胚胎移植的基本原则有
、
、
、
小结:
采用学生互相提问方式
(
3
—
10
分钟)
如:
A
学生问:“超数排卵的方法有?由
B
学生回答等
课后作业:
(
1
—
2
分钟)
1.
胚胎移植的基本程序是什么?
2.
在胚胎移植时如何选择供体和受体?
3.
如何对供供进行超数排卵?
板书设计:
第一节
胚胎移植技术
一、胚胎移植的意义
二、胚胎移植的基本原则
(一)胚胎移植前后供体和受体所处环境的同一性
(二)胚胎发育的期限
(三)胚胎的质量
(四)供、受体的状况
三、胚胎移植技术
(一)供体和受体的选择
(二)药品和器械的准备
(三)供体的超数排卵
教后感:
利用多媒体辅助展示教学过程中 遇到的抽象问题,多媒体设计直观性,这充分调动了学生
的积极性、主动性和创造性,从而更容易地达到 了教学目的,使学生在愉快、轻松的环境中获得知
识,培养了技能
。
2014
学年
秋季
学期
第
16
周
总课时:
4
课程名称
任课教师
班
级
教学题目
畜禽繁殖与改良
白绪珍
三年级养殖班
时间
职称
授课时数
第九章动物繁殖新技术
第一节
胚胎移植技术
2014
年
12
月
5
中学一级
2
星期
节
次
教具安排
教学方式
星期
5
第
4-5
节
多煤体
演示法、
讲授
法、练习法
教学内容目标要求
教学内容:⑴
.
掌握受体的同期发情处理方法。
⑵
.
掌握采胚方法和移胚方法。
重点难点:⑴受体的同期发情处理
⑵胚胎的采集和移胚
能力点:掌握胚胎的采集和移植
情感目标:
专业素质渗透点:通过讲解“胚胎的移植”的基本知识,让学生了解畜 禽体生长的一
般规律,使学生建立科学的认识观
教学过程组织:
清点人数
(
1
—
2
分钟)
复习导入:卵 巢囊肿有哪几种情况?
(
3
—
5
分钟)
?
进入新课
(四)
、受体的同期发情
(
20
分钟)
当前比 较理想的同期发情药物是前列腺素及其类似物,
其剂量因
PG
种类和用法不同而异。< br>15-
甲基
PGF2
?
2mg
肌注,氯前列烯醇
500
?
g
肌注。各种家畜实施超排处理的具体方法见本书
第
5章家畜繁殖技术中的发情控制技术部分。
(五)供体的发情鉴定和配种
超排处理结束后,要密切观察供体的发情征状,为确保卵子受精,一般在发情
8
~
1 2h
输精一
次,以后间隔
8
~
12h
再输精一次,并且要加 大输精量。
(六)胚胎采集
在配种或输精后适当时间,从超排供体回收胚 胎,准备给受体移植,称胚胎采集或胚胎回收,
简称采胚。
1.
冲胚液和培养液的配制
现在多采用杜氏磷酸盐缓冲液
(PBS
)
,
不但可用于冲洗、
采集胚胎,
还用于体外培养、冷冻 保存和解冻胚胎。
冲胚液犊牛血清含量一般为
3%
(
1%
~
5%
)
,培养液血清含量为
20%
(
1%
~50%
)
。犊牛血清需加
热(
56
℃水浴
30min< br>)灭活。
2.
采胚时间
根据配种时间、排卵的大致时间 、胚胎的运行速度、胚胎的发育阶段、畜种、胚
胎所处部位及采胚方法等因素来确定是适宜的采胚时间。
3.
采胚方法
采胚方法分为手术法和非手术法两种。手术法适 用于各种动物,尤其是绵羊、山
羊、猪及实验动物;非手术法仅适用于牛、马等大家畜,且只能在胚胎进 入子宫后进行。
(
1
)手术法采胚
A
母畜保定
一种方法是用全身或后躯麻醉,母畜进行仰卧保定。另一种方法是用局部 麻醉,
使母畜站立于六柱栏中保定。两者的保定姿势均为前低后高的方式。
B
麻醉
全身麻醉可用普鲁卡因、酒精等;局部后躯麻醉用普鲁卡因、利多卡因进行腰 荐或尾
椎硬膜外腔注射,手术部位再以利多卡因作皮肤浸润麻醉。
C
手术部位
母牛可在乳房至脐孔之间的白线上剖腹,切口长约
10cm;羊在乳房左侧切口,
切口长度
4
~
6cm
。
D
采胚
主要包括有输卵管冲胚法、子宫角冲胚法和输卵管—子宫角冲胚法三种。
配教材图图
9-2
、图
9-3
ES
防止手术部粘连的方法
①不要用金属器械挟持生殖器官。
②所用手套、棉花、纱布等术前要用生理盐水浸湿,以防粘附于生殖器官上。
③在生殖器官表面撒涂低浓度肝素液、樟脑油等,以防止其表面附着血或血凝块。
④缝合要牢固、紧密,防止术后发生疝症。
(
2
)非手术法采胚
由于手术法采胚在生产应用中受到限制,目 前在马、牛等大家畜都用采
胚管进行非手术法采胚,一般在配种后
7
(
6~
8
)天进行。
供体牛的保定和麻醉同手术法采胚,
采胚时先 用扩张棒对子宫颈进行扩张
(青年牛尤为必要)
。
采胚管消毒后,将无菌不锈钢导杆插 入采胚管内。将采胚管经子宫颈缓慢导入一侧子宫角基部,由
助手抽出部分不锈导杆,操作者继续向前推 进采胚管,当达到子宫角大弯附近时,助手从进气口注
入
12
~
25ml气体。当气囊位臵和充气量合适时,抽出全部不锈钢导杆。助手用注射器吸取事先加
温至
3 7
℃的冲胚液,从采胚管的进水口推进,进入子宫角内,再将冲胚液连同胚抽回注射器内,
如此 反复冲洗和回收
5
~
6
次,将每次回收的冲胚液收入集胚器内,并臵于
37
℃的恒温箱或无菌检
胚室内等待检胚。一侧子宫角冲胚结束后,按上边方法再冲洗另一侧 子宫角。
配教材图
9-4
4.
检胚
检胚应 在
20
~
25
℃的无菌操作室内进行。在立体显微镜下,检查收集到的胚胎数 ,
并用一细检胚吸管将胚胎移至新鲜培养液内,
在放大
40
~
200
倍的复式显微镜下,
进行形态学观察,
选出适合于移植的正常胚胎。
配教材图
9-5
、图
9-6
(七)胚胎保存
1.
常温保存
指在常温(
15
~
25
℃)下保存胚胎。通常采用含
20%
犊牛血清的
PBS
保存液,可
保 存胚胎
4
~
8h
。
2.
低温保存
< br>指在
0
~
10
℃的较低温度下保存胚胎的方法。在此温度下,胚胎细胞 分裂暂停,
新陈代谢速度显著减慢,所以较常温保存的存活时间要长。
3.
冷冻保存
指在干冰(
-79
℃)和液氮(
-196
℃)中保存胚胎。其最大优点是胚胎可以长期
保存,而对其活力无影响。胚胎冷冻方法 有以下几种:
(
1
)逐步降温法
这是一种传统方法,本法的优点是解冻后胚胎存活率较高,但操作程序比
较复杂。
(
2
)一步细管法
即在细管内用非渗透性蔗糖溶液一步脱除抗冻 剂(甘油)的方法。其特点
是从解冻到移植的全过程简单易行,利于在生产中推广应用。
(
3
)玻璃化法
用这种方法冷冻时,胚胎内外液体能同时玻璃化,不会形成冰晶,能较好地
保护胚胎。
(八)胚胎移植
胚胎移植就是将采取的可用胚胎移给受体母畜,亦称卵的移植,简称移卵。
1.
移胚部位
早期胚胎少于
8
细胞时,一般应移植于输 卵管,多于
8
细胞应移植于子宫角。
2.
移胚方法
< br>与采胚方法相似,
也分为手术法与非手术法两种,
前者适用于不能进行直肠操作
的中小家畜,后者适用于大家畜。
(
1
)手术法移植
与采胚方法相似,对母畜进行保定、麻醉。以山羊为例,先在其乳房一侧
作一平行于腹中线的切口,暴露 输卵管和子宫角,再将胚胎注入输卵管或子宫角。
无论是子宫内移植还是输卵管移植,
都要避免把空气注入。
移植完毕后将输卵管及子宫角送回
腹腔,按回收手术中的要求缝合腹壁 创口,术后做好移植记录。
(
2
)非手术法移胚
非手术法移胚只适用于牛、马等大家畜。与采胚相似,先将母畜保定麻
醉后,再移胚。
3.
影响胚胎移植妊娠率的因素
(
1
)胚胎因素
包括胚胎质量、日龄、移植胚胎的数量、提供胚胎的供体、胚胎在体外培养
的时间、鲜胚和冻胚 等。
(
2
)母体因素
包括供、受体发情同期化程度, 受体的孕酮水平,受体的营养,子宫、卵巢
的生理状况等。
(
3
)其他因素
包括自然发情与人工诱导发情,移植器污染程度以及操作者熟练程度等。
(
3
—
5
分钟)
1
.
检胚的方法为
2
.
胚胎保存的方法有
、
、
3
.
胚胎移植的部位有
4
.
手术法移植胚胎的方法有
、
,
非手术法移胚的方法有
、
5
.
影响胚胎移植妊娠率的因素有
小结:
采用学生互相提问方式
(
3
—
10
分钟)< br>
如:
A
学生问:“胚胎的保存方法有?由
B
学生回答
……
课后作业:
(1
—
2
分钟
)
1
、复习本节所讲内容;
2
、简述胚胎移植的基本过程
板书设计
:
第一节
胚胎移植技术
(四)受体的同期发情
(五)供体的发情鉴定和配种
(六)胚胎采集
1.
冲胚液和培养液的配制
2.
采胚时间
3.
采胚方法
(
1
)手术法采胚
(
2
)非手术法采胚
4.
检胚
(七)胚胎保存
1.
常温保存
2.
低温保存
3.
冷冻保存
(八)胚胎移植
1.
移胚部位
2.
移胚方法
3.
影响胚胎移植妊娠率的因素
(
1
)胚胎因素
(
2
)母体因素
(
3
)其他因素
教后感
:
本节课采用多媒体辅助教学,
完成了本节课的教学目标,
课堂中 学生合作精神得到了发扬,
不足:学生知识点的掌握有待加强
2014
学年
秋季
学期
第
17
周
总课时:
6
课程名称
任课教师
班
级
教学题目
畜禽繁殖与改良
白绪珍
三年级养殖班
时间
职称
授课时数
第九章动物繁殖新技术
第二节
胚胎生物工程技术
2014
年
12
月
8
中学一级
2
星期
节
次
教具安排
教学方式
星期一
第
5-6
节
多煤体
演示法、
讲授
法、练习法
教学内容目标要求
教学内容:⑴
.
了解体外受精及性别控制技术
⑵
.
关于卵核移植与动物克隆技术
(3).
动物转基因技术
重点难点:⑴体外受精技术
⑵胚胎分割与嵌合技术
能力点:培养学生用发展有眼光看待万物思想意识
情感目标:
专 业素质渗透点:通过讲解“胚胎生物工程技术”的基本知识,让学生了解畜禽养殖
前沿技术,使学生建立 科学的世界观
教学过程组织:
清点人数
(
1
—
2
分钟)
复习导入:
(
3
—
5
分钟)
胚胎保存的方法?
胚胎移植的方法
进入新课
一、体外受精技术(
20
分钟)
(一)
、体外受精的意义
1
、充分发挥优良母畜的繁殖力
2
、评价公畜的繁殖性能
3
、作为其他相关研究的手段
(二)体外受精技术
1
、精子采集与获能处理
(
1
)精子采集:可采用射出精子或附睾尾精子
(
2
)精子获能:精子可在体内子宫中获能,也可在体外获能
2
、卵母细胞采集与成熟培养
(
1
)卵母细胞采集
将动物物的卵巢取出,用生理盐水冲洗后,放 入盛有生理盐水的保温瓶内运回实验室待用,用
注射针头抽出卵母细胞
(
2
)卵母细胞成熟培养:将卵母细胞放在培养液中,在温度
39
℃和
5%
CO
2
气相条件下培养
24
小时
左右,当卵母细胞达到 成熟时,卵黄周隙排出第一极体。
3
、精卵体外受精
将成熟培 养的卵母细胞先用精液洗涤
3
次,然后放入卵母细胞,再加入获能精子,
臵于
CO
2
培养箱孵育。
4
、受精的判定
出现下列 现象为受精:精子穿入卵内、精子头部膨大、精子头部和尾部在卵细胞质内存在、第二极
体的排出、原核 的形成和正常的卵裂等现象即确定为受精
5
、体外受精(早期胚胎)的培养发育
二、性别控制技术
(一)胚胎性别控制技术
1
、
X
、
Y
精子的分离
(
1
)理论依据
(
2
)分离方法
2
、改变受精环境
3
、卵子的无性繁殖
(二)
、胚胎性别鉴定技术
1
、细胞学方法
(
1
)胚胎分割
(
2
)羊胚预培养及有丝分裂阻滞
(
3
)制作染色体标本
(
4
)染色及镜检
2
、生物化学微量分析法
3
、免疫学方法
(
1
)
、细胞毒性分析法
(
2
)
、间接免疫荧光法
4
、分子生物学方法
三、卵核称植与动物克隆技术
(一)核移植与克隆的意义
1
、研究细胞核与细胞质的遗传作用
2
、研究配子发生过程中核的印迹作用
3
确定动物早期胚胎发育期间核的分化程度
4
、生产大量克隆动物
5
、克隆动物技术可为生物药物开发和珍稀动物保护做出重大南献
(二)
、核移植和动物克隆的原理
(三)操作技术
1
、核移植技术
(
1
)获取胚胎和卵母细胞
(
2
)显微操作
(
3
)电融合
(
4
)培养
(
5
)移植
以产生克隆绵羊为例,克隆技术步骤大致如下:
(
1
)
将胚盘细胞培养在饲养层上,建立长久的细胞系
(
2
)
除去受体卵母细胞的核及含有中期板的少量细胞质
(
3
)
从全能细胞系取出
1
个细胞与去核卵母细胞融合
(
4
)
将重建的胚胎移植给临时受体羊,并在
7
天后鉴定其发育情况
(
5
)
将发育成的桑椹胚和囊胚移植给其他绵羊,使其发育到产出羔羊
四、胚胎分割技术
(一)胚胎分割技术
1
、胚胎分割的方法
(
1
)对
2-16
细胞期胚胎,用显微镜操作仪上的玻璃针或刀片,将每个卵裂或两个卵裂球为一组或
4
个卵裂球 为一组进行分割,分别放入一个空透明带内,然后进行移植
(
2
)与上述方 法相同,将桑椹胚或早期囊胚一分为二或一分四,将每块细胞团移入一登上空透明
带内,然后进行移植< br>
2
、胚胎分割的程序
(
1
)用促性腺激素促使牛、羊超数排卵
(
2
) 通过外科手述取出
2
、
4
、
8
等分裂球的胚胎
(
3
)将秀明带中的卵裂球分离,用吸管吸出
(
4
)将分离的分裂球放入其他动物预先掏空的秀明带中,在每个透明带中放入
1
—
2< br>个卵裂球
(
5
)将分割后的胚胎埋藏于琼脂中,放入羊或其他动物输 卵管中培养
3-4
天
(
6
)将胚胎冲洗出来经鉴定后,再作移植用
(二)胚胎嵌合技术
1
、嵌合体的制作方法
(
1
)早期胚胎聚合法
①采集胚胎
②除去透明带
③胚胎的聚合
④聚合胚胎的培养
⑤嵌合体的移植
⑥嵌合体的鉴定
(
2
)分裂球聚合法
(
3
)囊胚注入法
2
、嵌合体的标记及鉴定方法
五、动物转基因技术
(一)外源基因导入的主要方法
1
、原核显微注射法
2
、反转录病毒感染胚胎法
3
、胚胎干细胞法子、精子载体法
(二)基因导入的应用前景
1
、动物育种
2
、生产动物蛋白
六、胚胎干细胞技术
(一)
、形态与功能特点
1
、形态学特征
2
、功能特征
(二)胚胎干细胞建系技术要点
1
、饲养层的制备及分化抑制物的选择
2
、早期胚胎及
PGC
的选择和分离
3
、早期胚胎及
PGC
的培养和
ESC
的分离传代
4
、
ESC
的鉴定及保存
(
3
—
5
分钟)
1
体外受精的意义为
2
胚胎性别鉴定技术
、
、
、
3
核移植技术
4
核移植及动物克隆的意义是
。
5
嵌合体的制作方法
论
如图所示的实验试管口-试管移植后想呕吐
如图所示的实验试管口-试管移植后想呕吐
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