鼻孔干燥结痂鼻屎带血性病实验室梅毒SOP

2021年1月31日发(作者：维c泡腾片)
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检验科

操作手册

文件名称

制

订

人

制订日期


梅毒螺旋体检测标准操作规程


审

核

人

审核日期



编

码

页

数

批
准
人


TP-SOP



实
施
日
期


批
准
日
期

目

的：规范的梅毒螺旋体检验操作，确保检测结果准确。

适用范围：性病实验室工作人员

责

任

人：实验操作者

1
、标本的采集与处理

1.1
标本采集的基本要求

1.1.1
操作应规范化。

1.1.2
所有标本都应当被视为具有传染性，医务人员应戴手套谨慎操作。

1.2
梅毒标本采集

梅毒的实验室诊断主要有病原体检测和血清学检测方法 ，各期梅毒的检测方法
及部位见下表。


临床表现
一期梅毒

二期梅毒

潜伏梅毒

三期梅毒

神经梅毒








1 / 9

取材部位
溃疡、淋巴结、血液

皮损、淋巴结、血液

血液

血液、脑脊液

血液、脑脊液


检查方法
暗视野检查、血清学检查

暗视野检查、血清学检查

血清学检查

血清学检查

血清学检查

1.2.1
血液

1.2.1.1
血清标本

根据需要，用一次性真空采血针与促凝采血管抽取静脉血
2-5 ml
，室温静置1-
2
小时（或
37
℃静置
30
分钟），待血液凝固、 血块收缩后，
3000r/min
离心
10-15
分钟，分离新鲜血清，备用 。也可采用保存于
2-8
℃或
-20
℃的血清。溶
血、脂血或污染的 标本可影响试验结果。

1.2.1.2
血浆标本

根据需要，用一次性真空采血针与抗凝采血管抽取静脉血
2-5 ml
，轻轻颠倒混< br>匀
8-10
次，
3000r/min
离心
10-15
分钟，分离血浆，备用。血库血浆以及
EDTA
抗凝血浆同样可以用于梅毒血清学实验（一般仅 用于
RPR
实验，），但易出现
假阳性反应（需用血清复试），如用其他抗凝剂应首先 评价后再用。

1.2.1.3
末梢全血

消毒局部皮肤（成人和< br>1
岁以上儿童可选择手指或耳垂，
1
岁以下儿童采用足
跟部）。一次性 采血针刺破皮肤，用无菌棉签擦掉第一滴血。收集滴出的血
液，立即用于检测。

1.2.2
皮损部位组织液

1.2.2.1
用于病原学检查

用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面 的污物，钝刀
/
刮勺轻刮、挤压皮损
部位，取渗出液与预先滴加在载玻片上的生理盐水 混合后加盖玻片立即用于暗
视野显微镜检测，或取渗出液直接涂片，用于镀银染色试验。

1.2.2.2
用于核酸检测

用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的 污物，钝刀
/
刮勺轻刮、挤压皮损
部位，刮取渗出液，加入有
DNA
保存液（
1ml/
管）的标本管中，备用。

1.2.3
淋巴液

无菌操作下穿刺腹股沟淋巴结，注入
0.3ml
无菌生理盐水并反复抽吸
2-3
次，
取少量的淋巴液直接滴于载玻片上，加盖 玻片后立即进行暗视野镜检或备用。

1.2.4
脑脊液

操作由专 业人员进行，一般用腰椎穿刺术获得。患者侧卧于硬板床，两手抱膝
紧贴腹部，头向前胸屈曲，使躯干呈 弓形，以髂后上棘连线与后正中线的交点
2 / 9
为穿刺点，相当于第
3-4腰椎棘突间隙，消毒处理后，用
2%
利多卡因自皮肤到
椎间韧带作局部麻醉。术者 用左手固定穿刺皮肤，右手持穿刺针以垂直背部方
向缓缓刺入，针尖稍斜向头部，成人进针深度约
4-6cm
，儿童约
2-4cm
。当针头
穿过韧带与硬脑膜时，有阻力突然 消失落空感，此时可将针芯慢慢抽出，即可
见脑脊液流出，至于合适的容器中，备用。

1.3
标本接收的标准

1.3.1
核对样品与运送单，检查样品管 有无破损和溢漏。如发现溢漏应立即将
尚存留的样品移出，对样品管和盛器消毒并做记录。
< br>1.3.2
检查样品的状况，记录有无严重溶血、微生物污染、脂血以及黄疸等情
况。如 果样品污染或者认为样品不能被接受，应将样品安全废弃。并将样品情
况立即通知运送机构。

1.3.3
对不合要求的标本，可以拒绝接受。

2
、梅毒的实验室检查

2.1
梅毒螺旋体暗视野显微镜检查

2.1.1
原理
< br>梅毒螺旋体侵入人体后，在皮肤黏膜下增殖，并很快沿着淋巴管到达附近淋巴
结，经过
2 -4
周的潜伏期，在侵入部位发生炎症反应，称为硬下疳，数天到
1
周后，淋巴结肿大 。二期梅毒是梅毒螺旋体由局部经淋巴结进入血液，在人体
内大量播散后而出现的全身表现，一般发生在 感染后的
7-10
周或硬下疳出现后
6-24
周，主要为皮肤黏膜损害，有扁 平疣、黏膜斑和玫瑰斑疹等。患梅毒的孕
妇可以通过胎盘使胎儿受染。研究证明，在妊娠期
7< br>周时，梅毒螺旋体即可通
过胎盘。其梅毒患者硬下疳、淋巴结、皮肤黏膜损害以及孕妇羊水中均可 检查
到梅毒螺旋体。将标本置于暗视野显微镜下，光线从聚光器的边缘斜射到涂片
上，可使梅毒 螺旋体折射出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检
测。

2.1.2
方法

2.1.2.1
仪器耗材：

1)

暗视野显微镜

2)

无菌纱布

3 / 9
3)

不锈钢刮刀

4)

灭菌棉拭子

5)

载玻片、盖玻片

6)

注射器，注射针头

7)

灭菌生理盐水

2.1.2.2
检测流程

1)

将待检标本制成生理盐水涂片，加盖玻片后立即备检。

2)

在预 先调整好的暗视野显微镜的聚光器上加数滴浸油，轻轻调低聚光器，
使之在载物台下方。

3)

将标本玻片置载物台上，上升聚光器，使浸油接触载玻片底面，避免浸油
内有气泡。

4)

镜检：先低倍后高倍，寻找有特征形态和运动方式的梅毒螺旋体。

2.1.3
结果

2.3.1.1
结果判读：

在 暗视野显微镜下观察
,
发现有纤细、白色、有折光的螺旋状微生物，长
6-
2 0um,
直径小于
0.2um
，有
6-14
个螺旋，具有旋转、蛇行 及伸缩等特征性的运
动方式，可判断为梅毒螺旋体。

2.3.1.2
结果报告：

暗视野显微镜下若发现上述特征的梅毒螺旋体则 报告阳性结果；未见到上述特
征的梅毒螺旋体则报告阴性结果。

2.1.4
临床意义

1)

梅毒螺旋体暗视野显微镜检测 阳性在临床上可确诊梅毒，特别是对于有皮
肤黏膜损害和淋巴结病变的一、二期梅毒的诊断具有重要价值 ，且具有快
速，方便，易操作等特点。

2)

若未能发现梅毒螺旋 体，不能排除梅毒诊断。阴性结果原因可能为：标本
中的微生物数量不足（单次的暗视野检测其敏感性低 于
50%
）、病人已接受
治疗、皮损已接近自然消退或取自非梅毒性皮损。

3)

无论暗视野显微镜检查的结果如何，都应进一步进行血清学检测。

2.1.5
注意事项

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