治疗脑瘫艾滋病病毒(HIV)初筛实验室室内质量控制标准操作程序

2021年1月27日发(作者：宫外孕是什么症状)
艾滋病病毒
(HIV)
初筛实验室室内质量控制标准操作程序

保证
ELISA
检测结果准确可靠
,
充分发挥其方法学的优点。

【目的】

保证
ELISA
检测结果准确可靠
,
充分发挥其方法学的优点。

【该
SOP
变动程序】
本标准操作程序的变动，
可由任一使用本
SOP
的工作人员提出，
并报经 下述人员批准签
字：科主任、专业主管。

【方法】

【分析前质控】

一、人员培训

实验是人操作的，因此检验人员需经过培训，熟练掌握本专业如下几方面的技术知识：

1
、检验项目的基本原理（
ELISA
原理）。

2
、临床意义。

3
、熟悉检测技巧，了解易出差错的环节及难点。

4
、熟悉检测试剂性能（包括试剂盒组成，包被片段及其组成）。

5
、熟悉检测仪器的原理及性能；掌握数据处理的能力和质量控制知识。

6
、需参加有关部门组织的专门培训班，考试合格后持证上岗。

二、室内质控血清的制备：

1
、收集阳性血清
(
无明显溶 血、黄胆、脂肪血和污染血清
,
到一定量（够本室使用
3-6
个月的量）。< br>
2
、传染性病毒阳性需经
56
℃、
30
分钟灭活后 使用。

3
、过滤，除纤维沉淀物。

4
、稀释，用正常人 血清或
10%
小牛血清
PBS
溶液稀释。

5
、测定值，与定值参考品进行对比、求值，一般定在
Cut Off
值附近的阳性值。

6
、分装小瓶（每日用量），加盖、贴签，
-20
℃冻存备用。

【试剂盒选择】

必须使用经卫生部生物制品检定所检定合格，并贴有防伪标签的产品。

【试剂盒评价】

试剂评价需要有权威的血清考核盘（
Panel
） 进行检测，价格昂贵，操作繁琐，一般实
验室不易开展，可以通过以下信息，了解试剂质量。

1
、根据该试剂生物制品鉴定所的批批检定报告，了解其质量水平，按照质量计划选择
灵敏度高的或特异性高的试剂。

2
、
通过询问试剂包被物的组成，
如原料来源
（基因工程或合成多肽）
，
片段的组合
（按
比例混合或化 学合成），片段的长短等判断试剂的优劣。

3
、参考室间质评报告中对试剂的评价结果，了解不同试剂的质控成绩。

4
、根据权威部门发布的试剂评价结果，了解市场上试剂的质量优劣。

【仪器质控】

为使仪器保持最佳工作状态应建立维护和校正仪器的标准操作程序（< br>SOP
），所要控制
的仪器包括移液器（加样枪），水浴箱（温箱），洗板机和酶标仪。

1.
移液器：
ELISA
加样量小（
5-100
ｕ
l
），其准确性直接影响实验结果，利用称重法检
查：吸取刻度指示量的水，万分之 一天平称重后计算吸量是否准确，一般应在±
10%
以内。

2.
水 浴箱：经常检查水浴箱温度计所示的温度和水中（或温箱内）实测温度是否一致，
允许有±
1< br>℃的误差。

3.
洗板机：每个厂家设置洗板后的残留液有各自的规定一般不超过
2ul
，人工扣板时，
垫纸不湿，定期检查管孔是否堵塞。

4.
酶标仪：
经常维护其光学部分，防止滤光片霉变，定期检测校正，使其保持良好的工
作性能。
酶 标仪的主要性能指标有：
测读速度、
读数的准确性、
重复性、
精确度和可测范 围、
线性等等。优良的酶标仪的读数一般可精确到
0.001
，准确性为±
1 %
，重复性达
0.5%
。

酶标仪的可测范围视各酶标仪的性能而不 同。普通的酶标仪在
0.000
～
2.000
，新型号
的酶标仪上限 拓宽达
2.900
，甚至更高。超出可测上限的
A
值常以“
*
”或“
over
”或其它
符号表示。
应注意可测范围与线性范围的不同，< br>线性范围常小于可测范围，
比如某一酶标仪
的可测范围为
0.000
～
2.900
，而其线性范围仅
0.000
～
2.000
，这 在定量
ELISA
中制作标准
曲线时应予注意。


【酶标仪校正程序】

1
、滤光片波长精度检查：将不同波长的滤光片从酶标 仪上卸下，用
UV-2201
型紫外
-
可见分光光度计（波长精度±
0.3nm
）于可见光区对每个滤光片进行扫描，其检测值与标定
值之差为滤光片波长精度。一 般酶标仪无
585nm
滤光片，可选用
550nm
或
630nm滤光片。
4
50nm
滤光片的检定选用普鲁兰溶液（校正波长为
630nm
）。

2、通道差与孔间差检测：通道差检测是取一只酶标板小孔杯（杯底须光滑，透明，无
污染）以酶标板 架作载体，将其（内含
200ul
甲基橙溶液吸光度调至
0.500A
左右） 置于
8
个通道的相应位置，蒸馏水调零，于
490nm
处连续测三次
,
观察其不同通道的检测器测量结
果的一致性，可用极差值来表示。孔间差的测量是选择同一厂 家，同一批号酶标
2
板条（
8
条共
96
孔）分别加入
200ul
甲基橙溶液（吸光度调至
0.100A
左右）
先后置于同一通道 ，
蒸
馏水调零
,
于
490nm
处检测，其误差大小用±1.96s
衡量。

3
、零点飘移（稳定性观察）：取
8
只小孔杯分别置于
8
个通道的相应位置，均加入
20
0ul
蒸馏水 并调零，于
490nm
处每隔
30
分钟测一次，观察各个通道
4小时内吸光度的变化。

4
、
精密度评价：
每个通道
3
只小杯分别加入
200ul
高中低
3
种不同浓度的甲基橙溶解，蒸馏水调零，于
490nm
作双份平行测定，每日测二次（上下午各一次），连续测定20
天。
分别计算其批内精密度，日内批精密度
,
日间精密度和总精密度 及相应的
CV
值。