风疹怎么治疗乙酰胆碱酯酶(AchE)活性测定试剂盒说明书

2021年1月31日发(作者：牛皮癣初期症状)

货号：
MS2000
规格：
100
管
/96
样

乙酰胆碱酯酶（
AchE
）活性测定试剂盒说明书

微量法

注意：正式测定之前选择
2-3
个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

AchE
属于丝氨酸水解酶，广泛存在于各种动物组织和血清中 。
AchE
催化乙酰胆碱（
Ach
）
水解，在神经传导调节中起重要 作用。

测定原理：

AchE
催化
Ach
水解生 成胆碱，
胆碱与二硫对硝基苯甲酸（
DTNB
）作用生成
5-
巯基< br>-
硝基苯
甲酸（
TNB
）
；
TNB
在
412nm
处有吸收峰，通过测定
412 nm
吸光度增加速率，计算
AchE
活性。

自备实验用品及仪器：

可见分光光度计
/
酶标仪、微量石英比色皿
/96
孔板、低温离心机、水浴锅、可调式移液
枪和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体×1
瓶，4℃保存。

试剂二：液体×1
瓶，4℃避光保存。

试剂三：粉剂×1
瓶，4℃避光保存。临用前加入
1.3 mL
试剂二，充分震荡溶解。

试剂四：粉剂×1
支，4℃保存。临用前加入
1.3 mL
试剂二，充分震荡溶解。

粗酶液提取：

1.
组织：按照组织质量（
g
）
：试剂一体积
(mL)
为
1
：
5~10
的比例（建议称取约
0.1g
组织，加
入
1mL
试剂一）进行冰浴匀浆，
8000g 4
℃离心
10min
，取上清液待测。

2.

细 菌、真菌：按照细胞数量（
10
4
个）
：试剂一体积（
mL
）为
500~1000
：
1
的比例（建议
500
万细胞加入
1mL
试剂一）
，冰浴超声波破碎细胞（功率
300w
，超声
3
秒，间隔
7
秒，总时
间
3min
）
；然后8000g
，
4
℃，离心
10min
，取上清置于冰上待测。< br>
3.

血清等液体：直接测定。

测定操作：

1.

分光光度计
/
酶标仪预热
30 min
，调节波长到
412 nm
，蒸馏水调零。

2.
试剂二置于
37℃水浴中预热
30min
。

3.
取微量石英比色皿
/96
孔板，
依次加入
20
μ
L
上清液、
160
μ
L
试剂二、
10
μ
L
试剂三和
10
μ
L
试剂四，迅速混匀，于
412nm
处测 定
3min
内吸光值变化，第
10s
吸光值记为
A1
，第< br>190s
吸
光值记为
A2
。△A
测定管
=A2-A1
。

注意：空白管只需测定一次。

AchE
活性计算：

a.
使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1.

组织
AchE
活性

（
1
）按照蛋白浓度计算

活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生
1nmol TNB
的酶量为
1
个酶活单位。

AchE
酶活
(nmol/min/mg prot)= (
△A÷
ε
÷d×V
反总×10
9
)÷（Cpr ×V
样）÷T

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