试管婴儿 智力-试管移植一般几天就知道怀孕了
囊胚滋养层细胞活检技术的优势及操作解析
【引用本文】高英 卓，杨大磊，冯迪，等
.
囊胚滋养层细胞活检技术的优势及操
作解析［
J］
.
中国实用妇科与产科杂志，
2020,36(9):884-887.
作者：高英卓，杨大磊，冯迪，王秀霞，李达
1990
年
Hand yside
团队首次对携带不同
X-
连锁隐性遗传病基因的两对夫妇的
胚胎进 行了检测，
筛选合适的胚胎性别并种植后顺利妊娠。
如今植入前遗传学检
测
（
PGT
）
技术已广泛应用于全世界的生殖中心并得到了迅速的发展。
PGT< br>技术
是指在体外受精
-
胚胎移植技术的基础上，通过对配子或胚胎进行活检，获 取部
分遗传学物质进行染色体和（或）基因学检测，诊断其是否存在单基因缺陷、非
整倍体或染 色体拷贝数异常等，选择正常胚胎植入子宫，从而获得健康的子代。
PGT
技术的成功实施需要 依赖可靠的活检技术获取可用于检测的胚胎遗传物质，
而活检的过程对胚胎而言是一项侵入性的操作，< br>活检是否成功将直接影响到
PGT
的最终结局。
随着分子生物学技术的不断发展 ，
虽然部分检测已经可以使用无创
或微创的方式进行遗传物质的获取，
但其检测结果的 准确性尚存争议。
因此，
目
前仍以有创方式获取遗传物质为主，即活检技术。
PGT
活检技术根据活检时间
可分为极体活检、
卵裂球活检与囊胚滋养层细胞活检：< br>极体活检是在取卵当天
（或
受精后第
1
天）
获取极体用于遗传 学检测，
可以检测母源性的染色体非整倍体和
易位，但无法检测父源性遗传缺陷；卵裂球活检则 是在受精后第
3
天（
6~8
个
细胞阶段），获取
1~2个细胞进行遗传学检测；囊胚滋养层细胞活检是在受精
后第
5
天或第
6
天，胚胎发育至囊胚阶段时，获取
5~10
个滋养层细胞用于遗< br>传学检测。
1
囊胚滋养层细胞活检技术的优势
1.1
胚胎损伤小
卵裂球活检是从
6~8
个细胞中抽取
1~2< br>个细胞用于遗传学检
测，
而囊胚滋养层细胞活检则是在数百个细胞中抽取
5~1 0
个滋养层细胞用于检
测。已有证据表明，卵裂球活检可能会损害胚胎的发育潜能及种植能力。 此外，
卵裂球活检时，为了使卵裂球之间连接变得松散，需要利用无
Ca2+/Mg2+
的
缓冲液处理胚胎，
利用时差显微培养系统观察发现这一操作会延迟胚胎致密化和
成 囊过程，
并降低种植率。
滋养层细胞将来会发育成胎盘或胎膜，
不直接参与胎
儿形成。
因此，
滋养层细胞活检可有效避免损伤内细胞团，
进而减小活检操作对
胚胎发育的影响。
1.2
诊断准确性高
囊胚滋养层细胞活检 用于遗传学检测的细胞数量（
5~10
个）
远多于卵裂球活检（
1~2
个），提高了诊断准确性，降低了扩增失败的风险。
由于滋养层细胞活检技术自身的显著优 势以及极体活检和卵裂球活检技术自身
的局限性，
结合近些年囊胚培养和囊胚冷冻技术的逐渐成 熟，
滋养层细胞活检技
术已成为目前应用最为广泛的活检技术。
2
囊胚滋养层细胞活检技术的操作解析
根据活检策略不同，囊胚 滋养层细胞活检技术可分为第
3
天胚胎孵化后活检方
案、
桑葚胚孵化后活检方 案、
囊胚当天孵化后活检方案和囊胚即时孵化后活检方
案（图
1
）。
图
1
囊胚滋养层细胞活检策略
2.1
第
3
天胚胎孵化后活检方案
2004
年，
de Boer
等首次详细阐述了第
3
天胚
胎孵化后活检方案（图
1A）。胚胎培养至受精后第
3
天进行辅助孵化，使透明
带形成开口，
用来减 弱透明带对胚胎的束缚作用，
使胚胎更易于孵出。
透明带开
口位置应位于透明带与卵裂 球之间存在间隙处或碎片处，
避免损伤卵裂球。
随后
将胚胎继续培养至第
5< br>天或第
6
天，待部分滋养层细胞孵出后进行活检。
透明带开口主要有 ３种方法：
化学法、
机械法和激光法。
化学法是利用酸性台式
液（
p H
值
2.2~2.6
）
溶解透明带。
将装满酸性台式液的显微操作针 对准透明带，
通过喷洒台式液溶解透明带，
使透明带形成开口。
操作动作应熟练迅速，
当透明
带形成开口后，
立即停止喷洒台式液，
避免损伤卵裂球。
机械 法透明带开口是利
用尖头的显微操作针刺破透明带。
胚胎在持卵针固定下，
操控显微操 作针沿着透
明带切线方向刺破并穿过透明带，
随后松开持卵针，
借助持卵针和显微操作 针之
间的摩擦使透明带开口。
机械法操作快捷，
然而其开口的大小具有不确定性。激
光法是利用非接触式红外线（
1.48
μ
m
）二极管产生的激 光，将其对准并击打目
标区域，
使透明带形成开口。
激光开口的大小和位置可以实现精 确控制，
且具有
较强的可操作性和重复性，是目前最常用的透明带开口方法。
第
3
天胚胎孵化后活检方案实施起来相对容易，
易于掌握，
然而其也存在诸 多弊
端，例如：在受精后第
3
天实施辅助孵化后，由于透明带存在开口，破坏了囊胚< br>腔扩张、
透明带变薄这一正常发育过程，
其对囊胚发育潜能的影响存在争议，
有
证据表明，卵裂期激光开口有可能降低胚胎发育潜能，改变胚胎表观遗传修饰；
囊胚的孵出位置 具有不确定性，如果内细胞团孵出，为避免活检损伤内细胞团，
只能等到囊胚完全孵出再进行活检操作；
在等待囊胚孵出过程中，
需要反复观察
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