广州医学院第三附属医院乳酸菌检测国标方法

2021年1月30日发(作者：肝火旺吃什么药好)
乳酸菌检测方法

1
适用范围

本方法适用于清谷田园食品有限公司系列产品及原料中的乳酸菌的检测。

2
设备和仪器


2.1
恒温培养箱：
36
±
1
℃

2.2
天平：感量为
0.01g
2.3
无菌吸管：
1 ml
、
2ml
、
10ml
2.4
无菌锥形瓶：
500ml
2.5
无菌培养皿：直径为
90mm
2.6
无菌试管：
18
×
180mm
2.9
酒精灯

2.10
立式蒸汽压力灭菌器

2.11
超净工作台

2.12
厌氧缸

3
试剂


3.1
无菌生理盐水：称取
8.5g
氯化钠溶于
100 0ml
蒸馏水中，
121
℃高压灭菌
15min
。

3.2 MRS
（
Man Rogosa Sharpe
）培养基

3.2.1
成分

蛋白胨
10.0g

牛肉粉
5.0g

酵母粉
4.0g

葡萄糖
20.0g

吐温
80 1.0mL
K2HPO4.7H2O 2.0g

醋酸钠
.3H2O 5.0g

柠檬酸三铵
2.0g
MnSO4.7H2O 0.2g
MnSO4.4H2O 0.05g

琼脂粉
15g
3.2.2
制法：< br>将上述成分加于
1000mL
蒸馏水中，
调节
PH
至
6.2
±
0.2
，
加热煮沸
溶解，分装于锥形瓶中，在
12 1
℃高压灭菌
15-20min
。

3.3
莫匹罗星锂盐（
Li- Mupirocin
）和半胱氨酸盐酸盐改良
MRS
培养基：

3.3.1

莫匹罗星锂盐储备液制备：
称取
50mg
莫匹罗星锂盐加入到
50
mL
蒸馏
水中，用
0.22
mm
微孔滤膜过滤除菌。

3.3.2

半胱氨酸盐酸盐储备液制备：称取
250mg
莫匹罗星锂盐加入到
50 mL
蒸馏水中，用
0.22
mm
微孔滤膜过滤除菌。

3.3.3

制法

将
A.1.1
成分加入到
950 mL
蒸馏水中，加热溶解，调节
pH
，分装后
121
℃
高压灭菌
15 min
～
20 min
。临用时加热熔化琼脂，在水浴中冷至
48
℃，用带
有
0.22
mm
微孔滤膜的注射器将莫匹罗星锂盐储备液 及半胱氨酸盐酸盐储备液
制备加入到熔化琼脂中，使培养基中莫匹罗星锂盐的浓度为
50
mg/mL
，半胱氨
酸盐酸盐的浓度为
500
mg/mL
。

3.4
MC
培养基

3.4.1

成分

大豆蛋白胨











牛肉粉

酵母粉

葡萄糖

乳
糖


























碳酸钙

琼脂

10.0 g
15.0 g
5.0 g
3.0 g
3.0 g
20.0 g
20.0 g
蒸馏水

1
％中性红溶液



3.4.2

制法

1 000 mL
5.0 mL
将前面
7
种成分加入蒸馏水中，加热溶解，调节
pH
至
6.0
±
0.2，加入中性红溶
液。分装后
121
℃高压灭菌
15 min
～
20 min
。

4
检验程序

乳酸菌检验程序见图
1
。















5

操作步骤

5.1
样品制备

5.1.1
样品的全部制备过程均应遵循无菌操作程序。

5.1.2
冷冻样品可先使其在
2
℃～
5
℃条件下解冻，时间不超过
18 h
，也
可在温度不超过
45
℃的条件解冻，时间不超过
15 min
。