试管婴儿需要注意什么细菌生长测定

2021年2月2日发(作者：试管取卵30个第二天不会腹水)
细菌生长测定





目的：测量细菌在液体批次培养

(batch culture)
中的生长，绘制生长曲线图并
计算生长速率。





原理：测量细菌在液体培养基中的生长速度，必须先测出细菌族群在培养期间
不同时 间点的密度或数量，再绘图或以电脑软体求出族群增长的速率。


而测量
族群密度常用的方法有三：

(1)
直接计数法在显微镜下 算出固定体积培养液内
的细胞数目，由于细菌细胞太小，容易与溶液中的灰尘混淆，此方法大多用于酵< br>母菌、单细胞藻类等较大型的真核微生物；

(2)
混浊度利用分光光度计以波长

590 - 600 nm
的可见光测量细菌培养液的混浊度，通常以

OD
590

表示，其数值
在

0.9
以下时与细菌细胞密度呈直线关系，读取数值超过

0.9
时则先做

10
倍
稀释再测量混浊度，获得的细菌密度乘以

10
即得到原本的密度；

(3)
平盘测
定法将细菌培养液作连续

10
倍稀释后取一定体积涂在平 盘培养基上
，
培养后计
算培养基上的菌落数目以推算出原本的细胞密度
。

第三个方法将在下一次实验
中操作，本次实验使用第二个方法，为最便利快速 而常用的细菌生长测量法。





材料：

(
每组

)


i.
含

5 ml LB(tryptone 1%, yeast extract 0.5%, NaCl 0.5%)
培养基的白色旋
盖试管

×
6


ii.
含

5 ml
以

NH
4

+

为氮源的葡萄糖低限培养基

(glucose
minimalmedium) (glucose 2%, Na
2
HPO
4
1.3%, KH
2
PO
4
0.3%, NaCl
0.05%, NH
4
Cl 0.1% )
的白色旋盖试管

×
3


iii.
含

5 ml
以

NO
3

-

为氮源的葡萄糖低限培养基

(glucose
minimalmedium) (glucose 2%, Na
2
HPO
4
1.3%, KH
2
PO
4
0.3%, NaCl
0.05%, KNO
3
0.19%)
的白色旋盖试管

×
3


iv.
过夜大肠杆菌培养液

(
培养在以

NH
4
Cl
为氮源的葡萄糖低限培养基
中

) ×
1


v.
无菌水

100ml ×
1


vi.
空悬盖试管

4
支



vii. P1000
微量吸管一支、

1000 ml
微量吸管尖ㄧ盒、标签纸

8
个、透明
胶带、小烧杯一个





全班：分光光度计





步骤：



1.
在装有

LB
培养液的四支试管盖上贴上标签
，
注明组别
，
并分别标示为

A
、

B
、

C
与

D
。



2.
将分光光度计电源打开并暖机

10
分钟。


依照使用说明将光度计归零，将
波长定为

590 nm
。



3.
以微量吸管吸取

100
?
l
细菌培养液，加入四支试管中。



4.
将含有新鲜培养液的试管插入分光光度计中归零之后，将已接种细菌的试管
插入 ，加盖后读出培养液的

OD
值并作纪录，

OD
值若未达

0.1
可再多加
一点菌液，但每一支试管应加入相同体积菌液。