育儿网官网高中生物实验DNA的粗提取和鉴定实验中应注意的问题

2021年1月29日发(作者：关节炎的治疗)
高中生物实验
DNA
的粗提取和鉴定实验中应注意的
问题




⑴充分搅拌鸡血细胞液。
DNA
存在于鸡血细胞的细胞核中。< br>将
鸡血细胞液与蒸馏水混合后，
必须用玻璃棒沿一个方向快速搅拌，
使
鸡血细胞加速破裂，并释放出
DNA
。



⑵沉淀
DNA
时必须用冷酒精。实验前必须准备好大量的体积
分数为
95%
的酒精 ，并在冰箱中至少存放
24h
。



⑶正确搅拌含有悬浮 物的溶液。实验步骤
3
、
5
、
7
都需要用玻
璃棒搅 拌。在进行步骤
3
、
5
时，玻璃棒不要直接接触烧杯底部，而
且搅拌 要轻缓，以便获得较完整的
DNA
分子。进行步骤
7
时，要将
玻璃棒 插入烧杯中溶液的中间，用手缓慢转动
5min
～
10min
。



本实验中鉴定
DNA
的方法为二苯胺法。如果在没有二苯胺的< br>情况下也可以用以下几种方法。



典例解析



下列关于
“DNA
的粗提取与鉴定
”
的实验原理中，说法错误的是




在氯化钠溶液中的溶解度随溶液浓度的变化而改变



B .
利用
DNA
不溶于酒精的性质，
可除去细胞中溶于酒精的物质
而得 到较纯的
DNA



是大分子有机物，不溶于水而溶于某些有机溶剂




溶液中加入二苯胺试剂经沸水浴后会出现蓝色反应



答案：
C


下列关于实验操作的说法中，有误的是
()


A.
该实验中有两次加入蒸馏水，均是为了析出
DNA


B.
该实验学生操作中多次用到搅拌，
除最后一步未强调方向外 ，
其余均要求单向搅拌



C.
该实验中有
3< br>次过滤，过滤时使用纱布层数与需用滤液或黏
稠物有关



D.
实验
三次加
入
NaCl
溶液，
无论浓
度是2mol/L
，
还是
0.015mol/L
，均是为了溶解
DN A


解析：对照比较表可知，除
A
说法有误外，其余各项均正确 。
两次加蒸馏水，第一次是为了使细胞吸水破裂释放出核物质
(DNA)
，
第 二次是为了降低
NaCl
溶液的浓度从而析出
DNA
。



⑷
DNA
粘稠物的再溶解：
;


⑸提取杂质较少的
DNA
白色乳状丝状物：
;


⑹鉴定
DNA
是否存在可用试剂：
。



解析：⑹鉴定
DNA
是否存在常用：二苯胺试剂沸水浴为蓝色
反应
;
也可选用甲基绿试剂，其颜色反应为蓝绿色。
(
其它略
)


答案：⑴蒸馏水⑵
2mol/L NaCl
溶液⑶蒸馏水⑷
2mol/L N aCl
溶
液⑸冷却的体积分数为
95%
的酒精⑹二苯胺试剂或甲基绿试剂


(
带
*
的为重点实验
)


实验一：生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定
**


实验材料的选择：



1.
可溶性还原糖的鉴定：生物组 织中的糖类有还原糖和非还原
糖两类。常见的还原糖有葡萄糖、果糖和麦芽糖
;
蔗糖< br>(
甘蔗茎、甜菜
的块根等
)
、淀粉
(
马铃薯、番薯的 块茎等
)
是非还原糖。在双子叶植物
中，
光合作用的主要产物葡萄糖形成后，
合成为淀粉暂时储存在叶子
内，因此最好不用双子叶的叶子作为实验的材料。有些单子叶植物，
如韭菜，
叶子内虽然含有大量的可溶性还原糖，
但由于叶片中叶绿素
颜色较深 ，
对于鉴定时的颜色反应起着遮盖作用，
导致实验现象不明
显，
一般也不选用 。
本实验最理想的实验材料是还原糖含量较高的植
物组织，而且要求组织的颜色较浅或近于白色 ，如苹果和犁的果实，
也可以用白色的甘蓝叶、白萝卜替代。



经实验比较，颜色反应的明显程度依次为：苹果、梨、白色甘
蓝叶和白萝卜。



脂肪的鉴定：所用材料要求一脂肪含量高，二有一定大小做徒
手切片，花 生种子符合本实验的要求。实验前要将花生种子浸泡
3~4h
，有利于切成薄片，但浸泡时间也 不宜过长，否则组织太软，切
下的薄片不易成形。



试剂的选用及注意事项：



可溶性还原糖鉴定过程中，因斐林试 剂很不稳定，故应将组成
试剂的两种溶液分别配制，使用是再加以混合，即现配现用。切不要
将 甲液和乙液分别加入组织样液中。
实际上这个反应利用的是斐林试
剂中的氢氧化铜作为弱氧化剂 参与还原糖的反应，
而氢氧化铜放置过
久沉淀过多则不利于反应。



在水浴加热时，试管底部不要触及烧杯底，以防止试管受热不
均匀而爆裂
;
并注意试管口也不要朝向自己或他人，防止沸腾的溶液
冲出试管造成烫伤。另外，
加入 的斐林试剂不要太多，反而会使实验
效果不理想。



脂肪鉴定实验键是能否切出符合要求的薄切片，太厚光线不能
通过。



蛋
白质
的鉴定
实验
中，
使用双
缩脲试剂
时，应
先加
试剂
A(NaOH)
，
造成碱性环境后 再加入试剂
B(CuSO4)(
注意和使用斐林试
剂的区别
)
。另外 试剂
B
不能太多，否则硫酸铜的蓝色将遮盖颜色反
应的真实效果。



使用原理不同



斐林试剂是新配制的
Cu( OH)2
溶液，它在加热的条件下与醛基
反应，被还原成砖红色的
Cu2O
沉 淀，可用于鉴定还原糖的存在，实
验中溶液颜色的变化过程为：浅蓝色
----
棕色< br>-----
砖红色



鉴定生物组织中是否含有蛋白质时， 常用双缩脲法，使用的是
双缩脲试剂，
发生的是双缩脲反应。
双缩脲反应的实质是在碱 性条件
下，
Cu2+
与双缩脲发生的紫色反应。而蛋白质分子中有很多与双缩
脲
(H2NOC-NH-CONH2)
结构相似的肽键，所以蛋白质都能与双缩脲
发生 颜色反应，可以使用双缩脲试剂鉴定蛋白质的存在。



使用时的注意事项：



1.
显微镜的镜头有两种：目镜 和物镜。目镜可从镜筒上端开口
处插入，
目镜长度与放大倍数成
“
反比
“
，
即目镜越长，
放大倍数越小
;
目镜越短，放大倍数越大。而物镜的上端有螺丝，可旋转固定在镜筒
下端连接的转换器的
3
个开口上，且物镜 长度与放大倍数成
“
正比
”
，
即越长，放大倍数越大。焦距调好后镜 头与盖玻片的距离越远，物镜
越短，放大倍数越小
;
反之，放大倍数越大。显微镜的放 大倍数为目
镜放大倍数与物镜放大倍数的乘积。



在显微镜下所成物象为倒立放大的虚象。



此外，由于低倍物镜 的通光量比高倍物镜的通光量大，所以低
倍镜的视野较明亮
;
而高倍物镜，虽然放大倍 数大，实际观察到的标
本区域小，视野教暗



视野中出现异物有 三种情况：在物镜上、目镜上和装片上。如
移动装片异物不动，说明不在装片上
;
转动 转换器，换上高倍镜，仍
可观察到，说明不在物镜上，可判断异物在目镜上。



低倍镜观察：将装片放到载物台上，使标本正对通光中心，用
压片夹压住装片
;
双眼注视物镜，转动粗准焦螺旋，下降镜筒至距玻
片
2mm~3mm
处< br>(
不要让物镜触及玻片
)
，
左眼注视目镜转动粗准焦螺
旋，< br>上升镜筒，
当看到物像时，
调节洗准焦螺旋，
直到看清物象为止。
转动 转换器，
当由低倍镜转换成高倍镜时，
物象变大，
视野范围变小、
变暗，因此 ，换高倍镜之前，一定要把观察的物象移到视野的中央，
并且将反光镜的平面镜换成凹面镜，同时扩大光 圈。



使用显微镜的程序：取镜
-----
安放
----
对光
---
压片
---
观察



下降镜筒时，一定要侧目注视物镜，防止镜头触及玻片而压碎
玻片或损坏透镜



观察植物细胞的有丝分裂
**


选材：应选取有丝分裂旺盛的细胞，如植物根尖分生区的细胞