抬头纹多两种去除血清高丰度蛋白方法的比较研1

2021年1月29日发(作者：两个月的宝宝大便)
两种去除血清高丰度蛋白方法的比较研究



比较乙腈沉淀法和
MERCK
公司的血清白蛋白和

IgG
去除试剂盒去除人血清中高丰度蛋
白的效果。方法

应用乙腈沉淀法和
MERCK
公司的血清白蛋白和

IgG
去除试剂盒对血清
样品进行处理，
Tricine-SDS- PAGE
电泳和
SELDI-TOF- MS
检测去除高丰度蛋白的效果。结
果

乙腈沉淀法能在去除血清高中丰度蛋 白的同时收获更多的
10kD
以下的小分子量蛋白，
MERCK
公司的试剂盒 也能有效地去除血清高中丰度蛋白，特异性较好。结论

两种方法均
能去除血清中高丰度蛋白，需根据研究目的选择适合的方法。


血清中小分子量蛋白（
<10kD
）认为是一些激素、细胞因子、生长因子以及一些大 分子蛋白
水解的片段并且在生物学过程中扮演着关键的角色
[1,
2]
，并 可能作为疾病的标志物。对肝
癌患者血清的检测中，分子量
2
～
10 kD< br>的小分子量蛋白，有许多蛋白在肝癌患者血清中高
表达，这些蛋白很可能是新的肝癌相关的血清蛋 白标志物
[3]
。对这些差异蛋白分子进行鉴
定，
将有助于探讨肝癌的发生机 制，
并为设计治疗靶点提供依据，
对蛋白质数据库的进一步
完善具有重要意义。

从复杂的血清样品中鉴定出标志蛋白，
首先要考虑的问题是血清中蛋白质种类很多，
其中有
许多丰度较高但没有特殊生物学信息的蛋白质，
对目前的蛋白质分离鉴定技术提出了巨 大挑
战。
因此高丰度蛋白的去除和低丰度蛋白的富集己成为血清样品处理中的首要步骤，
本研究
主要对乙腈沉淀法和
Merck
公司的去除
Albumin/IgG
试剂盒法去除血清中高丰度蛋白和富集
小分子蛋白的效果进行比较研究。

1
材料与方法

1.1
实验样品

肝癌患者血清：
来自广西医科大学附属肿瘤医院住院患者，
临床诊断为原发性
肝癌患者。

1
．
2

主要试剂与仪器

乙腈
(ACN )
，
美国
Sigma
公司；
ProteoExtract
?

Albumin/IgG Removal
Kit ,
德国
MERK
公司；丙烯酰铵、
N , N
′
-
甲叉双丙烯酰铵、三羟甲基氨基甲烷
( Tris)
、
三羟甲基甲基甘氨酸
( Tricine)
、十二烷基硫酸钠
( SDS)
、尿素
,AMERSO
公司
;
低分子量蛋
白质标 准品
,
上海生工生物工程有限责任公司
;
垂直电泳槽，
Bio- Rad
公司；蛋白芯片生物系
统（
PBS II C
）及
CM10
芯片购自美国
Ciphergen
公司。

1
．
3
方法

1
．
3
．
1
乙腈沉淀法去除血清中的大蛋白
将
60?
l
血清加入到
120?
l
的乙腈中，
剧烈振荡
5s
，
放置室温
30min
，样品在室温下
14, 000g
离心
10
分钟，将上述组分用冻干机浓缩到
60?
l

。

1.3.2
ProteoExtract?
白蛋白
/IgG
去除试剂盒去除血清中的白蛋白
/IgG
,
按试剂盒的说明书
进行操作。

(1)
样品的准备
: 将
60?
l
血清用
10
倍的结合缓冲液（
600?l
）稀释于分离管中。

(2)
柱子的预处理
:
将蓝色 的盖子从柱子上拿开，倒置在纸巾上去除贮存缓冲液；拿开底部的
接头后，将柱子放入合适的缓冲液收集 管；加入
0.85ml
的结合缓冲液让其通过重力作用流
过树脂床。丢弃缓冲液收集管 ；将柱子放入新的样品收集管。

(3)
白蛋白
/IgG
的去除：将 稀释的样品加入柱子并让其通过重力作用流过树脂床。收集流动
相，再用
600?
l< br>的结合缓冲液清洗柱子。让其通过重力作用流过树脂床。收集洗脱液；重复
用
600?< br>l
的结合缓冲液清洗柱子。其通过重力作用流过树脂床。收集洗脱液。这些结合的组
分内 含有去除白蛋白
/IgG
的样品。
将上述组分用冻干机浓缩到
60?
l
，
进行
Tricine-SDS- PAGE
电泳分离蛋白和
WCX2
芯片检测。

1.3.3
将收集的两种样品进行
Tricine-SDS- PAGE
电泳分离蛋白和
WCX2
芯片检测。

2
结果