广三医院试管动物克隆资料

2021年2月1日发(作者：徐州妇幼做试管婴儿挂专家号)
动物克隆

主要结构：

四：介绍动物克隆研究的历史
< br>（动物克隆研究的三个阶段：胚胎细胞克隆阶段、同种体细胞克隆阶段、异
种体细胞克隆阶段；< br>其中可以重点找一些比较有名的克隆动物进行详细介绍，
比
如”克隆羊多莉”等。所提到 的克隆动物最好都能附上图片）

五：介绍中国的动物克隆技术研究历史

六：介绍动物克隆技术的方法、环节（看能不能找到视频）

七：动物克隆技术存在的问题（主要是技术方面的缺陷）


四．动物克隆研究的历史



科学家们很早就开始了动物克隆的研究。早在
1938
年
,
德国胚胎学家
Spemann
即提出“奇异的实验”的设想。
1952
年
,
英国科学家
Briggs
和
King
首次报道
了蛙的核移植研究。
1962
年
,
英国剑桥大学的
Gurdon
获得了成年蛙。我国已故
科学家童第周教授在
20
世纪
60
—
70
年代曾用囊胚细胞进行鱼类细胞核移植
工作
,
获得 属间和种间移核鱼
,
使我国鱼类核移植研究居世界领先水平。
早期的动
物克隆 研究仅限于两栖类和鱼类
,
直到
20
世纪
80
年代,
核移植克隆技术才开始
应用于哺乳动物。根据供核细胞的不同
,
可将动 物克隆研究分为三个阶段
:
1.
胚胎细胞克隆阶段

1981
年
,
Illmensee
和
Hoppe
报道了他们用 小鼠的正常囊胚或孤雌活化囊胚的
内细胞团细胞作为核供体
,
直接注入去掉雌雄原核的 受精卵胞质中
,
重构胚体外
发育到桑葚胚或囊胚后移植寄母子宫
,
获 得克隆小鼠
,
这是第一次用胚胎细胞对
哺乳类进行核移植获得成功。
1983
年
,
美国科学家利用核移植技术和细胞融合方
法获得了克隆小鼠。
1 986
年
,
英国的
Willadsen
用绵羊的
8
—
16
细胞阶段的胚
胎细胞作为供体进行核移植
,
首次应 用电融合的方法克隆出一只小羊。
此后
,
科学
家们又相继克隆出小鼠、绵羊、 牛、兔、猪和猴等。我国科学家也在
20
世

纪
90
年代成功开展了胚胎细胞克隆兔、山羊、小鼠、牛和猪等研究。

2.
同种体细胞克隆阶段

1997
年
2
月
,
英国罗斯林研究所
Wilmut
等人宣布
,
他们用
6
岁成年羊的高度分
化的乳腺细胞进行 了核移植
,
成功地获得了克隆羊
“多莉”
。
这是第一次用成年体细胞作为供核细胞
,
由此说明高度分化的成年动物的体细胞可在适当条件下发生
逆 转
,
恢复全能性
,
这是生物技术史上具有划时代意义的重大突破
,
是克隆技术
的一个里程碑
,
也改写了部分生物学的理论。
1998
年
5
月
,
美国科学家
Robl
的
研究组利用牛胎儿成纤维细胞克隆出了
3
头牛
,
而且携带了转移的基因。
1998
年
7
月
,
日本科学家
Kato
等用牛的输卵管细胞克隆出了
8
头小牛。
1998
年
7
月
和
1999
年
6
月
,
美国夏威夷大学
Yanag2imachi < br>领导的研究小组克隆小鼠成功
,
并打破了哺乳动物克隆研究初期人们认为只有雌性动物才 能被克隆的迷信。
此后
,
同种体细胞克隆出的山羊、猪、猫和兔也都相继诞生。
1999
年和
2002
年
,
我国
体细胞克隆山羊和克隆 牛也都获得成功。

3.
异种体细胞克隆阶段

异种体细胞克隆与同 种体细胞克隆的差异在于供核体细胞与受体卵母细胞来源
于不同的物种。即将一种动物的体细胞核移植到 另一种动物的去核
(
遗传物质
)
卵母细胞中。异种克隆研究面临着许多问题
,
如体细胞核能否在异种卵胞质中去
分化并支持早期发育
?
异种核质能否相容
?
异种重构胚能否着床并进行全程发
育等。
1999
年
,
中 国科学院动物研究所生殖生物学国家重点实验室将成年大熊猫
体细胞作为供核体细胞移植到去核
(
遗传物质
)
的日本大耳白兔卵母细胞中
,
成
功地构建出 异种重构胚
,
体外培养获得孵化囊胚。
2001
年将重构胚移植寄母子宫
,
获得了着床的重大进展。

1999
年
,
美国
Wisconsin2Madison
大学以来自绵羊、 猪、猴和大鼠的皮肤成纤
维细胞做为供核体细胞
,
移植到去核
(
遗传 物质
)
牛卵母细胞中获成功
,
表明牛的
卵母细胞质可以支持来自不 同物种的细胞核进行早期发育
;2000
年
,Lanza
等人
从 死亡的濒危牛上取材并培养了皮肤成纤维细胞做为供核体细胞
,
重构胚移植后
,
受体最长怀孕至
202
天流产
,
微卫星技术分析证明
,
所有克隆牛胎儿的基因型均
与供体细胞一致
;2001
年
,
Nature
Biotechnolo2gy
上报道了异种体细胞克隆濒
危哺乳动物———欧洲盘羊的成功
,
为濒危动物的保护提供了重要的借鉴
[5 ] < br>。
随着体细胞克隆技术的发展
,
它与人类生产和生活的关系也就愈发密切
,
不同研
究领域的科研人员都认识到克隆技术在不同领域的应用前景。


1996
年

第一只成年体细胞克隆羊“多利”

诞生

1997
年

一头用胎盘克隆而成的荷兰牛亮相。

1998
年

两头由母牛细胞克隆而成的小牛在东京出生。


一个国际研究小组宣布克隆出了三代实验鼠

2000
年

曾参与克隆“多利”

羊的英国公司培育了第一批克隆猪

2001
年

一头稀有品种的克隆亚洲牛诞生，两天后死亡。

2002
年

法国研究人员克隆出兔子。

2003
年

美国科学家推出了一匹克隆骡。


爱荷华州的研究人员称他们克隆出了一头濒临灭绝的爪哇

野牛。

2004
年

美国加利福尼亚的一家公司培育出了第一只克隆猫。这只 猫后来为
第一只被卖出的克隆宠物。

2005
年

韩国科学家宣布他们培育出了首条克隆狗叫“斯纳皮”



克隆羊多莉

1996
年
7
月
5
日，英国爱丁堡罗斯林研究所
（
Roslin
）
的伊恩·
维尔穆特< br>（
Wilmut
）
领导的一个科研小组，
利用克隆技术培育出一只小母 羊。
这是世界上第一只用已
经分化的成熟的体细胞
(
乳腺细胞
)克隆出的羊。
克隆羊多利的诞生，
引发了世界
范围内关于动物克隆技术的热烈争论 。
是科学界克隆成就的一大飞跃。
它还被美
国《科学》杂志评为
1997年世界十大科技进步的第一项，也是当年最引人注目
的国际新闻之一。科学家们普遍认为，多莉的诞 生标志着生物技术新时代来临。
继多莉出现后，
克隆，
这个以前只在科学研究领域出现 的术语变得广为人知。
克
隆猪、
克隆猴、
克隆牛……纷纷问世，
似乎 一夜之间，
克隆时代已来到人们眼前。


其整个克隆过程简述如下：

步骤一

从一只
6
岁 芬兰多塞特白面母绵羊（姑且称为
A
）的乳腺中取出

乳腺细胞，
将 其放入
低浓度的营养培养液中，
细胞逐渐停止分裂，
此细胞称之为
“
供体细胞
”
；

步骤二

从一头苏格兰黑面母绵羊（
B
）的卵巢中取出未受精的卵细胞，并立即将细胞核
除去，留下一个无核的卵细胞，此细胞称 之为
“
受体细胞
”
；

步骤三

利用电脉 冲方法，使供体细胞和受体细胞融合，最后形成
“
融合细胞
”
。电脉冲可以产生类似于自然受精过程中的一系列反应，
使融合细胞也能像受精卵一样进行
细胞分裂、 分化，从而形成
“
胚胎细胞
”
；

步骤四

将胚胎细胞转移到另一只苏格兰黑面母绵羊（
C
）的子宫内，胚胎细胞进一步分
化和 发育，最后形成小绵羊
--
多莉


总之，多利有
3
个母亲：它的“基因母亲”是芬兰多塞特白面母绵羊（
A
）
；科学
家取这头 绵羊的乳腺细胞，将其细胞核移植到第二个母亲（借卵母亲）
--
一个
剔除细胞核的 苏格兰黑脸羊（
B
）的卵子中，使之融合、分裂、发育成胚胎；然
后移植到第三头羊（
C
）
--
“代孕母亲”子宫内发育形成多莉。


从理论上讲，多莉继承了提供体细胞的那只绵羊（
A
）的遗传特征，它是一只白
脸羊， 而不是黑脸羊。分子生物学的测定也表明，它与提供细胞核的那头羊，有
完全相同的遗传物质
（ 确切地说，
是完全相同的细胞核遗传物质。
还有极少量的
遗传物质存在于细胞质的线粒 体中，遗传自提供卵母细胞的受体）
，它们就像是
一对隔了
6
年的双胞胎。< br>
多利没有父亲，它是通过无性繁殖
--
或者说克隆而来。



猪坚强

5
?
12
”汶川地震后，
“猪 坚强”在被掩埋的极端环境里存活了
36
天，创造了汶川
地震中的生命奇迹，象征了汶 川地震中的坚强精神。获救后，
“猪坚强”很快恢
复了健康。但不幸的是，现年
5岁的“猪坚强”地震后完全丧失了生育能力。


为了延续“猪坚强”的优质遗传 基因，
2011
年
2
月
16
日，华大基因对“猪
坚 强”开展耐受性相关分子机制及健康检查研究，获取其耳组织带回华大基因。

科研人员将采集 组织培养出成纤维细胞，
并采用手工克隆技术将其体细胞进
行胚胎克隆，
在汶川地震< br>3
周年之日即
2011
年
5
月
12
日将克隆 胚胎移植入两头
健康的代孕母猪受体内。经过
110
天的体内胚胎发育，代孕母猪于< br>8
月
31
日成
功生产出“猪坚强”的复制个体“小猪坚强”
。

此次克隆
“猪坚强”
是首次采用老龄猪体细胞克隆获得成功的事例，
也是华
大基因手工克隆的一次技术突破，
同时展现了华大基因在动物克隆领域走在了国
际前沿的技术实力。
此前，
无论是传统克隆还是手工克隆，
所采用的体细胞主要是胎儿成纤维细胞，这是首次应用
5
岁老龄猪体细胞克隆获得成功。


五．介绍中国的动物克隆技术研究历史