脾脏破裂微生物鉴定之生化实验大全

2021年1月30日发(作者：玻尿酸隆鼻手术费用)
（
一
）
碳
水
化
合
物
代
谢
实
验

糖（醇、苷）类发酵实验

（
1)
原理：细菌分解糖的能力与该菌是否含有分解某种糖的酶密切相关，故
分解糖的能力各不相同，细菌分解 糖类后的终产物亦不一致，在含糖培养基
中加入指示剂，若细菌分解糖则产酸或产酸产气，使培养基颜色 改变，从而
判断细菌是否分解某种糖或其他碳水化合物。

（
2)
基 本培养基：在培养基中加入
%-1%
的糖类（单糖、双糖、或者多糖）
、
醇类 （甘露醇、肌醇）苷类（水杨苷、菊糖等
).
培养基可为液体、半固体、
固体或微量生 化管几种类型。

（
3)
实验方法：取某一种细菌的
24h
纯培养物分别接种到葡萄糖、乳糖、麦
芽糖、甘露醇、蔗糖等培养基内，
37
℃培养< br>24h
，观察结果并记录。

（
4)
结果判定：如果接种进去 的细菌可以发酵某种糖或醇，则可产酸，使培
养基由紫色变成黄色，如果不发酵，则仍保持紫色。如发酵 的同时又产生气
体，则在微量发酵管顶部积有气泡。

（
5)
应用： 是鉴定细菌最主要最基本的实验，特别是对肠杆菌科细菌的鉴定
尤为重要。

氧化型与发酵型（
O/F)
的测定

（
1
）原理：
细菌在分解葡萄糖的过程中，
必需有氧的参加，
称为氧化型
（
O）
，
细菌在分解葡萄糖过程中可以进行无氧降解的，称为发酵型
(F)
。 发酵型细
菌无论在有氧无氧的环境中都能分解葡萄糖。
不分解葡萄糖的细菌称为产碱
型
(-)
。这在区别微球菌与葡萄球菌、肠杆菌科成员中尤其有意义。

（2
）培养基：培养基蛋白胨
2g
，氯化钠
5g
，磷酸氢二钾，葡 萄糖
10g
，琼
脂
3g
，
1%
溴麝香草酚蓝
3mL
，
蒸馏水
1000mL
。
将蛋白胨、
盐、
琼脂和水混合，
加热溶解，
校正
PH
至，
然后加葡萄糖和指示剂，< br>加热溶解，
分装试管，
3-4mL/
管；
115
℃，高压蒸汽 灭菌
20min
，取出冷却成琼脂柱。

（
3
）试验方法： 挑取
18-24h
的幼龄斜面培养物，穿刺接种，每种细菌接种
两管，于其中一管覆盖
1mL
液体石蜡，
37
℃培养
24h
或更长时间。

（
4
）结果判定：


封油管

产酸（黄色）

不产酸（绿色）

不产酸（绿色）

未封油管

产酸（黄色）

产酸（黄色）

不产酸（绿色）

发酵型（
F
）

氧化型（
O
）

产碱型（
-
）

（
5
）
应用：
O/F
试验主要适用于
G
-
肠道杆菌的鉴别。
肠杆菌科的细菌为发
酵型，其他肠道菌为非发酵型，非发酵型细菌为氧化型或 产碱型。该试验也
用于鉴别葡萄球菌（
F
）和微球菌（
O
）
。

β
-
半乳糖苷（
ONPG)
实验

（
1
）原理：有的细菌可以产生β
-
半乳糖苷酶，能分解邻
-
硝基酚
-
β
-D-
半乳糖苷
,
而生成黄色的邻
-< br>硝基酚，在很低的浓度下也可以检测出。

（
2
）培养基：邻硝基酚β
-
半乳糖苷，
L
的灭 菌
1%
蛋白胨水
300mL
。先将
前两种成分混合溶解，
过 滤除菌，
在无菌条件下与
1%
蛋白胨水混合，
分装试
管，每管
2-3mL
。无菌检验后备用。

（
3
）实验方法：取一环细菌纯 培养物接种在
ONPG
培养基上置
37
℃培养
1-3h
或< br>24h
如有β
-
半乳糖苷酶，
会在
3h
内产生黄色的 邻硝基酚；
如无此酶，
则在
24h
内不变色。

（
4
）应用：该试验
常用于迟缓发酵乳糖的细菌的快速鉴定
。如埃希菌属
枸橼酸 杆菌属、克雷伯菌属等为阳性；不发酵乳糖的沙门菌属、变形杆菌属
等为阴性。
ONPG
试验不能代替乳糖发酵试验，只能测定β
-
半乳糖苷酶的活
性。

七叶苷水解实验

（
1
）原理：有的细菌可以将七叶苷分解为七叶素 和葡萄糖，七叶素与
培养基中的枸橼酸铁的
Fe
反应，生成黑色的化合物，使培养基呈 黑色。

（
2
）应用：主要用于肠球菌与其他链球菌的鉴别，前者阳性，后者 阴
性，也可用于革兰氏阴性杆菌及厌氧菌的鉴别。


2+
甲基红实验（
MR
）

（
1
）原理： 细菌分解培养基中的葡萄糖产酸，当产酸量大，使培养基的
pH
降至以下时，加入甲基红指示剂 而变红，为甲基红试验阳性。若细菌分解葡
萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其他物质（如醇、酮 、醛、气体和
水等）则培养基的
pH
仍在以上，故加入甲基红试剂呈橘黄色，为阴性。

（
2
）实验方法：一种细菌的
24h
培养物，接种于葡萄糖蛋白胨水
培养基中
置
37
℃培养
48-72h
， 取出后加甲基红试剂
3-5
滴，凡培养液呈红色者为阳
性，橙色为可疑，黄色者为阴性 。

（
3
）应用：主要用于
鉴别大肠埃希菌（
+
） 与产气肠杆菌（
-
）
，前者为阳性
后者为阴性。沙门菌属、志贺菌属、枸橼酸 杆菌属、变形杆菌属阳性，肠杆
菌属、哈夫尼亚菌属阴性。

V-P
实验

（
1
）原理：有些细菌能分解葡萄糖产生丙酮 酸，丙酮酸脱羧产生乙酰甲基
甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性环境中，被空气中的氧氧化二乙酰，二乙酰与培
养基内蛋白胨中精氨酸所含的胍基发生反应生成红色化合物。
若培养基中的
胍基含量过 少，则可加入少量含胍基的化合物等。

（
2
）
V-P
试剂 ：肌酸
%
或原粉。
40%
的
NaOH
溶液。
（
3
）实验方法：
接种实验菌于葡萄糖蛋白胨水培养基
（与甲基红实验相 同）
中，每次两个重复，置适温培养
2-6d
，取培养液和
40%NaOH< br>等量想混，加入
少许肌酸，
10min
如培养液出现红色，即为实验阳性反应， 有时需要放置更
长时间才出现红色反应。

（
4
）应用：本实验常与 甲基红实验一起用，因为前者阳性的细菌，后者通
常为阴性。

（二）蛋白质和氨基酸的代谢实验

明胶液化实验

（
1< br>）原理：某些可以产生一种胞外蛋白水解酶（明胶酶）
，能使明胶分
解为氨基酸，使明胶 失去凝固能力而液化，因而使半固体的明胶培养基成为
流动的液体。

（
2< br>）实验方法：取
18-24h
的斜面培养物穿刺接种，并有两支未接种的
空白对 照。

（
3
）结果观察：与
30
℃培养
20
天后观察，明胶液化的为阳性。由于室
温下明胶培养基呈液状，因此在观察结果时，应将其放置于4
℃的冰箱中
30min
后拿出观察。若明胶仍能全部凝固为阴性，有部分或全部 不能凝固为
阳性。

吲哚实验（
Ind
）

（1
）原理：
某些细菌具有色氨酸酶，
能分解蛋白胨水中的色氨酸产生吲哚，
当加入吲哚试剂（对二甲氨基笨甲醛）后形成红色的玫瑰吲哚。该试验也称
靛基质试验。

（
2
）培养基：
蛋白胨水培养基
。

（
3
）实验方法：将待检菌接种于富含色氨酸的蛋白胨水培养基中，
35
℃孵
育< br>24-48h
，沿试管壁慢慢加入吲哚试剂，观察结果。

（
4
）结果：于两夜面接触处出现红色为阳性，无色为阴性。

（< br>5
）应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定，如大肠埃希菌与产气肠杆菌，
肺炎克雷伯菌和 产酸克雷伯菌的鉴别。大肠埃希菌为阳性，沙门菌属则为阴
性。