白癫风怎么治树突状细胞

2021年2月1日发(作者：常州妇科医院在线咨询)
树突状细胞与肿瘤的研究进展

[
摘要
]
树突状细胞
(dendritic cell
，
D c)
是体内功能最强的抗原提呈细胞
(APC)
。
它具有强大的
T< br>细胞激活能力，
并能活化初始型
T
细胞、
刺激
B
淋巴 细胞增
殖成熟、刺激
Th
细胞及
NK
细胞活性。能够诱导特异性抗肿 瘤细胞毒
T
淋巴细胞
(CTL)
，引发机体产生抗肿瘤免疫应答。它不仅能够 激活自体的抗肿瘤免疫，同
样能够提高异体的抗肿瘤效应。
因此，
利用树突状细胞制备 肿瘤疫苗可望提供一
种有效的肿瘤免疫治疗方法。本文就肿瘤免疫治疗中树突状细胞疫苗予以综述。
[
关键词
]
树突细胞；肿瘤；免疫疗法


树突状细胞
(dendritic
cell
，
DC)
起源 于骨髓，正常组织里面含量极微，高度表达
MHC-I
和

MHC-II，
共刺激分子，
因而可以高效提成抗原，
并且能有效的刺激静
息的
T
淋巴细胞诱发的初次免疫应答，因其胞膜向外伸出许多星状突起类似于
神经细胞的树突，因 而得名。
DC
首先由
Steinman
和
Cohn
【
1
】

于
1973
年从小
鼠脾脏中分离出，
是与 巨噬细胞、
粒细胞和淋巴细胞等白细胞形态、
功能相异的
重要免疫辅佐细胞

。
DC
是免疫应答中重要的免疫细胞，是目前所知功能最强
的一种专职抗原提 呈细胞
(antigen presentingcells
，
APC)
，< br>也是体内唯一能激活初
始型
T
细胞的抗原提呈细胞。对于维持正常机体免疫系统 的自身稳态起着重要
作用【
2
】同时，作为机体免疫的始动者，
DC
在抗病毒、抗肿瘤免疫反应及免
疫缺陷方面，激活
T
细胞发挥着十分重要的作用
[49]
。近年来，随着肿瘤免疫
学和分子生物学的快速发展，人们对
DC
的认识不断深入，
DC
已成为生物医学
界研究抗肿瘤免疫的热点之一。目前。
DC
疫苗已成为极具潜力的癌症及慢性感
染性疾病的治疗性疫苗，已有多项疫苗进入
I
、Ⅱ期临床研究阶段。但由于缺少
客观的临床疗效的证据，使
DC
疫苗还不 能进入Ⅲ期临床实验
[3]
但是近年来随
着细胞生物学和分子生物学及基因工程技术 的发展，
DC
对肿瘤细胞抗原处理、
提呈以及识别的分子基础有了更深的认识，
在临床应用研究方面取得了一些突破
性的进展，为肿瘤患者的治疗及康复带来了新的希望。

1 DC
的生物学概括

目前研究认为，
按来源可将
DC
分为髓性树突状细胞
(marrow
dendritic
ceil
，
MDC)
和淋巴细胞性树突状细胞
(1ym
—
phocyte dendritic ceil
，
LD C)
，其中，
MDC
来
源于骨髓的
CD34+
细胞；LDC
来源于胸腺。在人类，根据血液中的
DC
前体细胞，
人们将
DC
系统分为
Lin-DR+11C+ 123 mDC(myeloid dendritic cells)
和
Lin-DR+
11C-123pDC(plasmacytoid
dendritic
cells)
两大亚群
.[4]
以往人们认为
mDC
和
pDC
分别来源于淋系和髓系的造血祖细胞
,
但近几年研究表明，
B
、
T
和
NK
细胞
共同淋巴祖细胞
(commo n lymphoid precursor for B
，
T and NK cells< br>，
CLP)
和粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、红细胞和巨核细胞的共同髓系祖细胞
(CMP)
在
体内外都能分化成
DC
各类亚群。
[5]DC
广泛分布于人体的多个部位，如血液以及
肝脾、淋巴结、肺、肾、胃肠道等组织间质中，约占外周血单 个核细胞总数的
0
．
5%
～
1
．
0%
，能捕获、处理、提呈抗原，具有迁移能力，并参与淋巴细胞的
激活、
生长和分化，
调 节机体对抗原产生免疫应答的方式和类型。
DC
的免疫调节
作用由不同的膜表面分子和 分泌的细胞外因子共同担负。
DC
亚群的分类比较复
杂，
目前，
国际 上没有公认或统一的
DC
亚群的概念和分类标准。
通常依其所分布
的组织器官 、细胞谱系来源、所诱导的
T
细胞应答
(Thl
或
Th2)
、导致免疫应答最
终的结果
(
免疫性或耐受性
)
以及细胞表面所表达 的分子及受体
[
趋化因子受体及
Toll
样受体
(TLR)]
等进行分类。其中依据成熟程度可分为成熟型
DC
与不成熟型
DC
，
前者高表达主要组织相容性复合
(MHC)I
、
Ⅱ类分子，
黏附分子和共刺 激分子，
提呈抗原能力强，后者低表达上述分子，处理抗原能力强，而提呈抗原能力弱。
在大多 数组织中，
DC
以不成熟形式存在，主要发挥着“哨卫”的作用，有强大
的摄取抗原 的功能。
DC
成熟后，
其抗原捕获能力迅速下降，
已捕获的抗原经其加
工、处理后可迅速与其胞质内的
MHC
-II
类分子结合形成
MHCII
／肽复合体，表达
于
DC
表面，
同时表达高水平的协同刺激因子，< br>如
CD8O
、
CD86
、
CD40
及肿瘤坏死因子
(TNF)
等。
成熟
DC
能有效的内化、
加工和提呈 可溶性抗原，
并能激活初始
T
细胞，
启动
T
细胞介导的特异 性免疫应答。
另外，
它能刺激
B
淋巴细胞增殖和分化，
激活
自然杀伤
(NK)
细胞，同时具有向局部淋巴结迁移的能力
[6]
。

2.1
制备疫苗的
DC
来源、生物学特性

随着人们对DC
的深入认识和
DC
的分离、
纯化、
培养技术的改进，
现已能够从大多
数组织中得到纯度较高的各具特异性的
DC
，
通过体外培养 与扩增的方法，
获得大
量
DC
以满足
DC
基础与临床研究的 需要。
目前一致认为，
DC
是具有典型树突状形状，
膜表面高表达主要组织相 溶性抗原复合体
(MHC)
Ⅱ类分子，能够移迁至淋巴器官
和刺激初始型
T< br>细胞增殖活化，并具有一些相对特异性表面标志的一类细胞。
DC
的分化阶段经历从前体
DC
至非成熟
DC
再到成熟
DC
等的过程。
非成熟
DC
具有摄取和
加工处理抗原的功能，但其刺激初始型
T
细胞的能力 弱。
DC
摄取抗原或接受到某
些刺激因素，
DC
逐渐分化成熟，并表现出成熟
DC
的特征：细胞呈树突状形态；
失
去摄取抗原能力；能启动初始型
T
细胞反应等。
有别于其他
APC
，
DC
最大的特点是
能够显著刺激初始型
T
细胞
(naive T cel ls)
增值，而巨噬细胞、
B
细胞仅能刺激
已活化的或记忆性
T细胞，因此
DC
是机体免疫应答的始动者，在免疫应答的诱导
中具有独特的地位。
DC
是肿瘤细胞免疫中主导力量
T
细胞增殖和应答的诱导者，
能促进
CTL
和
Th
的生成，一个
DC
细胞能诱化
100
～
3
000
个
T
细胞【
7
】

。近来研究
发现，
DC
的功能还受许多生化因素调控，
如
D C
缺乏
NOX2
氧化酶将会导致抗原提呈
功能下降，如果
E-Cad herin
黏附分子缺失，在体内诱导一种完全不同的
T
细胞免
疫，即
CD8+
T
细胞免疫耐受

。
【
8
】肿瘤细胞 对宿主免疫应答的逃逸是恶性肿瘤
发生、
发展的重要机制之一。
在带瘤动物及肿瘤患者 体内，
都发现循环和局部浸
润的
DC
存在功能上的缺陷。
Fifis
【
9
】等

的研究发现，肿瘤细胞能够通过一系
列机制抑制 机体的抗肿瘤免疫反应，激活特异的调节性
CD 4+
、
CD8+ T
细胞以 下
调细胞毒性
T
淋巴细胞的效应等。如果对
DC
进行肿瘤抗原修饰， 再将负载肿瘤抗
原的致敏
DC
回输机体，
则可以解决因
DC
功能缺陷造成的肿瘤免疫逃逸，
诱导机体
产生有效的抗肿瘤免疫应答。
而使用何种抗原 及如何将肿瘤抗原在体外与
DC
结合
以弥补其功能缺陷，则成了应用
DC瘤苗进行免疫治疗的关键。有研究表明：
DC
除了存在成熟和未成熟状态外，还存在许多功 能性状态，
DC
免疫原性的强弱受
肿瘤微环境的调节。信号转导蛋白和转录激活子3(snal transducer and activator of
transcription 3
，
STAT3)
高度激活以及慢性炎症相关 炎症介质诱导
DC
功能障碍，
削弱了机体对肿瘤的免疫监督
[10]


疫苗的制备

3.1
肿瘤抗原肽致敏的
DC
肿瘤疫苗

在
DC< br>瘤苗抗肿瘤免疫方面最引人注目的研究工作是应用抗原或抗原多肽在体外
冲击致敏
DC< br>，
然后将负载肿瘤抗原的致敏
DC
回输或免疫接种亚荷瘤宿主，
进行肿
瘤免疫治疗。
这种用肿瘤抗原冲击的
DC
瘤苗具有很好的靶向性，
避 免了不必要的
免疫刺激，可以利用较大浓度的肿瘤抗原以更有效地促进
T
细胞的激活< br>.

用肿瘤
抗原冲击的
DC
瘤苗具有很好的靶向性，避免了不 必要的免疫刺激，可以利用较
大浓度的肿瘤抗原以更有效地促进
T
细胞的激活。
Liu
等
[11]
利用
CD40
配体
(CD
40L)
转染的肿瘤细胞可以向
DC
同时传递肿瘤抗原和成熟刺激，
这些激活 的
DC
对
能产生
IFN-r
的
CD8+ T
细胞 作用更为强大，
从而更好地加工肿瘤抗原，
促进特异
性细胞毒性
T
细 胞的增殖。
Prestwich
等
[46]
最近又发现，负载有感染呼肠病毒
的人黑素瘤
Me1888
细胞的
DC(DC
．
MelReo )
能通过细胞的直接接触诱导共培养的
NK
细胞产生
IFN-r
， 通过腺病毒转染，同样可以刺激
DC
疫苗的产生。以肿瘤特异性
抗原或肿瘤相关抗原多 肽致敏
DC
回输体内后能诱导机体产生抗原特异性细胞毒
性
T
淋巴细 胞
(CTL)
，发挥免疫保护作用【
12-15
】。肿瘤抗原的获得可直接由 肿
瘤细胞提取纯化或经弱酸洗脱或人工合成，
也可以由
cDNA
、
m RNA
通过基因工程的
方法合成。
该疫苗不足之处：
(1)
临床肿瘤 组织来源较困难；
(2)
必须清楚肿瘤抗
原表位；
(3)
应用时受< br>MHC
限制；
(4)
有诱发自身免疫性疾病的危险

3.2
应用肿瘤细胞的蛋白提取物刺激
DC
，

与单一肿瘤 抗原肽致敏
DC
相比，
肿瘤细胞的蛋白提取物刺激
DC
能避免肿瘤抗 原
多肽刺激存在的某些不足，
如无需明确的肿瘤抗原，
可能有多种不同的肿瘤抗原冲击
DC
，从而诱导针对不同抗原决定簇的
CTL
克隆等。可以利用超声 波破碎、
反复冻融、
诱导细胞凋亡的方法制备肿瘤抗原，
这种抗原具有多种抗原表位，
更
有利于诱导
DC
对肿瘤细胞的免疫攻击肿瘤细胞的蛋白提取物刺激
DC
可克服肿瘤
抗原或多肽冲击
DC
存在的某些不足。
如无需明确肿 瘤抗原，
可能有多种不同的肿
瘤抗原刺激
DC
从而诱导针对不同抗原决定簇的
CTL
克隆等。
Zhou
等
[16]
以肿瘤一
睾 丸抗原
(CTA)
家族中的
XA
．
GE
一
1b蛋白致敏
DC
刺激自体
T
淋巴细胞产生特异杀伤
性和细胞毒性< br>T
细胞，
体外研究证实其对有相应
CTA
表达的肺癌细胞可产生较好的
杀伤效果。
但是，
肿瘤细胞蛋白提取物中包含的机体自身的正常抗原免疫机体后
可能诱发自身免疫性疾病。

3.3
肿瘤抗原编码基因致敏
DC
疫苗

将肿瘤抗原编码基 因或某些细胞因子基因等导入
DC
使之持续有效表达肿瘤抗原，
诱导抗肿瘤免疫反应。
Gabrilovich
等【
17
】

用野生型
P 53
致敏的
DC
治疗
22
例小
细胞肺癌患者得出此种疫苗安 全并能产生特异性的免疫应答。
Moran
等
【
18
】
< br>将
委内瑞拉马脑炎病毒复制子转染
DCs
细胞，
用其免疫过表达
neu
原癌基因蛋白的荷
瘤小鼠，结果转基因高水平表达，诱导活化
neu
特异性
CD8+T
细胞，产生抗
NEU
的
IgG
抗体。
3.3
肿瘤全细胞抗原致敏的
DC
肿瘤疫苗

由于 目前肿瘤特异性抗原或肿瘤相关抗原多肽获得明确鉴定的较少，
因此以全部
肿瘤抗原信息致敏< br>DC
成为一种简便有实效的方法。
肿瘤全细胞抗原可由以下途径
获得：
(1)
肿瘤细胞裂解液。此法不要求获得新鲜的肿瘤组织或活肿瘤细胞，而
是通过反复冻融或超 声破碎肿瘤细胞，离心过滤即可获取肿瘤细胞的裂解上清
液。
Yi
等【
19< br>】

采用同源肿瘤细胞溶解物片段，负载
DC
接种
12B1< br>荷瘤小鼠，结
果表明，致敏的
DC
能够在其细胞表面高表达
CD40
、
MHC-II
分子，并产生更多
IL-12
，疫苗接种荷瘤小鼠后 ，小鼠生存期延长，肿瘤消退率达
75%
，用该方法
制备的
DC
疫 苗已进入
II
期临床实验；
(2)
凋亡肿瘤细胞及产物。未成熟
DC
可以吞
噬凋亡体并加工和提呈肿瘤抗原。
Prahlad[20]
等分别用神 经胶质瘤细胞及其裂
解产物、
凋亡产物、
肿瘤
RNA
以致敏
DC
，
同时用星细胞瘤株和
LAK
敏感细胞株对照，
通过细胞计数分 析及
HLA-II
、
CD-86
、
IL-12
等抗体检测< br>DC
细胞诱导的抗肿瘤活性，
发现用肿瘤细胞凋亡物制备的
DC
疫苗，
在体外产生的肿瘤特异性淋巴细胞毒反应
最强；
(3)
坏死或死亡的肿瘤细胞 。通过反复冻融、加热、低渗透压休克处理、
钼酸盐处理以及
7
线照射等方法可以获取 坏死或死亡的肿瘤细胞及产物
(
如热休
克蛋白
HSP70)
，
Qiu
等
[21]
将鼠未分化的结肠癌细胞
(CT-26)
进行热 休克处理
(42
℃

，
lh)
，
发现热休克刺激的
CT-26
较未处理的
CT-26
可更高的表达
HSP70
，
分
别用热刺激后
CT-26
与
CT
一
26
裂解物致敏
DC
接种小鼠，测定诱导
CTL
分泌
1FN
一
7
的量，
前者显著高于后者；
(4)
活肿瘤细胞；
(5)< br>肿瘤细胞与
DC
融合。
实验表明
DC-~9
瘤融合的杂交瘤苗 ，
既保留了
DC
的生物学特性，
又可避免繁杂而无效的
TsA
鉴定。
Wei
【
22
】

等将绿色荧光标记的树突状细胞 与用红色荧光标记的自身肿瘤细胞融
合，
然后用即时发光细胞分选技术纯化该融合细胞，
将该细胞作为疫苗，
治疗转
移黑色素瘤患者取得了较好效果。
Imura
等
[23]
用最新的电融合技术构建
DC
一肿
瘤杂交细胞，
在 体外作为刺激细胞诱导肿瘤特异性细胞毒作用，
通过测定细胞毒
性及释放的
IFN一
r
，发现与肿瘤细胞共孵育过夜的
DC
相比，
DC
瘤杂交细胞能更
有效地诱导肿瘤特异性
CTLs
增殖。
Vujanovic< br>等
[24]
发现，腺病毒转染的
DC(Ad
．
DC)
经
LPS
／
IFN-r
诱导成熟后能增加其表面跨膜型
TNF(t mTNF)
和
trans
—
presented(trans)IL-15< br>的表达，二者能通过细胞间的直接接触协同促进
NK
细胞
表面活化性标志
CD69
表达增加，
IFN
—
r
的分泌、细胞增殖以及抗肿瘤活性均得
到增强
.
。

3
．
4
用肿瘤细胞的
mRNA
体外刺激
DC
以
DC
为基础的基因疫苗有：
转染肿瘤抗原
RNA
的
DC
疫苗、
转染肿瘤抗原
DNA
的
DC
疫苗及转染细胞因子和趋化因子基因的
DC
疫苗等。用于致敏的
RNA
可以 是肿瘤
细胞的总
RNA
或
mRNA
。通过
PCR
可 从有效的肿瘤组织中扩增到足够数量的
mRNA
刺激
DC
。可通过差异筛选法 获得肿瘤细胞特异性表达的肿瘤
mRNA
，用
这种经差异筛选的肿瘤
mRNA
刺激
DC
，可避免自身抗原刺激
DC
诱发自身免疫疾
病的危 险。另外，
RNA
疫苗半衰期期短，只在宿主细胞的胞质中表达，不会整
合到基因中。 所以，
RNA
疫苗没有导致癌变的潜在危险性，有其独到的应用价
值。
转染肿 瘤抗原体外抗原肽致敏
DC
回输后，
可引起特异免疫保护作用，
但并不
持久，
为诱导持久的抗肿瘤免疫作用，
有研究报道
[25.26]
，从有限的肿瘤组织
中扩增足量的有效刺激
DC
的
mRNA
，采用差异筛选方法获特异性表达的肿瘤特异性
抗原
mRNA
导入
DC< br>，制备
RNA
疫苗，或将肿瘤抗原基因以裸
DNA
方式导人
D C
，或以
病毒为载体转染
DC
，
使
DC
持续表达肿 瘤抗原，
可解决上述两种
DC
肿瘤疫苗因抗原
解离、肿瘤来源有限、有诱发自 身免疫性疾病危险等不足。也有报道
[27,28]
，
用促进抗肿瘤免疫应答的细胞因 子或趋化因子基因
(GM
—
CSF
、
IL
一
2，
IL
一
12
，
TNF-a
等
)
直接 转染
DC
或转染肿瘤抗原修饰的
DC
；
疫苗可促进
DC成熟、
提高
DC
活性
以增强
DC
疫苗效能。近年已证明 肿瘤来源的
mRNA
致敏
DC
也是一种诱导
CTL
和产生< br>肿瘤免疫的有效途径。从肿瘤组织中扩增到足量用于刺激
DCs
的
mRNA，并通过筛
选获得特异表达的肿瘤
mRNA
，以此作为抗原冲击
DCs< br>制备疫苗。该疫苗可避免诱
发自身免疫性疾病的，有更高的临床实用价值。
Peng等【
29
】

使用此瘤苗有效
地诱导出特异性细胞毒
T
细胞，杀伤肿瘤细胞。最近，也有学者将从肿瘤细胞提
取的
mRNA
导入DC
制备成疫苗．
用于前列腺癌的临床治疗．
取得了有效的治疗效果
【< br>30
】

3
．
5 DC
分泌的细胞膜外小体肿瘤疫苗

DC
可分泌一种细胞外膜性小体
(Dexosomes)
，细胞外小体
(exosomes)
是直径为
50~ 90 nm
的膜囊体，可为多种细胞所分泌。它富含
MHC-I
、
MHC-I I
抗原递呈分子
和
CD1lb
、
CD86
等黏附因子和共刺 激因子。先前的研究表明，
DC
负载的细胞外小
体在小鼠体内可以诱导抗肿瘤反应，< br>Dexosomes
浓缩了整套来源细胞的抗原成分，
含有与自身细胞特殊功能相关的蛋 白。
最近研究表
[31-32]Dexosomes
具有抗原呈
递能力和抗瘤 作用：
(1)
可通过内含的
MHC
与
TCR
特异性结合，< br>有效地向
CD4+
、
CD8
+T
细胞和
NK
细胞提呈抗原，使之活化并增强其杀伤活性；
(2)
可将
MHC-I MHC
一
Ⅱ类分子转运至幼稚
DC
，导致细胞免疫应答之间的放大效应；
( 3)
能够诱导机体
产生
IFN-7
、
IL-12
等效应性抗 瘤细胞因子，
从而发挥抗瘤免疫生物学作用。
与
DC
相比，
Dexo somes
作为一种非细胞成分，
具有可以冷冻储藏、
抗原性稳定的优点，
更 重要的是
Dexosoraes
不被激活的
CTL
细胞所抑制，能够更为持久 的发挥抗原提
呈作用
[33]
。故
DC
来源的
Dexoso mes
较
DC
细胞成分瘤苗存在诸多优势，有取代
DC
疫苗之趋势，
其多靶点、
多途径、
高效能的抗瘤作用使之有望成为一种新型的肿
瘤疫苗[34]
。

3
．
6
负载肿瘤抗原的完全重组的酵母疫苗

Andrewl[35]
等用小鼠淋 巴瘤细胞表达的
0VA
抗原负载酵母在体外刺激
DC
，导致
DC的成熟及
MHC
—
I
、
MHC
一Ⅱ限制性的
0 VA
特异性初始
T
细胞的激活。其中酵母具

有免疫佐剂的作用，< br>对
DC
提供强有力的刺激，
导致共刺激分子、
MHC
分子和< br>IL-12
的上调，能更有效的将肿瘤抗原呈递给
T
细胞，发挥抗肿瘤的免疫反 应。

3.7
细胞因子的介导

自然杀伤
(NK)
细胞和树突状细胞
(DCs)
是免疫系统中两种重要的细胞，它们在机体先天性和
适 应性免疫应答过程中都起着关键性作用，被认为是联系二者之间的关键因素。实验证实，
将
NK
细胞与
DCs
细胞共培养时，可以提高
NK
细胞的杀伤能力，同时增 强
DCs
的抗原提
呈能力。
NK
细胞可以被
DCs
激活，
DCs
可以诱导
NK
细胞成熟。有研究表明，利用
NK
细
胞和其分泌的细胞因子，可诱导
DCs
分化为一种新型疫苗
DC1N < br>或
aDCI
，这种疫苗具有
高迁移力、高免疫刺激能力、高水平分泌
I L-12p720
的特点。
【
47
】在给予
IL
一
12
、
IL
—
l8
以及用于维持存活的低剂量
IL-15< br>预先活化的基础上，
NK
细胞能被诱导分化为稳定的具有
记忆功能的细胞亚群，
当再次接受相同刺激时，
该群细胞能以不依赖于细胞增殖的方式产生
大量
IF N-r
从而间接刺激
Dc
的产生。另外，
【
48
】
TNF-a
能够显著增强外周血单个核
细胞来源
DC
的分化和成熟，不同浓 度
TNF-a
能不同程度地刺激
DC
功能成
熟．
TNF-a
浓度为
20ng
／
ml
时刺激
DC
分化成熟的作用 最强。
山西医科大学任建