隆鼻手术需要多少钱沙门氏菌检测

2021年1月27日发(作者：泌尿疾病)
沙门氏菌检测

1

设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：

1.1
冰箱：
2
℃～
5
℃。

1.2
恒温培养 箱：
36
℃
±
1
℃，
42
℃
±
1
℃。

1.3
均质器。

1.4
振荡器。

1.5
电子天平：感量
0.1g
。

1.6
无菌锥形瓶
:
容量
500ml
，
250m l
。

1.7
无菌吸管：
1ml
（具
0.01m l
刻度）、
10ml
（具
0.1ml
刻度）或微量移液器及吸
头。

1.8
无菌培养皿：直径
90mm
。

1.9
无菌试管：
3mm×
50mm
、
10mm×
75mm
。

1.10
无菌毛细管。

1.11 pH
计或
pH
比色管或精密
pH
试纸。

1.12
全自动微生物生化鉴定系统。

2

培养基和试剂

2.1
缓冲蛋白胨水（
BPW
）：见附录中
1
。

2.2
四硫磺酸钠煌绿（
TTB
）增菌液：见附录中
2
。

2.3
亚硒酸盐胱氨酸（
SC
）增菌液：见附录中
3
。

2.4
亚硫酸铋（
BS
）琼脂：见附录中
4
。

2.5 HE
琼脂：见附录中
5
。

2.6
木糖赖氨酸脱氧胆盐（
XLD
）琼脂：见附录中
6
。

2.7
沙门氏菌属显色培养基。

2.8
三糖铁（
TSI
）琼脂：见附录中
7
。

2.9
蛋白胨水、靛基质试剂：见附录中
8
。

2.10
尿素琼脂（
pH7.2
）：见附录中
9
。

2.11
氰化钾（
KCN
）培养基：见附录中
10
。

2.12
赖氨酸脱羧酶试验培养基：见附录中
11
。

2.13
糖发酵管：见附录中
12
。

2.14
邻硝基酚
β
-D
半乳糖苷（
ONPG
）培养基：见附录中
13
。

2.15
半固体琼脂：见附录中
14
。

2.16
丙二酸钠培养基：见附录中
15
。

2.17
沙门氏菌
O
和
H
诊断血清。

2.18
生化鉴定试剂盒。

3

操作方法

3.1
试验前准备

3.1.1
将供试品及所有已灭菌的平皿、
锥形瓶、
匀浆杯、
试管、
量筒、
吸管
（
1ml
、
1 0ml
）、稀释剂等移至操作室内。准备好足够用量，避免操作中出入操作间。

3.1.2
开启无菌室紫外杀菌灯和洁净工作台的空气过滤装置
30min
。

3.1.3
操作人员用肥皂洗手，关闭紫外杀菌灯，进入缓冲间，换工作鞋，用消毒
液洗手或用乙醇棉球擦手，穿戴好无菌衣、帽、口罩、手套等。

3.1.4
操作 前先用乙醇棉球擦手、工作台面，再用乙醇棉球擦拭供试品瓶、盒、
袋等的开口处周围，待干后用灭菌剪 刀或镊子将供试品启封。

3.2
前增菌

称取
25g
（
ml
）样品放入盛有
225ml BPW的无菌均质杯中，以
8000r/min
～
10000r/min
均质< br>1min
～
2min
，或置于盛有
225ml BPW
的无菌 均质袋中，用拍击式
均质器拍打
1min
～
2min
。若样品为液态 ，不需要均质，振荡混匀。如需测定
pH
值，用
1mol/ml
无菌
NaOH
或
HCl
调
pH
至
6.8±
0.2
。无菌操作将样品转至
500ml
锥形
瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于< br>36
℃
±
1
℃培养
8 h
～
18h
。如为冷冻产
品
,
应在
45
℃以下不超过
15min,或
2
℃～
5
℃不超过
18h
解冻。

3.3
增菌

轻轻摇动培养过的样品混合物，移取
1ml
，转种于
10ml TTB
内，于
42
℃
±
1
℃
培养
18 h
～
24h
。同时，另取
1ml
，转种于
10ml SC< br>内，于
36
℃
±
1
℃培养
18h
～
24h
。

3.4
分离

分别用接种环取增菌液
1
环，
划线接种于一个
BS
琼脂平板和一个
XLD
琼脂平< br>板（或
HE
琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板）。于
36
℃
±
1
℃分别培养
18h
～
24h
（
XLD
琼脂平板、
HE
琼脂平板、沙门氏菌属显色培养基平板）或
40h
～
48h
（
BS
琼脂平板），观察各个平板上生长的菌落。各个平板上的菌落特征见表
1
。

表

1
沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征

选择性琼脂平板

BS
琼脂

HE
琼脂

XLD
琼脂

沙门氏菌属显色培养基

沙门氏菌

菌落为黑色有金属光泽、
棕褐色或灰色，
菌落周围培养基可呈黑色或棕色；
有 些菌株形成灰绿色的菌落，周围培养基不变。

蓝绿色或蓝色，多数菌落中心黑色或几乎全黑色 ；有些菌株为黄色，中心
黑色或几乎全黑色。

菌落呈粉红色，带或不带黑色中心，有 些菌株可呈现大的带光泽的黑色中
心，或呈现全部黑色的菌落；有些菌株为黄色菌落，带或不带黑色中心 。

按照显色培养基的说明进行判定。

3.5
生化试验

3.5.1
自选择性琼脂平板上分别挑取
2
个以上典型或可疑菌落，接种三 糖铁琼脂，
先在斜面划线，再于底层穿刺；接种针不要灭菌
,
直接接种赖氨酸脱羧酶试 验培
养基和营养琼脂平板，于
36
℃
±
1
℃培养
1 8h
～
24h
，必要时可延长至
48h
。在三糖
铁琼脂和赖 氨酸脱羧酶试验培养基内，沙门氏菌属的反应结果见表
2
。

表
2
沙门氏菌属在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内的反应结果

三糖铁琼脂

斜面

K
K
A
A
K
底层

A

A
A
A
K
产气

＋
(
－
)
＋
(
－
)
＋
(
－
)
＋
/
－

＋
/
－

硫化氢

＋
(
－
)
＋
(
－
)
＋
(
－
)
＋
/
－

＋
/
－

赖氨酸脱羧酶试验培养基

＋

－

＋

－

＋
/
－

初步判断

可疑沙门氏菌属

可疑沙门氏菌属

可疑沙门氏菌属

非沙门氏菌

非沙门氏菌

注：
K
：产碱，
A
：产酸，＋：阳性，－：阴性；＋
(
－
)
多数阳性，少数阴性； ＋
/
－：阳性或阴性。

3.5.2
接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧 酶试验培养基的同时
,
可直接接种蛋白胨水
（供做靛基质试验）、尿素琼脂（
pH7.2
）、氰化钾（
KCN
）培养基，也可在初
步判断结果后从营养琼脂 平板上挑取可疑菌落接种。于
36
℃
±
1
℃培养
18h～
24h
，
必要时可延长至
48h
，
按表
3< br>判定结果。
将已挑菌落的平板储存于
2
℃～
5
℃或室温
至少保留
24h
，以备必要时复查。

表
3
沙门氏菌属生化反应初步鉴别表

反应序
号

A1
A2
A3
硫化氢（
H
2
S
）

＋

＋

－

靛基质

－

＋

－

pH7.2
尿素

－

－

－

氰化钾（
KCN
）

－

－

－

赖氨酸脱羧酶

＋

＋

＋
/
－

注：＋：阳性，－：阴性，＋
/
－：阳性或阴性。

3.5.2.1
反应序号
A1
：
典型反应判定为沙门氏菌属。
如尿素、
KC N
和赖氨酸脱羧
酶
3
项中有
1
项异常，按表
4
可判定为沙门氏菌。如有
2
项异常为非沙门氏菌。

表
4
沙门氏菌属生化反应初步鉴别表

pH7.2
尿素

－

氰化钾（
KCN
）

－

赖氨酸脱羧酶

－

判定结果

甲型副伤寒沙门氏菌
（要求血清学鉴定结
果）

沙门氏菌
IV
或
V
（要求符合本群生化特
性）

沙门氏菌个别变体（要求血清学鉴定结
果）

－

＋

＋

＋

注：＋：阳性，－：阴性。

－

＋

3.5.2.2
反应序号
A2
：补做甘露醇和山梨醇试验，沙门氏菌靛基质阳性变体两项
试验结果均为阳性，但需要结合血清学鉴定结 果进行判定。

3.5.2.3
反应序号
A3
：补做
ONPG
。
ONPG
阴性为沙门氏菌，同时赖氨酸脱羧酶
阳性。甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸脱羧酶阴性。

3.5.2.4
必要时按表
5
进行沙门氏菌生化群的鉴别。

表
5
沙门氏菌属各生化群的鉴别

项


目

卫矛醇

山梨醇

水杨苷

ONPG
丙二酸盐

KCN
I
＋

＋

－

－

－

－

II
＋

＋

－

－

＋

－

III
－

＋

－

＋

＋

－

IV
－

＋

＋

－

－

＋

V
＋

＋

－

＋

－

＋

VI
－

－

－

－

－

－

注：＋：阳性，－：阴性。

3.5.3
如选择生化鉴定试剂盒或全自动微 生物生化鉴定系统，可根据
3.5.1
的初步
判断结果，
从营养琼脂平板上挑 取可疑菌落，
用生理盐水制备成浊度适当的菌悬
液，使用生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴 定系统进行鉴定。

3.6
血清学鉴定

3.6.1
抗原的准备

一般采用
1.2
％～
1.5
％琼脂培 养物作为玻片凝集试验用的抗原。
O
血清不凝
集时，将菌株接种在琼脂量较高的（如< br>2
％～
3
％）培养基上再检查；如果是由于
Vi
抗原的存在 而阻止了
O
凝集反应时，可挑取菌苔于
1ml
生理盐水中做成浓菌
液 ，于酒精灯火焰上煮沸后再检查。
H
抗原发育不良时，将菌株接种在
0.55
％～
0.65
％半固体琼脂平板的中央，俟菌落蔓延生长时，在其边缘部分取菌检查；或
将菌株通过装有
0.3
％～
0.4
％半固体琼脂的小玻管
1
次～
2
次，
自远端取菌培养后
再检查。

3.6.2
多价菌体抗原（
O
）鉴定

在玻片上划出2
个约
1cm×
2cm
的区域，挑取
1
环待测菌，各放
1/2
环于玻片上
的每一区域上部，在其中一个区域下部加
1
滴多价 菌体（
O
）抗血清，在另一区
域下部加入
1
滴生理盐水，作为对照。 再用无菌的接种环或针分别将两个区域内
的菌落研成乳状液。将玻片倾斜摇动混合
1 min
，并对着黑暗背景进行观察，任
何程度的凝集现象皆为阳性反应。

3.6.3
多价鞭毛抗原（
H
）鉴定同
3.6.2
。

3.7
结果与报告

综合以上生化试验和血清学鉴定的结果，报告
25g
（
ml
）样品中检出或未检
出沙门氏菌。


















附录

培养基和试剂

1
缓冲蛋白胨水（
BPW
）

1.1
成分

蛋白胨


氯化钠














10.0g
5.0g
9.0g
1.5g
1000ml
7.2±
0.2
磷酸氢二钠（含
12
个结晶水）


磷酸二氢钾


蒸馏水


pH



















1.2
制法

将各成分加入蒸馏水中，搅混均匀，静置约
10 min
，煮沸溶解，调节
pH
，高
压灭菌
121
℃，
15min
。

2
四硫磺酸钠煌绿（
TTB
）增菌液

2.1
基础液

蛋白胨


牛肉膏


氯化钠


碳酸钙


蒸馏水


pH






































10.0g
5.0g
3.0g
45.0g
1000ml
7.0±
0.2
除碳酸钙外，将各成分加入蒸馏水中，煮沸溶解，再加入碳酸钙，调 节
pH
，高
压灭菌
121
℃，
20 min
。

2.2
硫代硫酸钠溶液

硫代硫酸钠（含
5
个结晶水）



蒸馏水








50.0g
加至
100ml
高压灭菌
121
℃，
20 min
。

2.3
碘溶液

碘片



碘化钾














20.0g
25.0 g
蒸馏水








加至
100 ml
将碘化钾充分溶解于少量的蒸馏水中，
再投入碘片，
振摇玻瓶至碘片全部溶解为
止， 然后加蒸馏水至规定的总量，贮存于棕色瓶内，塞紧瓶盖备用。

2.4 0.5
％煌绿水溶液

煌绿



蒸馏水














0.5g
100ml
溶解后，存放暗处，不少于
1d
，使其自然灭菌。

2.5
牛胆盐溶液

牛胆盐


蒸馏水














10.0g
100ml
加热煮沸至完全溶解，高压灭菌
121
℃，
20min
。

2.6
制法

基础液
























900ml
100ml
20.0ml
2.0ml
50.0ml
硫代硫酸钠溶液


碘溶液






煌绿水溶液


牛胆盐溶液


临用前，按上列顺序，以无菌操作依次加入基础液中，每加入 一种成分，均应摇
匀后再加入另一种成分。

3
亚硒酸盐胱氨酸（
SC
）增菌液

3.1
成分

蛋白胨


乳糖








































5.0g
4.0g
10.0g
4.0g
0.01g
1000ml
7.0±
0.2
磷酸氢二钠


亚硒酸氢钠


L-
胱氨酸



蒸馏水


pH




3.2
制法

除亚硒酸氢钠和
L-
胱氨酸外，将各成分加入蒸馏水中，煮沸溶解，冷至
55
℃
以下，
以无菌操作加入亚硒酸氢钠和
1g/L L-
胱氨酸溶液
10ml
（称取
0.1g L-
胱氨酸，
加
1mol/L
氢氧化钠溶液
15ml
，使溶解，再加无菌蒸馏水至
1 00ml
即成，如为
DL-
胱氨酸，用量应加倍）。摇匀，调节
pH
。

4
亚硫酸铋（
BS
）琼脂

4.1
成分

蛋白胨


牛肉膏


葡萄糖




























































10.0g
5.0g
5.0g
0.3g
4.0g
0.025g
或
5.0g/L
水溶液
5.0ml
2.0g
6.0g
18.0g
～
20g
1000ml
7.5±
0.2
硫酸亚铁



磷酸氢二钠


煌绿




柠檬酸铋铵


亚硫酸钠



琼脂



蒸馏水


pH





4.2
制法

将前三种成分加入
300 ml
蒸馏水（制作基础液），硫酸亚铁和磷酸氢二钠分别加入
20ml
和
30ml
蒸馏水中，柠檬酸铋铵和亚硫酸钠分别加入 另一
20ml
和
30ml
蒸馏水中，琼脂加入
600ml
蒸 馏水中。然后分别搅拌均匀，煮沸溶解。冷至
80
℃左右时，先将硫酸亚铁和磷酸氢二钠混匀 ，倒入基础液中，混匀。将柠檬
酸铋铵和亚硫酸钠混匀，倒入基础液中，再混匀。调节
pH，随即倾入琼脂液中，
混合均匀，冷至
50
℃～
55
℃。加入煌 绿溶液，充分混匀后立即倾注平皿。

注：
本培养基不需要高压灭菌，
在制备 过程中不宜过分加热，
避免降低其选择性，
贮于室温暗处，超过
48h
会降低 其选择性，本培养基宜于当天制备，
第二天使用。

5 HE
琼脂（
Hektoen Enteric Agar
）

5.1
成分

蛋白胨








12.0g