付建华特殊染色法

2021年1月30日发(作者：治白发)
特殊染色法

一，

抗酸杆菌染色

1
，

试剂配制：

（
1
）

碱性品红乙醇液
：碱性品红
5g
，无水乙醇
100ml
（
2
）

5%
苯酚水溶液
：苯酚（稍加温使共溶解 ）
5ml
，蒸馏水
95ml
（
3
）

苯 酚碱性品红液
：碱性品红乙醇液
1ml
，
5%
苯酚水溶液
9 ml
（
4
）

20%
硫酸水溶液
：浓硫酸
20ml
，蒸馏水
80ml
（
5
）

汽油松节油液
：航空汽油（也可为普通汽油）1
份，松节油
1
份

2
，

染色程序：

（
1
）

切片用汽油松节油脱蜡
2
次，每次
5-10min
。

（
2
）

不经乙醇洗，只用纱布将切片周围余液擦干。

（
3
）

流水稍洗。

（
4
）

滴入苯酚碱性品红液，于室温下染
15
—
30min
。

（
5
）

流水去多余液体。

（
6
）

用
20%
硫酸水溶液分化至适当为止（一 般需
1
—
5min
）

（
7
）

流水充分冲洗。

（
8
）

用
Mayer
苏木精液浅染细胞核。

（
9
）

洗流水冲洗
10
—
15min
。

（
10
）

用风扇把切片吹干，随即二甲苯透明，中性树胶封固。

3
，

结果：抗酸杆菌（包括麻风杆菌和结核杆菌）呈鲜红色，胞核呈蓝色。


二，

奥新兰过碘酸雪夫代染色

简称（
AB
—
PAS
染色）

（溶液配制）

1
，
0.3%
的奥辛兰醋酸液：奥新兰0.3g
，蒸馏水
97ml
，冰醋酸
3ml
2
，1%
过碘酸水溶液，
schitf
代试剂及亚硫酸冲洗液配发同。

（
染色方法
）

1
，

切片按常规脱蜡水洗，再入蒸馏水洗。

2
，

染于
0.3%
或
1%
奥新兰醋酸液中
10
—
30
分钟 。

3
，

用蒸馏水充分洗，至少洗
4
次。

4
，

1%
过碘酸水溶液氧化
5
—
10
分钟。

5
，

用蒸馏水从分洗，至少
3
—
4
次。

6
，

Schiff
代试剂染
10
—
30
分钟。

7
，

直接用亚硫酸冲洗
3
次，每次
2
分 钟。
（有固定的作用，把多余的
schiff
试液洗净）

8
，

流动自来水洗
5
分钟后蒸馏水洗。

9
，

苏木素染核。必要时盐酸究竟稍分化后充分用自来水洗。

10
，

95%

酒精，无水酒精脱水，二甲苯透明，树胶封固。

（结果）



酸性粘多糖呈靛兰色，中性粘旦白呈鲜紫红色或品红色，中性及酸性粘蛋白混
合物呈 紫兰色。软骨紫蓝核呈蓝色。

三，

改良
Hale
胶状铁染色液的配制和应用

（溶液配制
）< br>29%
氯化铁
4.4ml
，蒸馏水
250ml
将蒸馏水置于烧 杯内煮沸，然后滴加氯化铁
不断搅动直至溶液变成暗红色。
停止加热，
将冷却后使用。
2%
亚铁氯化钾水溶液和
2%
盐酸
水溶液各
25ml
过滤后使用。

注
：
1%
中性品红的配制，中性品红
1g
用
5%
硫酸铝溶

1N
盐酸
75ml
（
染色步骤
）


1
，

石蜡切片脱蜡至蒸馏水。

2
，

3%
新配制好的醋酸水溶液中处理切片
5min
。

3
，

用胶状铁染液染色
40
—
60min
4
，

3%
醋酸水溶液冲洗
3
—
4
次，每次两分钟。

5
，

滴入
2%
亚铁氯化钾盐酸混合溶液处理
10min
。

6
，

蒸馏水洗
3
—
4
次。

7
，

用
1%
中性红溶液复染
3
—
5min
。

8
，

稍水洗。

9
，

梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

四，

网状纤维染色（网织染色）

（一）

氢氧化银氨液浸染法（
I
）

1,
实际配制：
< br>（
1
）
Gordon
—
Sweets
银氨液
：用小量杯盛
10%
硝酸银水溶液
2ml
，逐滴加入氢氧化铵，边
滴 边摇动容器。先出现沉淀物，继续滴入氢氧化按至所形成的沉淀物恰好溶解。加入
3%
氢
氧化钠溶液
2ml
，在此行程沉淀。继续滴入氢氧化氨，直至沉淀物再次恰好溶解。最后加蒸
馏水至
40ml
，配好后用棕色砂塞瓶盛装，置于
4
摄氏度冰箱内保 存，使用前取出恢复到室
温。

（
2
）
酸化高锰酸钾水溶液
：高锰酸钾
0.5g
，蒸馏水
100ml
乙液
：
0.5%
硫酸水溶液


硫酸
0. 5ml
，蒸馏水
100ml
（
99.5ml
）

甲乙两液分瓶盛装，临用前等份混合。

（
3
）
2%
草酸液
：草酸
2g
，蒸馏水
100ml
（
4
）
2%
硫酸铁铵液
：硫酸铁铵
2g
，蒸馏水
100ml （
5
）
4%
中性甲醛液
：甲醛（
40%
）10ml
，蒸馏水
90ml
。






碳酸钙加至饱和，用时取其上清液。

（
6
）
核固红染液
：核固红
0.1g
。
；硫酸铝
5g
，蒸 馏水
100ml
，麝香草酚
50mg
。






先把硫酸铝溶于蒸馏水，然后加入核固红，稍加温溶解冷却后过滤，最后加入麝香草
酚

2
，染色程序：

（
1
）切片脱蜡至水

（
2
）酸化高锰酸钾液氧化
5min
（
3
）稍水 洗（
4
）
2%
草酸水溶液漂白
1
—
2min
（
5
）稍水洗

（
6
）
2%
硫酸铁铵水 溶液媒染
5min
（
7
）稍水洗，再用蒸馏水洗
1
次

（
8
）滴加
Gordon
—
Sweet
银氨液 ，作用
1min
（
9
）蒸馏水稍洗

（
10
）
4%
中性甲醛液还原
1min
（
11
）流水冲洗
5
—
10min
（
12
）以0.2%
氯化金调色
1
—
2min
（
13
） 蒸馏水洗（
14
）固定于
5%
硫代硫酸钠
2min
（15
）用核固红液复染
5
—
10min
或行
HE
复染

（
16
）稍水洗（
17
）常规脱水，透明，中性树胶封固。

3
，
染色结果
;
网状纤维呈黑色，
胞核呈红色
（用 核固红复染）
，
或蓝色
（用苏木素复染）
，
胶原纤维呈黄棕色，细胞 质呈淡红色（用伊红复染）
。

五，

高碘酸—无色品红（
PAS
）法

1
，

试剂配制

（
1
）
0.5%
高碘酸水溶液：高碘酸
0.5g
，蒸馏水
100ml
。溶解后，用小口砂塞瓶盛装，置于
4
摄氏度冰箱保存。使用前取出恢复至室温。

（
2
）
0.5 %
偏重亚硫酸钠：偏重亚硫酸钠
0.5g
，蒸馏水
100ml
。溶解 后，用小口砂塞瓶盛装，
置于
4
摄氏度冰箱保存。使用前取出恢复至室温。

（
3
）无色品红液（
schiff
试剂）
：碱性品红
1g
，蒸馏水
200ml
，
1N
盐酸
20ml
， 偏重亚硫酸
钠
1
—
1.5g
，活性炭
1
—
1.5g
取一只
500ml
的洁净三角烧瓶盛蒸馏水
200ml
并 煮沸，将碱性品红加入煮沸的蒸馏水中，
摇动数分钟使碱性品红完全溶解（此时溶液为深红色）待溶液冷 却至
50
摄氏度时，过滤至
另一只洁净三角烧瓶内，加入
1N
盐酸< br>20ml
，待溶液冷却至
25
摄氏度左右时，再加入偏重
亚硫酸钠，随 即用胶塞塞紧瓶口，并轻轻摇动使其溶解，此时碱性品红液的颜色明显变淡，
将溶液置于室温，暗处24h
，此时溶液应呈浅稻草黄色或浅红色。加入活性碳粉搅匀后，塞
瓶口轻摇
1
—
2min
，静置
1
—
2h
，然后，将溶液通过双 层滤纸过滤到小口砂塞瓶内，此时溶
液应完全无色，即为无色品红，又称
Schiff
液，置于
4
摄氏度冰箱内保存。

（
4
）亮绿水溶液：亮绿
0.2g
，蒸馏水
99.8ml
，冰醋酸
0.2ml
2
，染色程序

（
1
）

切片脱蜡至水（
2
）
0.5%
高碘的氧化
5
—
8min
（
3
）流水冲洗
2min
再用蒸馏水洗





（
4
）
入无水品红液，
于暗处并加盖作用10
—
20min
（
5
）
0.5%
偏重亚硫酸 钠液滴洗
2
次，
每次约
1min
（
6
）流水冲洗< br>5min
（
7
）亮绿水溶液复染数秒

（
8
）稍水洗（
9
）常规脱水，透明，封片。

六，

弹力纤维染色

（一）

醛品红法

1
，

试剂配制

（
1
）
Lugol
碘液：碘屯
1g
，碘化钾
2g
，蒸馏水
10 0ml
。先去碘化钾溶于
20ml
蒸馏水中，
再加入碘屯，摇动至碘屯溶解， 再把余下蒸馏水加入。

（
2
）

5%
硫代硫酸钠水溶液：硫代硫酸钠
5g
，蒸馏水
100ml
（
3
）

醛品红染液：碱性品红
0.5g
，
70%
乙醇
100ml
浓盐酸
1ml
，三聚乙醛
1ml
将碱性品红溶于
70%
乙醇，然后加入浓盐酸和三聚乙醛，轻轻摇动使其混合均匀，< br>于室温下静至
1
—
2
天
（室温低时需
3
—< br>4
天）
，
待变为深色即为成熟。
过滤于小口砂
塞瓶内，置4
摄氏度冰箱内保存备用。

(4)
橙黄
G
染液：橙黄
G2g
，蒸馏水
100ml
，磷铵酸
5g
。混合后稍摇动数 分钟，使尽量溶
解，静置一夜，取上清液使用。

2
，染色程序

（
1
）

组织块固定于
4%
中性甲醛液中，常规脱水，石蜡包埋切片。

（
2
）

切片脱蜡至水（
3
）用
Lugo l
碘液处理
5min
（
4
）稍水洗

（
5
）
5%
硫代硫酸钠液处理
5min
（
6
）流水冲洗
5min
（
7
）
7%
乙醇稍洗

（
8
）醛品红液浸染
10min
（
9
）
70%
乙醇 浸洗
2
次，每次约
30s
，至且片不再脱色为止

（
10
）稍水洗（
11
）橙黄
G
液滴染约
1s
（< br>12
）稍水洗（
13
）常规脱水，透明，封胶。

（二）
，
地衣红法

1
，试剂配制：地衣红乙醇液：地衣红
1g
，
70%
乙醇
99ml
，浓盐酸
1ml
。














将地衣红溶于
70%
乙醇，然 后加入浓盐酸，放置
1
—
2
天即可食用。

2
，染色程序：

（
1
）

组织块固定于
4%
中性甲醛液中，常规脱水，石蜡包埋和切片

（
2
）

切片脱蜡至
70%
乙醇。

（
3
）

地衣红乙醇液侵染
3h
。把切片置入过滤 过染液放入温箱内
15
—
20min
。或在室
温下过夜。时间长效果 为最佳

（
4
）

70%
乙醇浸洗
2次，每次约
30s
，至染液不脱出为止。

（
5
）

95%
乙醇浸洗，无水乙醇脱水。

（
6
）

二甲苯透明，中性树胶封固

2
，

结果：弹力纤维呈深棕红色


此液配后，宜置于冰箱保存，
24h
后可以使用。

七，

马松

1
，

脱蜡至水

2
，

10%
重铬酸钾，
10%
三氯醋酸，
30
分钟

3
，

充分水洗

4
，

1%
天青石兰

5min
5
，

水洗

6
，

苏木素
5min
7
，

水洗

8
，

酸性复红（
1%
丽春红——
1%
酸性复红）
1
：
2
9
，

擦干周围液体不用水洗

10
，
0.5%
冰醋酸，
1%
磷铝酸快速分化

11
，擦干周围液，直接加入亮绿

12
，
0.5%
冰醋酸分化，快速

13
，直入
95%
酒精脱水透明封固

八，

磷钨酸苏木素
PTAH
纤维素法

染横纹肌

1
，

石蜡切片至水

2
，

0.25%
高锰酸钾

氧化
5min



3
，
5%
草酸漂白至组织完全脱色为止。

4
，水洗



5
，放入
PTAH
苏木素过夜



6
，
95%
酒精逐级脱水透明封固

结果
;
横纹肌纤维，纤维素

细胞核神经胶质纤维呈兰色胶

原纤维，网状纤维软骨基质呈棕红

弹力纤维紫色

试剂配制
：

（
1
）
0.25%
高锰酸钾 ：高锰酸钾
0.25g
，蒸馏水
100ml
（
2
）
5%
草酸：草酸
5g
，蒸馏水
100ml
（
3
）
PTAH
配制：苏木素
0.1g
，磷钨酸
2mg
，蒸馏水
100ml
方法：
1
，先用
20ml
的蒸馏水
0 .1mg
的苏木素加温溶解后，冷却

2
，用余下的
80ml
蒸馏水溶解
2mg
的磷钨酸

1
，
2
混合即配好此液。

九，

甲苯胺蓝

染肥大细胞

1
，

石蜡切片至蒸馏水

2
，

经
60%
乙醇液浸润
2min
3
，

用甲苯胺蓝液染
5
—
10
分钟

4
，

自来水速洗

5
，

用丙酮溶液脱水
20
—
30
秒

6
，

二甲苯苯透明封固

结果
;
肥大细胞颗粒呈紫红色

配方：甲苯胺蓝液体：甲苯胺蓝
0.2g
，
60%
无水乙醇
50ml
，
4%
乙醚
50ml
。

十，

PTAH
法（
2
）

改良
PTAH
法（< br>1
）改良磷钨酸苏木素染液的配制：苏木素
0.1g
，磷钨酸
2g，蒸馏水
100ml
，
30%
双氧水液适量备用。
将苏木素溶于
20ml
蒸馏水中加热溶解，
再将磷钨酸溶于
80ml
蒸馏
水中，待磷钨酸苏木素液冷却后将二者混合，再加入
1
滴（约
25ul
）30%
双氧水液，此时混
合液颜色逐渐由浅变深，呈深棕红色，约
3h
后 即可使用。













（
2
）改良
PTAH
的 染色步骤：切片常规脱蜡至水，蒸馏水洗，切片滴加
1
—
2
滴
30%
双氧水液氧化
1
—
2min
，充分水洗。入改良
PTAH< br>液
1h
，
95%
乙醇快速分化脱水，无
水乙醇脱水，
TO
生物制剂透明，中性树胶封片（
3
，
4
）
.
十一，网织

快速法

1
，

石蜡切片至水

2
，

进入
0.25%
高猛酸钾
10
分钟

3
，

水洗


4
，
2%
草酸漂白

4
，

蒸馏水洗

6
，
2%
硫酸铁铵媒染
1
分钟

7
，

水洗，蒸馏水洗。

8
，

入氨银液内
1
分钟

9
，

蒸馏水洗
/
10
，

入
20%
甲醛液中
5
分钟

11
，

蒸馏水洗



12
，入
0.2%
氯化金液体中
2
分钟

13
，水洗，蒸馏水洗

14
，苏木素染核


15
，
V
,G
复杂
1
分钟

16
，脱水透明，封固

结果：网状纤维灰黑色，胶原纤维红色，基质黄色，核蓝色。

染液配制：甲液：硝酸银
10.2g

,
蒸馏水
100ml










乙液：氢氧化钠

3.1g
，蒸馏水
100ml
取甲液
5ml
滴加氨水至溶 解呈清亮，再加入
5ml
乙液，此时该液突染变为紫黑色，再
滴加氨水至清亮为止，补 加
4
滴氨水，用蒸馏水补足
50ml
十二，横纹肌纤维染色（
PTAH
染色液
）

主要方法是磷钨酸苏木精法（心肌）

1
，

试剂的配制

(1)

磷钨酸苏木素液：苏木素
0.1g< br>，蒸馏水
100ml
，磷钨酸
2g
。

取一烧杯盛蒸 馏水
30ml
，加入苏木精，稍加热使苏木精完全溶解，再取另一烧杯盛余下的
蒸馏水
70ml
，加入磷钨酸使其完全溶解。待苏木精冷后，将其与磷钨酸液混合，置于光亮
处数周至数月，待成熟后方可使用。