肾囊肿的饮食第23章病毒感染的实验诊断

2021年1月28日发(作者：小便分岔)
第
23
章


病毒感染的实验诊断

一、

教学大纲要求

（
1
）标本的采集、处理与运送注意事项

（
2
）病毒形态学检查方法

（
3
）病毒的分离与鉴定程序及方法

（
4
）病毒感染的快速诊断方法

二、

教材内容精要

（一）标本的采集、处理与运送

根据临床诊断及病 期采集不同的标本，用于病毒学分离和鉴定的标本应在病程初期或急性期采
集，要进行预处理才能用于接 种和其他方法的检测。病毒的抵抗力通常较弱，在室温下很快灭活，
标本采集后应立即送到病毒实验室， 暂时不能检查或分离培养时，应将标本放入冻存液并加入甘油
或二甲基亚砜（
DMSO
）以防止反复冻溶使病毒灭活，存放在
-70
℃低温冰箱内保存。

（二）病毒形态学检查

1.
光学显微镜


仅用于大病毒颗粒（如痘类病毒）和病毒包涵体的检查。

2.
电子显微镜检查法

（
1
）电镜直接检查法

某些病毒感染的早期，临床标本中就可出现病毒颗粒。标本经粗提浓缩后用磷钨酸盐负染，电
镜 下直接观察，可发现病毒颗粒，获得诊断。

（
2
）免疫电镜检查法

将病毒标本制成悬液，
加入特异性抗体、
混匀，
使标本中的病毒颗粒凝集成团 ，
再用电镜观察，
可提高病毒的检测率。本法比电镜直接检查法更特异，更敏感。

3.
超过滤法


用不同孔径的火棉胶滤膜过滤病毒悬液，将 获得的滤液接种于组织细胞、实验动物或鸡胚，或
用血凝试验来测定病毒是否通过滤膜，从而估计病毒的 大小。

4.
超速离心法

根据病毒大小的不同，其沉降速度也不同 。可用超速离心法测得病毒的沉降系数（
S
）
，借以计
算病毒的大小。

5.X
线晶体衍射法

根据
X
线衍射图谱，
用 数学方式处理来研究病毒结构亚单位和分子结构等。
但标本必须为结晶，
可用于无包膜病毒的研 究。

（三）病毒的分离与鉴定

1.
病毒分离培养
实验室分离培养病毒的方法主要有三种：动物接种、鸡胚接种和组织培养。根据细胞的来源、
染色体 特性和传代次数的不同，可分为：原代和次代细胞培养，二倍体细胞培养，传代细胞培养。

2.
病毒在培养细胞中增殖的指标



（
1
）细胞病变效应（
cytopathic effect
，
CPE
）
。

（
2
）红细胞吸附

（
3
）干扰现象



（
4
）细胞代谢的改变



3.
新分离病毒的鉴定

（
1
）病毒核酸类型的测定


用
RNA
酶及
DNA
酶可鉴定出病毒核酸的类型。另外，
DNA
病毒
受
5-
氟尿嘧啶的抑制，而
RNA
病毒不受影响。用此方法亦可区分
DNA< br>与
RNA
病毒。

（
2
）理化性状的检测


对脂溶剂的敏感性：有包膜的病毒（如正粘病毒、副粘病毒、逆转录
病毒等）含有脂 类，对乙醚、氯仿和胆盐等脂溶剂均敏感，经作用后病毒失去感染性，而无包膜的
病毒对脂溶剂有抵抗。 耐酸性试验：肠道病毒与鼻病毒均属于小
RNA
病毒科，均耐乙醚。但前者可
耐
pH3
，而后者在
pH3~5
环境中很快被灭活，故可将两者相区别。

（
3
）血清学鉴定


病毒型别的最后鉴定必须依靠血清学 方法。将分离的病毒与已知的诊断血
清作各种试验进行鉴定。

（四）病毒的血清学检测

血清学试验是诊断病毒感染和鉴定病毒的重要手段，也是研 究病毒的主要方法之一。血清学试
验的方法很多，最常用的如中和试验、补体结合试验、血凝及血凝抑制 试验等。

1.
中和试验

中和试验是病毒型特异性反应，是指应用 特异性抗体中和病毒的致病性或感染性的试验。将病
人血清与一定量的已知病毒混合，作用一定时间后， 接种于实验动物、鸡胚或细胞培养中，观察病
毒的致病作用是否被中和而不出现感染指标。以此判断病人 血清中有无特异性抗体存在。本法特异
性高，但操作比较复杂，费时。主要用于鉴定病毒；分析病毒抗原 的性质；测定免疫血清的抗体效
价和疫苗接种后的效果；测定病人血清中的抗体，用于诊断病毒性疾病。

2.
补体结合试验

特异性病毒抗原和相应的抗体结合形成免疫复合物时能结合补体。本实验操作繁琐，特异性较