颜面色斑医院人感染H7N9禽流感病毒核酸检测标准操作程序

2021年1月28日发(作者：上海哮喘健康网)
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医院人感染
H7N9
禽流感病毒核酸检测

标准操作程序


一、目的

确保人感染
H7N 9
禽流感病毒核酸检测过程标准化、规
范化，降低人为不规范操作对检测结果造成的影响，保证 结
果的准确性和可重复性。

二、适用范围

医疗机构临床基因扩增 检验实验室按照《关于医院开展
人感染
H7N9
禽流感病毒核酸检测有关工作的通知》 （卫办
医政函
〔
2013
〕
383
号）
和
《关于做好医疗机构人感染
H7N9
禽流感检测试剂供给保障工作的通知》（卫发明电〔
2013
〕
29
号）
有关要求，
使用国家疾病预防控制中心制备或 商品化
试剂盒开展人感染
H7N9
禽流感病毒核酸检测工作。

三、样本采集、运送和保存

尽量采集病例发病早期的呼吸道样本
(
上呼吸道样本包
括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液和鼻洗液
,
下呼吸
道样本包括痰液、
气管吸取物、
肺洗液、
肺组织等
)
。
可将 鼻、
咽拭子收集于同一采样管中，以便提高检出率。患者有下呼
吸道样本时，应优先采集。

根据试剂说明书对样本采集方法有关要求，制订样本采
集标准操作程序（SOP
），并组织样本采集人员进行培训及
考核。样本的采集应当严格按照
SOP
进行。

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样本采集后，按照《人间传染病的病原微生物名录 》中
高致病性禽流感病毒的相关规定进行包装，用密封容器立即
送往实验室。若气温高时，需放 入冰块降温。样本抵达实验
室后，应尽快进行检测，
24
小时内能检测的样本可置于< br>2
～
8
℃暂时保存，
24
小时内无法检测的样本则应置于≤< br>-70
℃状
态保存。如无
-70
℃保存条件时，可于
-20< br>℃冰箱暂存。样本
避免反复冻融。

样本采集、处理、运输及保存不当时，可因 病毒
RNA
降解出现假阴性结果，
也可因为样本“污染”出现假阳性结果。

四、
PCR
检测

（一）样本处理

样本的核酸提 取应当在样本处理区进行。按所采用的商
品化试剂盒说明书要求，取适量待检样本、阳性及阴性对照进行核酸提取。样本应尽可能新鲜，提取过程应严防
RNA
酶污染及操作不当导致的
RNA
降解。提取过程如涉及离心
步骤，应采用低温冷冻离心机；在生物安全柜内进行加样、
提取过程中，为防止
RNA
降解，可将试管架置于托盘内平
铺的碎冰上。提取好的
RNA
应及时用于检测，
否则应当
-70
℃
保 存。如无
-70
℃保存条件，可于
-20
℃冰箱暂存。

（二）试剂准备

试剂准备应当在试剂准备区进行。根据所用的试剂盒，
样本 可进行甲型流感病毒核酸、禽流感
H7
亚型或
H7N9
病
毒核酸的检 测。试剂的配制按所用商品化试剂盒说明书进
.
.
行。
除酶混合物外，< br>其它试剂在使用前应当在室温充分复融，
混匀并瞬时低速离心。反应液分装时尽量避免产生气泡， 上
机前注意检查各反应管是否盖紧，以免管内溶液泄露污染仪
器。分装有扩增反应液的反应管应 当扣盖或装入密实袋内再
转移至样本处理区。

（三）加样

加样应 当在样本处理区进行。加样时应当使样品完全落
入反应液中，不应有样品粘附于管壁上，加样后应尽快盖 紧
管盖。

按试剂、仪器说明书完成加样和
PCR
反应管准备。

（四）
PCR
扩增检测

PCR
扩增检测在扩增区进行。待 检
PCR
管转移至扩增
区，按顺序置于
PCR
仪上，编辑样本信息， 按试剂和仪器
说明书设定循环参数。

（五）结果分析

根据所用试 剂盒说明书设置基线值（
baseline
）。荧光
阈值（
threshol d
）设定以阈值线刚好超过阴性对照品扩增曲
线（无规则的噪音线）的最高点为原则，且
Ct
值应大于所
设置的扩增循环数（或显示为
undet
）。使用仪器配套 软件
自动分析结果。

（六）质量控制

检测过程对可能出现的假阳 性和假阴性进行质量控制，
除了检测商品试剂盒所提供阳性和阴性对照外，每次临床样
.
.
本检测时，至少应当有
1
份弱阳性和
3
份阴性质控样本 （多
份阴性质控样本设置对实验室“污染”所致假阳性的监控更为
有效），随机放在所检测标本 的中间。弱阳性质控样本可为
检测阳性的灭活稀释后保存的临床样本、灭活病毒或假病毒
颗粒等 ，如所采用的商品化试剂盒有“内标”控制假阴性，或
弱阳性质控样本来源困难，可暂不设弱阳性质控。 阴性质控
样本采用标本采集管内溶液即可。质控样本应与临床标本同
等对待，参与样本核酸提取 和扩增检测全过程。

试剂盒中的阳性和阴性对照用于判断实验室的有效性，
按试剂盒说明书进行。

（七）实验结果的判定与解释。

按照试剂盒说明书进行。对于出现弱阳性结果的样本 应
进行重复检测，并注意与可能的实验室轻度或样本交叉“污
染”所致假阳性结果区别。

五、检测结果报告

按照试剂盒说明书进行。

六、其它注意事项

（一）人感染
H7N9
禽流感病毒实验室活动、 样本采集
和运输按照《人间传染的病原微生物名录》中高致病性禽流
感病毒进行管理。从事人感 染禽流感检测的技术人员必须经
过生物安全培训并具备相应的实验技能，在检测过程中必须
采取 生物安全防护措施（使用眼罩、
N95
型口罩等）。样本
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