张子彦你不知道的AAV动物实验注射攻略

2021年1月29日发(作者：b6)
你不知道的
AAV
动物实验注射攻略

在进行疾病治疗时，
都需要将药物通过不同的方法递送到人体内才能发挥作用，
药物进入人
体通常有如下方法：
?

?

?

?

?

?

?

?

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口服；

通过注射方法如静脉注射，肌肉注射，鞘内注射，皮下注射；

舌下（舌下）或牙龈和面颊（口腔）之间；

插入直肠（直肠）或阴道（阴道）；

放置在眼睛（通过眼睛路线）或耳朵（通过耳朵路线）；

喷入鼻腔并通过鼻膜吸收（鼻腔）；

通过口腔（吸入）或口鼻（通过雾化）呼吸到肺部；

施用于皮肤以获得局部或全身效果；

通过贴片（透皮）经皮肤递送以产生全身效果

而在我们日常的科学实验研究中，往往 都需要使用吉凯基因提供的慢病毒，腺相关病毒等
工具注射到动物体内研究动物机体功能及代谢路径等， 以观察阐明疾病发生发展机制。而
这时就需要选择一定的注射方式，
今天小编尽可能的罗列出动 物实验中各种不同给药途径
的方法步骤，供大家参考。

1
、

尾静脉注射

（
1
）首先，提取小鼠尾巴，将其放在鼠笼盖或者手背 上，并进行适当的安抚；

（
2
）然后，将小鼠装入固定器中，盖紧盖子，并 使尾巴朝外露出用酒精棉球擦拭小鼠尾
巴或者用热水、浴霸加热，使其血管扩张；

（
3
）将尾巴拉直，使其红色静脉清晰可见；

（
4
）距离鼠尾尖
1/3
处进针，若进针畅通无阻，则说明针头在血管内；

（
5
）检查针管内有无回血，如有，则可以注射；

（
6
）用棉球按压注射点
1min
左右进行止血；

（
7
）最后，将小鼠从固定器取下，放回鼠笼中。

补充说明：

（
1
）
大鼠尾静脉注射病毒量参考：
文章
“
AAV9
supports
wide-scale
transduction
of
the
CNS and TDP-43 disease modeling in adult rats
”中给出：
6
周龄 的年轻成年大鼠重约
150g
。文中
AAV9 TDP-43 or AAV9 GFP,
一个典型的剂量是每
kg
大鼠给药
3 x 10
- 1 x
10

v.g
。确保体积不超过标准建议注射量体积（
250< br>克大鼠
250-500
μ
L
）。对于年轻的成
年大鼠，推荐的 注射体积是
200
μ
l
。

（
2
）小鼠尾 静脉注射视频手机登陆淘基因官网进入资讯“动物注射”板块观看。

14
13

2
、

颞
/
面静脉注射

（
1
）将一只幼崽直接放在湿冰 上
30-60
秒，以麻醉动物。

由于存在低温相关并发症
（包括心 室颤动，组织缺氧和代谢性酸中毒）的风险，请勿将动物置于冰上太久。文
章中告知，
30-6 0
秒足以减缓小鼠运动以允许注射。

如果需要更深的麻醉，吸入剂如
1-2
％的异氟烷可能是合适的。

（
2
）当动物在冰上时，向注射器中加入
30
μ
l
伊文思蓝 染料。

（
3
）当动物完全麻醉时（仍然呼吸但在冰上缺乏运动），在显微镜 下移动它。对于右
手注射，请将对着动物的枪口朝向右侧，将左手食指放在枪口上，左手中指放在耳塞< br>尾部，使耳塞位于食指和中指之间。

（
4
）检查耳朵前方的毛细血管 ，当皮肤被操纵时会移动。毛细管并不是目标，而是识
别颞
/
面静脉识别很重要。
接下来，找到毛细管下方的暗阴影静脉，无论皮肤位置如
何，毛细管都保持固定。

颞静脉呈阴影状，向腹侧背侧，并进入颈静脉。

（
5
）
进入颞静脉，
针斜面向上。

如果正确插入，
可以通过皮肤观察针斜角填充血液。

然后慢慢压下柱塞，注意静脉沿着脸部侧面漂白

（
5
）让针头在静 脉内保持
10-15
秒，以防止注射剂回流。


图
A：临时注射平台；图
B
：手指位置；图
C
：注射位点

说明：更多注意事项请阅读文章“
Intravenous Injections in Neonatal Mice
”。

3
、

腹腔注射

（
1
）首先，从笼中提取小鼠尾巴，并将其放在手背上，进行适当安抚。
< br>（
2
）然后，左手握小鼠，用拇指、食指捏住小鼠颈背部，用无名指及小指固定其尾和后
肢，腹部向上，头呈低位。

（
3
）右手持注射器，插入小鼠腹部， 注射部位为下腹部离腹白线约
0.5cm
处，使针头与
小鼠腹部约成
30
°
角刺入腹腔，
针头刺入的速度要快，
刚开始刺时会有一种明显的抵抗力，< br>那是因为鼠皮具有韧性，后来突然会有一种抵抗力消失的感觉，说明针头已刺入腹腔内，
此时回抽 没有回血，说明针头没有进入脏器，就可以进行注射。
（注意：针头刺入腹腔不
宜超过
1cm
，进针动作要轻柔，防止刺伤腹部器官）

（
4
）注射完病毒后，缓缓拔出针头，并轻微旋转针头，防止漏液。

（
5
）最后，将小鼠重新放回笼中，继续饲养观察。



4
、

视网膜下注射

（
1
）通过腹腔注射安乐死和唑拉西泮（
1
：
1,2.25
mg
/
kg
体重）和盐酸甲苯噻嗪（
0.7
mg
/ kg
体重）或替代品的混合物麻醉成年小鼠（即
6-8
周龄）；

（
2
）用
0.5
％的去氧肾上腺素和
0.5
％的托 吡卡胺滴眼液扩张瞳孔；

（
3
）准备已经加有
1.5-2
μ
l
病毒微量注射器；

（
4
）为了方便注射，打开眼睑， 使眼睛露出赤道
(equator),
并在手术显微镜下观察。保
持眼睛露出赤道(equator)
直到注射结束，防止在注射期间可能发生针的移位。将手指放
在眼眶边 缘外以便牢牢握住眼球；

（
5
）在角膜表面涂抹一滴眼用粘弹性溶液；

（
6
）在角膜顶部放置一个小圆形盖玻片，以显示视网膜；

（
7
）
使用
30
G
1/2
无菌针头在 角膜缘后面的一个小孔处穿孔进行进一步的视网膜下注射。
为了方便，是孔位于右眼的下方，左眼的上方 ；

（
8
）将微量注射器的
33
G
钝针穿过预穿孔并进入视网膜下腔，直到感觉到轻度阻力的点
为止；

（
9
）将病毒载体（比如
1
×
10
TU
/
μ
l
）轻轻注入视网膜下空间而不发生震颤，以避免不必
要的组织损伤，然 后轻轻取出针头；

6
（
10
）在手术显微镜下注射后观察视网膜下 水泡的形成，以确保视网膜没有出血；

（
11
）轻轻关闭眼睑以覆盖注射部位；

（
12
）将小鼠放回笼中，保证小鼠活力。


更多注意事项请查看文章“
Limbal Approach-Subretinal Injection of Viral Vectors for Gene Therapy in Mice
Retinal Pigment Epithelium
”


5
、

脑立体定位注射

第一部分：实验前准备

脑立体定位仪，常规手术器械，颅骨钻，微量注射器，干棉球，
1%
的戊巴比妥钠，生理
盐水，
1ml
注射器，小鼠

。

首先，
用
1%
的戊巴比妥钠，
以腹腔注射的方式麻醉小鼠，
注射量为
80mg
/
100g
小鼠

。

然后，从饲养笼中取出小鼠

。
5-10min
后，麻醉剂起效

。待小鼠麻醉后，用剃毛器将小
鼠头部毛发剔除干净

。

第二部分：固定小鼠