雌激素低能试管吗细菌平板计数法

2021年2月1日发(作者：试管取精前吃伟哥可以么)
操作步骤


l
．编号


取无菌平皿< br>9
套，分别用记号笔标明
10-4
、
10-5
、
10 -6
。
(
稀释度
)
各
3
套。另取
6
支盛有
4.5mL
无菌水的试管，依次标是
10-1
、
10-2< br>、
10-3
、
10-4
、
10-5
、
10- 6
。


2
．
稀释


用
lmL
无菌吸管吸取
lmL
已充分混匀的大肠杆菌菌县液
(
待测样 品
)
，
精确地放
0.5ml
至
10-1
的试管中， 此即为
10
倍稀释。将多余的菌液放回原菌液中。


将
1 0-1
试管置试管
振荡器上振荡，
使菌液充分混匀。
另取一支
lml
吸管插入
10- 1
试管中来回吹吸菌悬液三次，
进一步将菌体分散、混匀。 吹吸菌液时不要太猛太快，吸时吸管伸人管底，吹时离开液面，
以免将吸管中的过滤棉花浸湿或使试管内 液体外溢。
用此吸管吸取
10-1
菌液
lmL
，
精确地放< br>0.5mL
至
10-2
试管中，此即为
100
倍稀释。??其 余依次类推。


放菌液时吸管尖不要碰到
液面，即每一支吸管只能接触一个 稀释度的菌悬液，否则稀释不精确，结果误差较大。


3.
取样


用三支
1mL
无菌吸管分别吸取
10-4
、
10 -5
和
10-6
的稀释菌悬液各
lmL
，对号放入
编好号的 无菌平皿中，每个平皿放
0.2mL
。


不要用
lmL< br>吸管每次只靠吸管尖部吸
0.2mL
稀
释菌液放入平皿臼，这样容易加大同一稀 释度几个重复平板间的操作误差。


4
．倒平板．尽快向上述盛有不同稀释 度菌液的平皿中倒入融化后冷却至
45
℃左右的牛肉膏
蛋白胨培养基约
15< br>毫升
/
平皿，置水平位置迅速旋动平皿，
使培养基与菌液混合均匀，而又
不使培养基荡出平皿或溅到平皿盖上。
由于细菌易吸附到玻璃器皿表面，
所以菌液加入到培< br>养皿后，应尽快倒入融化并于已冷却至
45
℃左右的培养基，立即摇匀，否则细菌将不易 分
散或长成的菌落连在一起，影响计数。

待培养基凝固后，将平板倒置于
37
℃恒温培养箱中
培养。

5
．计数


培养
48h
后，取出培养平板，算出 同一稀释度三个平板上的菌落平均数，并按下
列公式进行计算，


每毫升中 菌落形成单位
(cfu)=
同一稀释度三次重复的平均菌落数×稀释
倍数×
5
。

一般选择每个平板上长有
30~300
个菌落的稀释度计算每毫 升的含菌量较为合适。
同一稀释度的三个重复对照的菌落数不应相差很大，
否则表示试验不精确 。
实际工作中同一
稀释度重复对照平板不能少于三个，这样便于数据统计，减少误差。

由
10-4
、
10-5
、
10-6
三个稀释度计算 出的每毫升菌液中菌落形成单位数也不应相差太大。


平
板菌落计数法，< br>所选择倒平板的稀释度是很重要的。
一般以三个连续稀释度中的第二个稀释
度倒平板培养 后所出现的平均菌落数在
50
个左右为好，否则要适当增加或减少稀释度加以
调整。< br>


平板菌落计数法的操作除上述倾注倒平板的方式以外，
还可以用 涂布平板的方式进行。
二者
操作基本相同，
所不同的是后者先将牛肉膏蛋白胨培养基融 化后倒平板，
待凝固后编号，
并
于
37
℃左右的温箱中烘烤
30min
，或在超静工作台上适当吹干，然后用无菌吸管吸取稀释
好的菌液对号接种于不同稀 释度编号的平板上，
并尽快用无菌玻璃涂棒将菌液在平板上涂布
均匀，平放于实验台上
20
～
30min
，使菌液渗入培养基表层内，然后倒置
37
℃的恒 温箱中
培养
24
～
48h
。


涂布平板 用的菌悬液量一般以
0.1ml
较为适宜，
如果过少菌液不易涂布开，
过多则 在涂布完后或在培养时菌液仍会在平板表面流动，不易形成单菌落。

五、实验报告

1
．结果


2
．将培养后菌落计数结果填入下表

2
．思考题


(1)
为什么融化后的培养基要冷
却至
45
℃左右才能倒平板
? (2)
要使平板菌落计数准确，需要掌握哪几个关键
?
为什么
? (3)
试
比较平板菌落计数法和显微镜下直接计数法的优缺点及应用。

< br>(4)
当你的平板上长出的菌
落不是均匀分散的而是集中在一起时，你认为问题出在哪里
? (5)
用倒平板法和涂布法计数，
其平板上长出的菌落有何不同
?
为什么要培养较长时间
(48h)
后观察结果
?