贵州卫视瘦身男女第二章微生物实验室常用试剂、培养

2021年1月27日发(作者：阴道掰开)

微生物学实验室常用试剂与培养基

第一节常用试剂及其使用方法

一、诊断用纸片

⑴
杆菌肽纸片（
0.04U/
片）：抑

菌圈
>10mm
为敏感。质控菌株
: D
群链

球菌阴性
, A
群链球菌阳性。

⑵
SMZ
纸片（
1.25μg/
片、
23.75
μg/
片）：出现抑菌圈即为敏感。质

控菌株：
D
群链球菌阳性，

A
群链球

菌阴性。

⑶
新生霉素纸片（
5.0μg/

片）：抑菌圈
≥16mm
为敏感。质控菌

株：表皮葡萄球菌阳性，腐生葡萄球

菌阴性。

⑷
O129
纸片、
xx
（
Optochin
）纸片：参见第五节《生

化试验培养基》。

二、诊断用血清

1.
沙门菌属诊断血清

⑴
A-F
群
O
多价诊断血清。

⑵
特异
O
群因子诊断血清：常用


1

/
92



的有
O2
，
O4
，
O7
，
O9
，
O10
诊断血

清。

⑶
特异
H
因子诊断血清常用的

有
Ha
，
Hb
，
Hc
，
Hd
，
Hg m
，
Hi
，
Hf
、
Vi
因子诊断血清。

2.
志贺菌属诊断血清

志贺菌属
4
种多价血清：痢疾志

xx
Ⅰ
、
Ⅱ
血清，
xxxx
多价血

清及分型血清（
1
～
6
型），
xxxx
菌诊断血清，
xxxx
多价血清及

分型血清。

3.
致病性大肠
xx
诊断血清

肠致病性大肠
xx
（
EPEC
）诊

断血清，产肠毒素大肠
xx
（
ETEC
）诊断血清，肠侵袭性大肠
xx
希菌（
EIEC
）诊断血清，肠出血性大

肠埃希菌（
EHEC
）诊断血清
O157
：

H

7
。
4.
霍乱弧菌
O1
、
O139混合多价诊断血清及稻叶、小川、彦岛
O139
分型
血清

5.
脑膜炎奈瑟菌多价血清及分群血清

6.
链球菌分类诊断血清


2

/
92



7.
肺炎链球菌诊断血清


菌诊断血清

三、常用染色液

1.
革兰染色液

⑴
结晶紫溶液
A
液：结晶紫20g
，
95%
乙醇
20 ml
；

B
液：草酸铵

0.8g
，蒸馏水
80 ml
。

染色前
24h
将
A
液、

B
液混合
,
过滤后装入试剂瓶内备用。

⑵
碘液< br>:
碘
1g
，碘化钾
2g
，蒸馏水
300ml
。

将碘与碘化钾混合并研磨
,
加入几毫升蒸馏水
,
使其逐 渐溶解
,
然后研磨
,
继续
加入少量蒸馏水至碘、碘化钾完全溶解。最 后补足水量。也可用少量蒸馏水将
碘化钾完全溶解
,
再加入碘片
,
待 完全溶解后
,
加水至
300ml
。

⑶
脱色液：
95%
乙醇

⑷
复染液：沙黄
2.5g
，
95%
乙醇
100ml
为贮存液，取贮存液
10 ml
，加蒸馏
水
90ml
为应用液。

2.
抗酸染色液

⑴
碱性复红染色液：
①
萋纳石炭 酸复红溶液：碱性复红乙醇饱和溶液
10ml
，
5%
石炭酸溶液
90 ml
。
②
脱色液：浓盐酸
3ml
，
95%
乙醇97ml
。
③
复染
液
(
吕弗勒美蓝液
)
：美蓝乙醇饱和溶液
30ml
，
100g/L
氢氧化钾溶液

0.1ml
，蒸馏水
100ml
。

⑵
金胺
O-
罗丹明
B
染色液：
①
罗丹明
B
液：罗丹明< br>B 0.1g
加蒸馏水

100ml
。
②1g/L
金 胺
O
液：金胺
O
液

0.1g
加蒸馏水
95ml,
再加入纯石炭酸


3

/
92



5ml,
混匀。
③3%
盐酸乙醇。
④
稀释
xx
蓝液：
xx
美蓝液
100ml,
加蒸馏水

90m l,
混匀。
2g/L
，
95%
乙醇
2.0ml
，蒸 馏水
100ml
。乙液：碘
2g
，碘化钾
3g
，蒸馏水300ml
。

3.
鞭毛染色液
(
改良
Ryu
法
)
先将碘化钾加入少许蒸馏水
(
约
2ml),
充 分振摇
,
待
完全溶解
,
再加入碘
,
使完全溶解后< br>,
加蒸馏水至
300ml
。

A
液：
5%< br>石炭酸
10ml
，鞣酸
2g
，

饱和硫酸铝钾溶液
10ml
；

B
液：结晶

紫乙醇饱和液。应用液
A
液
10
份
,B
液

1
份
,
混合
,
室温存放备用。液
5.
荚膜 染色液

⑴
印度墨汁或
50g/L
黑色素水溶
⑵
5 g/L
苯胺蓝水溶液。

4.
异染颗粒染色液

甲液：甲苯胺蓝
0.15g
，
xx
第二节基础培养基

一、液体基础培养基

1.
蛋白胨水

[
用途
]
用于细菌靛基质试验；一般细菌培

xx
传代。

[
配法
]
蛋白胨（或胰蛋白胨）
10g
，氯化


4

/
92



钠
5g
，蒸馏水
1L
。

将上述成分溶于水中，校正
pH


至
7.2,
分装试管，每管
2~3ml
，置

121
℃
灭菌
15min
备用。化脓性链球菌生长良好。

[
保存
]
置冰箱
3
周内用完。

3.
牛肉浸液培养基

[
用途
]
细菌培养最基础 的培养基，除用于一般细菌的培养外，又可以作营养琼脂
及其它培养基的基础。

[
配法
]
新鲜除脂牛肉
500g
，氯化钠
5g[
质量控制
]
大肠
xx
生长良好，靛基质
xx
性；伤寒沙门菌生长良好，靛基质阴

性。蛋白胨

2.
营养肉汤

[
用途
]
一般细菌的增菌培养，加入
1%
的

xx
粉亦可作营养
xx
。

[
配法
]
蛋白胨
10g
，牛肉膏
3g
，氯化钠


5

/
92



5g
，蒸馏水
1L
。

将上述成分称量混合溶解于水

中，校正
pH
至
7.4
，按用途不同分装

于烧瓶或试管内。经
121
℃
灭菌

15min
， 作无菌试验后冷藏备用。
10g
，蒸馏水
1L
。

先将牛肉 清洗，除脂肪、肌腱，并切块绞碎。称取
500g
置容器加入蒸馏水
1L
，搅 匀后置冰箱过夜，次日煮沸加热
30min
，并用玻棒不时搅拌用绒布或麻布
进行粗过 滤，再用脱脂棉过滤即成。在过滤中加入蛋白胨
10g
、氯化钠
5g
溶解后，用氢氧化钠溶液校正
pH
至
7.6~7.8
，并加热煮沸
1 0min
，补充蒸馏水至
1L
，最后用滤纸过滤，呈清晰透明、淡黄色液体，经
121
℃
15min
灭菌备用。

[
质量控制
]
金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、
[
用法
]
根据用途不同可以制成营 养肉汤，以此为基础制成其它培养基。如制作固
体培养基，加入琼脂
15~20g/L
即可。

[
质量控制
]
金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、

伤寒沙门菌、痢疾
xx
等均生长良

好。

[
保存
]
置
4
℃
冰箱内可以使用较长时间。

注
:
商品牛肉浸膏粉，一般使用量为

3
～
5g/L
。

二、固体基础培养基


6

/
92



1.
营养
xx
[
用途
]
一般细菌和菌株的纯化及传种。

[
配法
]
蛋白胨
10g
，牛肉膏
3g
，氯化钠

5g
，琼脂粉（优质）
12g
，蒸馏水
1L
。

将上述成分
(
除
xx
外
)
溶于水

中，校正
pH 7.2
～
7.4
后加入琼脂，

煮沸溶解，根据用途不同进行分装，

经
121
℃
灭菌
15min
，倾注平板或制成

斜面，冷藏备用。

[
质量控制
]
金黄色葡萄球菌菌落呈浅黄色；

痢疾志贺菌菌落无色；铜绿假单胞菌

菌落无色或浅绿色。

[
保存
]
置
4
℃
冰箱保存，
2
周内用完。

2.
血
xx
培养基

[
用途
]
一般病原菌的分离培养和溶血性

鉴别及保存菌种。


7

/
92



[
配法
]
pH 7.4~7.6
牛肉浸液琼脂
100ml
，脱纤

xx
血
(
或兔血
) 5~10ml
。

将血
xx
基础经
121
℃
灭菌

15min
，待冷却至
50
℃
左右以无菌手续

加入羊血，摇匀后立即倾注灭菌平皿

内，待凝固后，经无菌实验冷藏备

用。

[
质量控制
]
化脓性链球菌
ATCC 19615
生长良

好，
β
-
溶血；肺炎链球菌
ATCC 6303
生长良好，
α
-
溶血；表皮葡萄球菌

ATCC 12228
生长良好
,
不溶血。

[
保存
]
置
4
℃
冰箱，
1
周内用完。


培养基
[
用途
]
主要用于嗜血杆菌的分离培养，亦可用于奈瑟菌的增殖培养。

[
配法
]
鲜牛肉浸出液
1L
，蛋白胨
10g,< br>氯化钠
5g
，琼脂粉
12g
，无菌脱纤维羊血或
兔血
100ml
。

将上述成分（除兔血外）加热溶解，调
pH
至
7.2
，置
121
℃
15min
高压灭
菌，待冷至约85
℃
，以无菌方式加入兔血，摇匀后置
85
℃
水浴中，维持该 温度

8

/
92



10 min
，使之成巧克力色。取出置室温冷至约
50
℃
，倾注平板或制成斜面备
用。

[
质量控制
]
流感嗜血杆菌
ATCC 10211
、肺炎链球菌
ATCC 6305
生长良好，菌落典型。

[
保存
]
置
4
℃
冰箱，
1
周内用完。

4.
胱氨酸胰化酪蛋白
xx[
用途
]
常用于测定脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌以及营养要求较高细菌的糖发酵试
验。

[
配法
]
胱氨酸
0.5g,
胰化酪蛋白
20g,
氯化钠
5g
，亚硫酸钠
0.3g
，琼脂
3.5g
， 酚红
0.0175g
，蒸馏水
1L
。

将上述成分（酚红除 外）混合溶解，调
pH
至
7.2
，加入酚红指示剂。

分装试管，
115
℃
灭菌
15min
。

[
用法
]
用于测定糖发酵时，按需要加入各种糖溶液，将待检标本直接种于 培养基
管内，置
35
℃
孵箱，
18~24h
观察结果。培养 基由红色变为黄色为阳性，不变色
为阴性。第三节保存和增菌培养基

一、菌种保存培养基

[
配法
]
蛋白胨
10g
，牛肉膏
5g
，氯化钠

3g
，磷酸氢二钠
2g
，琼脂粉
4.5g
，蒸


9

/
92



馏水
1L
。

将上述成分混合于水中，加热溶

解，调
pH
至
7.4~7.6
，分装试管

左右高度，
121
℃
高压灭菌
15min
，成

为半固体培养基，备用。

[
质量控制
]
培养基呈淡黄色半固体状。大肠
xx
希菌
(ATCC25922)
生长良好
,
动力阳

性；福氏志贺菌
(ATCC 12022)
生长良

好
,
动力阴性；金黄色葡萄球菌
(ATCC
25923)
生长良好
,
动力阴性。

二、增菌培养基

1.
葡萄糖肉汤

[
用途
]
用于血液增菌。

[
配法
]
蛋白胨
(
或月示胨
)10g
，氯化钠

5g
，肉浸液（或心浸液）
1L
，葡萄糖

3g
，枸橼酸钠
3g
，
5g/L
对氨基苯甲酸

水溶液
10ml
，
1mol/L
硫酸镁溶液

20ml
，青霉素酶
1000U
。


10

/
92



将蛋白胨、氯化钠混合于肉浸液

中加热溶解，再加入葡萄糖、枸橼酸

钠、对氨苯甲酸及硫酸镁，继续煮沸

5min
，并补足失水，调整
pH
至
7.8
。

过滤分装，每瓶
50ml
，高压灭菌

115
℃
20min
后，每瓶加入青霉素酶
50
U
，经无菌试验合格后，冷却备用。

[
用法
]
将采取的血液标本，以无菌手续

注入培养瓶中（血液
1ml
，培养液

10ml
），置35
℃
培养箱内，每天
1
次

取出观察结果。如有细菌 生长，可出现数种不同的表现，应随时作分离培
养，可选用血琼脂、伊红美蓝琼脂及巧克力琼脂平板等。 无细菌生长表现的培
养瓶，需连续观察
7d
，仍无细菌生长方可弃去。在观察的过程中 ，至少应作两
次分离培养。

注
:
⑴
枸橼酸钠为抗凝剂，可使血液加入培养基中不凝固。

⑵
对氨基苯甲酸主要中和血液中磺胺类药物的抑菌作用。

⑶
硫酸镁 主要抑制血液中存在的四环素、金霉素、新霉素、多粘菌素及链
霉素的抑菌作用。

⑷
本培养基近年来有许多改良配方，如加入
0.3%
～
0.5%
酵母浸 膏以增加营
养；加
0.2%
核酸刺激细菌生长；加
0.1%
粘液素能 被覆于细菌的表面，保护细菌

11

/
92



免受抗体破坏；加入聚茴香脑磺酸钠（
SPS
）能中和补体的抗药作用从而 提高检
出率。

2.
血液增菌培养基

[
用途
]
血液和骨髓液病原菌的增菌培养。

[
配法
]
蛋白胨
10g
，氯化钠
5g
， 牛肉膏
3g
，葡萄糖
1g
，酵母膏粉
3g
，枸橼酸钠
3g
，磷酸氢二钾
2g
，
5g/L
对氨基苯甲酸溶液
5m l
，
1mol/L
硫酸镁溶液
20ml
，
4g/L
酚红溶液
6ml
，青霉素酶
50 U
，聚茴香脑磺酸钠
(SPS) 0.3g
，蒸馏水
1L
。

将上述成分（除酚红指示剂、青霉素酶外）混合加热溶解，校正
pH
至
7.4
，再加酚红，过滤分装每瓶
30
～
50ml
，经
121
℃
灭菌
15min
和
35
℃
24h
无菌试验备用。临用时每瓶加入
1.5
～

2.5 U
青霉素酶。

[
质量控制
]
⑷
培养基应呈淡黄色 ，有红色沉淀物伤寒沙门菌
ATCC 50096
、白
色念

珠菌
ATCC 10231
、化脓性链球菌
ATCC


出现时不可再用。

19615
、肺炎链球菌
ATCC 6305
、金黄

色葡萄菌
ATCC 25923
、铜绿假单胞菌

ATCC 27853
均生长良好。

3.
亚硒酸盐增菌培养基

[
用途
]
沙门菌增菌培养。


12

/
92



[
配法
]
蛋白胨
5g
，乳糖
4g
，磷酸氢二钠

4.5g
，磷酸二氢钠
5.5g
，亚硒酸氢钠

4g
，蒸馏水
1L
。

先将亚硒酸盐加到
200ml
蒸馏水

中，充分摇匀溶解。其它成分称量混

合，加入蒸馏水
800ml
，加热溶解，待

冷却后两液混合，充分摇匀，校正
pH

7.0~7.1(
通过调整磷酸盐缓冲对的比

例来校正
pH
值
)
。最后分装于
15×
150mm
的试管内，每管
10ml
。置水浴

隔水煮沸
10~15min
，立即冷却，置

4
℃
冰箱保存备用。

[
用法
]
取
xx
标本
1g
或棉拭子采样直接

种于该培养管内。摇动后置
35
℃
培养

过夜。如发现均匀混浊，管底有红色

沉淀物，表示细菌生长。然后取培养

物分离在选择性培养基上，如
SSxx
脂、
xxxx
平板等，进行培养。

[
质量控制
]

13

/
92



培养基应呈淡黄色或无色，透明

无沉淀物。增菌灵敏度：伤寒沙门菌
1
×10-5
，鼠伤寒及副伤寒沙门菌
1×10-
7
。

[
保存
]
4
℃
保存，
1
周内用完。

注：

⑴
亚硒酸盐，包括亚硒酸钠、亚硒酸

氢钠均可使用，但以亚硒酸氢钠效果为好。

⑵
磷酸盐缓冲对
xx
，两者的用量比例

与亚硒酸盐及蛋白胨的品种有关。制备前应

进行调试，其总量为
10g/L
。

⑶
在制备过程中，亚硒酸盐不能直接

加热。隔水煮沸时间亦不能超过规定时间，

否则亚硒酸盐会变质，生成红色沉淀物。

增菌液

[
用途
]
用于沙门、志贺菌的增菌。

[
配法
]
月示胨
2g
，蛋白胨
8g
，牛肉膏

3.5g，酵母膏
2g
，葡萄糖
2g
，枸橼酸铁
10g
，硫代硫 酸钠
10g
，亚硫酸钠

0.7g
，胆盐
5.5g
，磷酸氢二钠
4g
，磷酸二氢钾
0.1g
，去氧胆酸钠
(
进 口
)

14

/
92



1.5g
，煌绿
0.005g
，蒸馏水
1L
。
< br>将上述成分加热溶于水中，调
pH
至
7.1
，分装试管（
15 ×150mm
），每管
5~7ml
，隔水煮沸
5min
备用。

[
用法
]
取粪便标本
1g
直接种于增菌液内，
35
℃
16~18h
培养，取出转种于分离培养
基即可。

[
质量控制
]
培养基应呈淡黄色或略呈淡绿色。伤寒沙门菌
ATCC 50096
、福氏志贺菌
ATCC 12022
生长良好；大肠埃希菌
ATCC 25922
生长抑制。

注：

⑴
切勿高压，隔水煮沸时间不超过
5min
。

⑵
煌绿用量应根据不同产品批号酌情增减。

5.
碱性蛋白胨水

[
用途
]
霍乱弧菌增菌培养。

[
配法
]
蛋白胨
20g< br>，氯化钠
5g
，蒸馏水
100ml
。

将上述成分溶解于水中
,
校正
pH
至
8.6
，分 装于试管
8~10ml
，经
121
℃
灭菌
15min
备用。

[
用法
]
将待检标本接种到碱性胨水中，置
3 5
℃
培养
6~8h
，霍乱弧菌呈均匀混浊生
长，表面有菌膜出现。取 表面菌液一白金环移种到碱性琼脂、庆大琼脂或
TCBS
琼脂平板上。必要时做第二次增菌。< br>

15

/
92



[
质量控制
]
有条件的实验室可用标准菌株，

一般临床实验室可用非
01
群弧菌，培

xx
生长良好者方可使用。霍乱弧菌

E1-Tor
生物型和副溶血弧菌生长良好

（
6h
）；大肠埃希菌
ATCC 25922
不生长（
6h
）。

[
保存
]
置
4
℃
冰箱，
2
周内用完。

注：若在每升碱性胨水中加入
1%
亚碲酸钾溶液
0.5~1.0 ml
，则成为亚碲酸
钾碱性胨水，其增菌效果更为理想。

第四节分离培养基

一、革兰阳性杆菌分离培养

基

-
琴改良培养基

[
用途
]
用于结核分枝杆菌培养。

[
配法
]
磷酸二氢钾
2.4g
，硫酸镁

0.24g
，枸橼酸镁
(
或枸橼酸钠
)
0.6g
，天门冬素
3.6g
，甘油
12ml
，蒸

馏水
600ml
，马铃薯淀粉
30g
，新鲜鸡


16

/
92



卵液
1L
，
2%xx
水溶液
20ml
。

先将磷酸盐、硫酸镁、枸橼酸

镁、
xx
素及甘油，加热溶解于

600ml
蒸馏水中。再添放马铃薯粉，边

放边搅，并继续置沸水中加热
30min
，

待冷却至
60
℃
左右时，加入鸡卵液
1L
及
xx
溶液
20ml
，充分混匀后，用

无菌操作分装于灭菌试管，每支

5~6ml
，塞紧橡皮塞（最好是翻口

塞），置于血清凝固器内制成斜面，

经
85
℃
1h
间歇灭菌
2
次
(
或高压灭菌

115
℃
20min)
，待凝固后经无菌试验，

4
℃
冷藏备用。

[
用法
]
取
xx
咳痰或其它体液标本，经消

化处理和离心沉淀的浓缩液
0.1ml
（约

2
滴）滴种于培养基的斜面上，尽量摇

晃，置
35
℃
5%~10%
二氧化碳温箱内培

xx1~4xx
，观察结果。凡在
1xx
内发

现生长的菌落，一般不可能是结核分

枝杆菌；在
2
周后生长的菌落，奶油


17

/
92



状，略呈黄色，粗糙突起，不透明，

即取菌进行涂片染色镜检及鉴定。

[
质量控制
]
用结核分枝杆菌菌株作阳性培养试验。

[
保存
]
置
4
℃
冰箱内
2~4xx
有效。

注：

⑴
本培养基由
Lowenstein- Jenden
设计的基础上改良。

（
2
）本培养基
pH< br>约为
6.0
左右，一般无须校正。

（
3
）间歇灭菌的温度不宜超过
90
℃
。

2.
血清斜面培养基
(xx
血清斜面
)
[
用途
]
用于白喉棒状杆菌培养。

[
配法
]
1%
葡萄糖肉汤
(pH 7.6)100ml< br>，无菌动物血清
(
牛、羊、猪、兔
)300ml
。

将上述成分混合后，分装于试管内，每管约
4~5ml
。斜插在血清凝固器内
（或蒸笼 ）加热
80~85
℃
30min
，使血清凝固成斜面，冷却后放
4< br>℃
冰箱内。取
出后采用间歇灭菌法，
85
℃
灭菌
30 min
，连续
3
天，经无菌试验证明无杂菌生
长即可应用。

[
用法
]

18

/
92



将喉拭子直接接种于上述斜面上，置
35
℃
培养
16~24h
。白喉杆菌在上述培
养基上，菌落呈圆形，表面光滑、完整，
9g/L
氯化钠溶液中易乳化，用阿尔培
脱染色，两极异染颗粒明显。

注：

⑴
所用血清不能含有防腐剂。

⑵
该培养基不能高热灭菌，以防破坏 其中营养成分。
⑶
配制时所有器皿、
棉塞等均应高压

灭菌。

3.
亚碲酸钾血
xx
[
用途
]
用于分离白喉杆菌。

[
配法
]
蛋白胨
10g
，氯化钠
5g
，牛肉浸

膏
3g
，葡萄糖
2g
，胱氨酸
0.05g
，
1%
亚碲酸钾
45ml
，脱纤维羊血
100ml
，

xx2g
，蒸馏水
900ml
。

先将蛋白胨、氯化钠、牛肉浸

膏、葡萄糖和胱氨酸加水加热溶解，

调
pH
至
7.6
，加入
xx
，高压灭菌

115
℃
15min
备用。待冷至
50
℃
左右，< br>
用无菌操作加入已灭菌的亚碲酸钾溶

液及羊血，混匀倾注平板。


19

/
92



[
用法
]
将标本直接接种于亚碲酸钾平板

上。置
35
℃
孵箱，经
24~48h
培养，观

察结果。白喉杆菌能使亚碲酸钾还原

成金属碲而形成黑色和灰黑色的菌

落。

二、革兰阴性杆菌分离培养

基

(
一
)
弧菌分离培养基

1.
碱性
xx
[
用途
]
用于霍乱弧菌分离培养。

[
配法
]
蛋白胨
10g
，氯化钠
5g
，牛肉膏

3g
，脂
20g
，蒸馏水
1L
。

将前
4
种成分混合于水中，加热

溶解，校正
pH
至
8.4
，分装后
121
℃

灭菌
15min
，倾注平板。

[
用法
]
凡急性患有水样便标本做增菌培

养的同时，应直接取标本接种到碱性


20

/
92



xx
平板或亚碲酸钾
xx
平板上。置

35
℃
培养
12~16h
，观察结果。霍乱弧

菌生长较快，菌落大而扁平，呈青灰

色，半透明，光滑湿润。在亚碲酸钾

xxxx
菌落呈灰黑色。
[
质量控制
]
各实验室凡自配培 养基或商品培养基
,
在使用前可用标准菌株生长对照，临
床实验室可送防疫部门所设立 的专门检验机构进行目的菌监测
,
质量可靠者方可
使用。

EL- Tor
弧菌生长良好；大肠埃希菌
ATCC 25922
生长抑制。

[
保存
]
置
4
℃
冰箱，
1
周内用完。

2.
碱性胆盐
xx
[
用途
]
用于霍乱弧菌分离培养。

[
配法
]
蛋白胨
10 g
，牛肉膏
5g
，氯化纳
5g~10g
，琼脂
20g
，胆盐（牛、猪）

2.5g
，蒸馏水
1L
。

将上述成分称量混合于水中加热溶解，校正
pH
至
8.4
，分装
12 1
℃
灭菌
15min
，倾注平板。

[
用法
]
取粪便标本或增菌培养物
1
接种环接种平板，置
35
℃
温箱培养
16~18h
。霍
乱弧菌迅速生长，其它细 菌生长较缓慢。在
16~18h
后，霍乱弧菌的菌落，直径

21

/
92



可达
2mm
左右，呈扁平 ，青灰色，半透明，光滑湿润，易挑起。其它细菌菌落
小而凸起，不透明，或有色素。

[
质量控制
]
同碱性
xx
。

[
保存
]
置冰箱，
1
周内用完。

3.
庆大霉素
xx
[
用途
]
用于霍乱弧菌分离培养。

[
配法
]
蛋白胨
10 g
，牛肉浸膏
3g
，氯化钠
5g
，枸橼酸钠
10g
，无水亚硫酸钠
3g
，
蔗糖
(
或白糖
)10g
，琼 脂
15~20g
，庆大霉素、多粘菌素
B“
双抗液
”2ml
，蒸馏水
1L
。将上述成分
(
除
“
双抗液
”
外
)
称

量混合于水中，加热溶解，校正
pH
至

8.4
，分装灭菌
121
℃
15min
，待冷却至

50
℃
后，每
100mlxx“
双抗液
”

0.2ml
，另加
5g/L
亚碲酸钾溶液

0.1ml
，再倾注平板。最后每毫升培养

基内含有庆大霉素
0.5 U
，多粘菌素

B6 U
。

[
用法
]
将粪便标本或增菌培养物划线接


22

/
92



种到该平板上，置
35
℃
培养
16~18h
。

由于该培养基抑制性强，其它非

弧菌科细菌被抑制，而霍乱弧菌生长

迅速，
16h
菌落可达
2mm
，菌落青灰

色，半透明，扁平，光滑湿润。
xx
养时间长，菌落略黄色、隆起，中心

厚而不透明。

[
质量控制
]
霍乱弧菌
(xx
、稻叶
)
生长良好，

培养
18~24h
菌落直径
2.5~3.0mm
；大

肠
xx
和变形杆菌生长抑制。

[
保存
]
置
4
℃
冰箱内，
1
周内用完。

注：

⑴
该培养基国内有商品出售，多数产

品已加入庆大霉素，使用时，应详阅说明

书。

⑵
“
双抗液
”
配制：
98ml
灭菌蒸馏水

中加庆大霉素
(25 000 U/ml)1ml,
多粘菌
B
或抗敌
E(300 000 U/ml)1ml
。
4
℃
冰箱保

存，
1
月用完。


23

/
92



4.
四号
xx
[
用途
]
用于霍乱弧菌分离培养。

[
配法
]
蛋白胨
10g
，氯化钠
5g
，牛肉浸

膏
3g
，亚硫酸钠
(
无水
)3g
，枸橼酸钠

10g
，猪胆汁粉
5g
，十二烷硫酸钠

20g
，
xx
（
xx
奴尔）
3g
，
xx
脂粉

12g
，庆大霉素亚碲酸钾混合液
1ml
，

蒸馏水
1L
。

将前
8
种成分放入玻璃或搪瓷容

器内
(
严禁用铝制容器等金属容器
)
，

加入蒸馏 水，加热溶解混合后，调整至
pH8.0,
然后按
1.2%
加入琼脂，煮沸< br>至琼脂溶化后，冷至
60
℃
左右，按每
100ml
琼脂加入庆 大霉素亚碲酸钾混合液
(1ml 40 000U
庆大霉素加
79ml
蒸馏水 混合后，加入
0.8g
亚碲酸钾溶解混合即
成，每毫升含
500 U
庆大霉素和
10g/L
亚碲酸钾
)0.1ml
，摇匀，倾注平板。

[
用法
]
取待检标本划线接种平板，置
35
℃
培养过夜。

8h后即可初步观察结果。
24h
培养后，霍乱弧菌呈中心黑色、较大而扁平
的菌落。

[
质量控制
]

24

/
92



配成的培养基呈亮黄色透明；
EL- Tor
弧菌稻叶型生长良好；
EL-Tor
弧菌小川
型生长良好；大肠埃希菌
ATCC25922
抑制生长。

注：

⑴
庆大和亚碲酸钾混合液应新鲜配制并置冰箱保存。

⑵
雷佛奴尔应 避光保存，而且每批均应预试后方可使用。成品培养基应避
光保存。

(
二
)
肠杆菌分离培养基


[
用途
]
分离肠道菌的弱选择性培养基。

[
配法
]
肉膏汤琼脂
(pH7.4)1L
，
10 g/L
中国蓝溶液
(
灭菌
)10ml
，乳糖
10g
，
10g/L
蔷薇
红酸乙醇溶液
10ml
。取乳糖
10g< br>置于已灭菌的肉膏汤琼脂瓶内，加热溶解琼脂
并混匀。待冷却至
50
℃
左右，加入中国蓝、蔷薇红酸乙醇溶液混匀，立即倾注
平板，凝固后备用。

[
用法
]
将标本接种平板，置
35
℃
18
～
24h
。分解乳糖产酸的细菌，其菌落呈蓝
色；不分解乳糖的细菌，菌落为淡红色 的透明菌落。

[
质量控制
]
大肠埃希菌
ATCC 25922
菌落呈蓝

色；痢疾志贺菌
Ⅰ
型
ATCC 13313
和鼠

伤寒沙门菌
ATCC 13311
菌落呈淡红

色。

[
保存
]

25

/
92



4
℃
冰箱保存，
1
周内用完。

注：

(1)xxxx
溶液需煮沸或
115
℃
灭菌

15min
后应用。蔷薇红酸乙醇溶液无需灭

菌，但加热时应避开火焰。

(2)
蔷薇红酸能抑制革兰阳性细菌生

长，但对大肠
xx
没有抑制作用，标本接

种量不宜太多。

(3)
此培养基
pH 7.4
，应呈淡红色。若

过碱呈鲜红色，过酸则呈蓝色，均不适用。

2.
木糖、赖氨酸、去氧胆酸

盐
(XLD)
培养基

[
用途
]
为肠道菌选择性培养基。

[
配法
]
酵母浸膏
3g,L-
赖氨酸
5g,
氯化钠

5g, D-
木糖
3.75g,
乳糖
7.5g,
蔗糖
7.5g,
去氧胆酸钠
2.5g,
硫代硫酸钠
6.8g,
枸

橼酸铁铵
0.8g,
琼脂
13.5g,1%
酚红溶

液
8ml,
蒸馏水
1L
。

将上述成分
(
酚红除外
)
混合，加


26

/
92



热溶解，校正
pH
至
7.2,
再加入酚红溶

液混匀。
121
℃
高压灭菌
15min
，倾注

平板备用。

[
用法
]
将标本划线接种平板，置
35
℃
培

xx18
～
24h
。大肠
xx
、肠杆菌属、

xx
菌属、枸橼酸杆菌属细菌可形

成黄色、不透明菌落；大多数沙门菌

属细菌因不利用糖类，为半透明红色

或无色菌落。

[
质量控制
]
大肠
xx
呈黄色菌落；
xx
xx
呈无色菌落；伤寒沙门菌呈红

色菌落有黑心；金黄色葡萄球菌抑

制生长。

[
保存
]
贮存于
4
℃
有效期
5
天。

[
用途
]
沙门菌属和志贺菌属
(Salmonella- Shigella)
的分离培养。

[
配法
]

27

/
92



月示胨
5 g
，牛肉膏
5g
，乳糖
10g
，琼脂
15~20g
，胆盐
(No.3)3.5g
，枸橼酸钠
8.5g
，硫代硫酸钠
8. 5g
，枸橼酸铁
1g
，
1%
中性红溶液
2.5ml
，
0.1%
煌绿溶液
0.33ml
，蒸馏水
1L
。

将上述成分
(
除中性红、煌绿外
)
混合于水中，加热煮沸溶解，校正
pH
至
7.0~7.1
，然后加入中性红和煌绿溶液，充分混匀冷却至
50
℃
时倾注平板。

[
用法
]
将标本接种平 板，置
35
℃
培养
18~24h
。沙门菌属菌落呈无色半透明，产生
硫化氢者菌落中心呈黑色；志贺菌属的菌落呈无色半透明；大肠菌属呈红色浑
浊；宋内志贺菌能 延缓发酵乳糖，培养
24h
后可以出现红色菌落。肠道致病菌
的菌落直径均可达

1.5mm
以上。

[
质量控制
]
大肠埃希 菌菌落呈红色；痢疾志贺
Ⅰ
型、福氏志贺菌和伤寒沙门菌生长良
好，菌落无色；肠炎或 猪霍乱沙门菌菌落呈黑色；粪肠球菌、金黄色葡萄球菌
不生长。

[
保存
]
避光，
3
天内用完。

注：

煌绿要新配，中性红要优质。


[
用途
]
麦康凯琼脂
(Maconkey agar)
用于肠道致病菌的分离培养和非发酵细菌鉴
别。

[
配法
]

28

/
92



蛋白胨
20g
，氯化钠
5g
，胆盐
(
猪、牛、羊
)5g
，乳糖
10g
，琼脂
15~20g
，
1%
中性红溶液
5ml
，蒸馏水
1L
。
将上述成分
(
除中性红外
)
称量加入水中，加热溶解，校正
pH
至
7.2
，

加入中性红溶液，分装灭菌
115
℃

20min
，冷却至
50
℃
左右时倾注平板。

[
用法
]
取标本或增菌培养物接种平板，

置
35
℃
培养
18~24h
。不发酵乳糖的肠

道细菌呈无色菌落，直径约
2.0mm
左

右，光滑半透明。

[
质量控制
]
大肠
xx
菌落呈桃红色；痢疾

志贺菌菌落呈无色；伤寒沙门菌菌落

无色；金黄色葡萄球菌不生长。

[
保存
]
置
4
℃
冰箱
(
避光< br>)
，
1
周内用完。

注：非发酵细菌在该平板上是否生

长，是临床鉴定某些非发酵细菌的指标之

一。

5.
伊红美蓝
xx
[
用途
]

29

/
92



用于肠道致病菌及大肠菌群分离

培养。

[
配法
]
蛋白胨
10g
，乳糖
10g
，磷酸氢二

钾
2g
，
20g/L
伊红
Y
溶液
20ml
，

6.5g/L
美蓝溶液
10ml
，琼脂
17g
，蒸

馏水
1L
。

将蛋白胨、磷酸盐、
xx
称量混

合于水中，并加热煮沸溶解，校正
pH
至
7.1
，分装
1 21
℃
灭菌
15min
备用。

临用时加热溶化
xx
加入乳糖，冷至

50~55
℃
时加入伊红和美蓝溶液，摇匀

倾注平板。

[
用法
]
取粪便标本或增菌培养物接种平

板，置
35
℃
培养
18~24h
。根据检验目

的不同，挑取无色菌落或挑选
xx
及有金属光泽的菌落转
xx
双糖或

三糖铁
xx
进行鉴定。

[
质量控制
]
大肠
xx
菌落呈
xx
，有时


30

/
92



有金属光泽，直径＞
2.3mm
；伤寒沙门

菌菌落呈灰白色，直径＞
1.8mm
；
xx
色葡萄球菌不生长。

[
保存
]
置
4
℃< br>冰箱，
1
周内用完。


双糖铁
xx
[
用途
]
克氏双糖铁琼脂
(Kligeriron agar)
用于肠杆菌科细菌的初步鉴定。

[
配法
]
蛋 白胨
20g,
牛肉膏
3g,
酵母膏
3g,
乳糖
10 g,
葡萄糖
1g,
氯化钠
50g,
枸橼酸铁铵
0.5g,< br>硫代硫酸钠
0.5g,0.2%
酚红溶液
5ml,
琼脂
12m l,
蒸馏水
1L
。

将前
8
种成分称量混合于水中 ，加热溶解，校正
pH
至
7.5
，再加入琼脂和
酚红溶液，煮沸溶解 分装试管，每管
4ml
，经
115
℃
灭菌
20min
，立即制成高层
斜面，待凝固后经无菌试验备用。

[
用法
] < br>取待检菌纯培养物，用接种针作底层穿刺和斜面划线接种，置
35
℃
培养
18
～
24h
，观察结果。斜面变黄，底层变黄，产气者或不产气者多属大肠埃希菌
群及发酵乳糖的菌株。斜面变红，底层变黄，为不发酵乳糖菌株。

产硫化氢菌株可使底层或全管产生黑色反应。

[
质量控制
]
奇异变形杆菌
K/A
硫化氢阳性；大肠埃希菌


A/A
；志贺痢疾杆菌
K/A
；伤
寒沙门菌


K/A
硫化氢阳性；铜绿假单胞菌


K/K
。

[
保存
]
置
4
℃
冰箱，
2
周内用完。


31

/
92



注
:该培养基
pH
值尤为重要，
pH7.5
时使用效果最佳。

7.
三糖铁
xx
[
用途
]
用于肠杆菌科细菌初步生化鉴定。

[
配法
]
蛋白胨15g
，月示胨
5g
，牛肉膏
3g
，酵母膏
3g
，乳糖
10g
，蔗糖
10g
，葡
萄糖
1g
，氯化 钠
5g
硫酸亚铁
2g/L
，硫代硫酸钠
0.3g
，
0.2%
酚红溶液
5ml
，琼脂
12g
，蒸馏水
1L
。

将前
10
种成分称量混合于水中，

加热溶解后校正
pH
至
7.4
，再加
xx
及酚红溶液，加热煮沸溶解。分装试

管，每管
4ml
，经
115
℃
灭菌
20min
，

立即置高层斜面，待凝固后，经无菌

试验备用。

[
用法
]
取待检菌纯培养物，用接种针作

底层穿刺和斜面划线接种，置
35
℃
培

xx18~24h
观察结果。发酵乳糖或蔗糖

的菌可使斜面及底层均变黄色。不发

酵乳糖和蔗糖的细菌仅发酵葡萄糖时

使底层变
xx
，斜面变红。产生硫化氢


32

/
92



的菌株可使底层或整个培养基呈黑

色。分解乳糖或蔗糖后产气时有些菌

株还能使培养基断裂。

[
质量控制
]
伤寒沙门菌
K/A
，硫化氢阳性；

副伤寒沙门菌
K/A
，硫化氢阳性；痢疾

志贺菌
K/A
；大肠埃希菌
A/A
；普通变形

杆菌
A/A
，硫化氢阳性；铜绿假单胞菌

K/K
。

[
保存
]
置
4
℃冰箱，
2
周内用

完。

注：该培养基
pH 7.5
时使用效果最

佳。


[
用途
]
用于致病性、侵袭性和

产毒性大肠
xx
分离培养。

[
配法
]
蛋白胨
5g
，月示胨
3g
，氯化钠

5g
，胆盐（猪、牛、羊）
5g
，
xx
10g
，琼脂粉
12g
，
0.1g/L
结晶紫溶液

1ml
，
5g/L
中性红溶液
5ml
，蒸馏水
1L

33

/
92



将前
4
种成分混合于水中，加热

溶解，校正
pH
至
7.2
，再加入
xx
脂粉

加热煮沸溶解。分装三角烧瓶
100ml
。

经
121
℃
15min
灭菌备用。临用时，加

热溶解，再加
xx
、结晶
xx
中性

红溶液，摇匀倾注平板。

[
用法
]
将标本或增菌液接种 平板，置
35
℃
培养
18
～
24h
。与麦康凯琼脂 不同之处
是挑取致病性大肠埃希菌菌落时，以无色菌落为主，同时兼取红色菌落，如
EPEC< br>迟缓分解山梨醇，菌落呈红色。
EHEC O157
﹕
H7
菌落无色。

[
质量控制
]
参照
xxxx
。

[
保存
]
置
4
℃
冰箱，
1
周内用完。

(
三
)
非发酵细菌用培养基


培养基
(
甲
)[
用途
]
金氏培养基
(Kings Medium)
用于检测假单胞菌产生的青脓素。

[
配法
]
蛋白胨
20g
，无水氯化镁
1.4g< br>，无水硫酸钾
10g
，琼脂
15g
，甘油
10ml
， 蒸
馏水
1L
。

将上述成分加热、溶解，调
pH
至
7.2
，分装试管，
118~121
℃
灭菌
15min，
制成斜面和高层备用。


34

/
92



[
用法
]
取待检菌划种于上 述斜面上，
35
℃
培养过夜。观察斜面上产色素情况。

2.
氧化
-
发酵试验培养基
[
用途
]
用于检测细菌代谢类型。

[
配法
]
（
1
）
Hugh-Leifson
培养基
(
革兰阴 性杆菌用
)
：蛋白胨
2g
，葡萄糖
10g
，磷酸
氢 二钾
0.3g
，氯化钠
5g
，溴麝香草酚蓝（
BTB
）0.03g
，琼脂

2.5g
，蒸馏水
1L
。

（
2
）葡萄球菌
O/F(
葡萄球菌和微球菌鉴别用
)
：胰蛋白胨
10g
，酵母浸膏
10g
，琼脂
20g
，溴甲 酚紫
0.001g
，蒸馏水
1L
，葡萄糖
10g
。

将上述成分混合加热溶解，调
pH
至
7.1
，分装于试管中，每支试 管
5ml
，
高压灭菌
121
℃
15min
，使成琼 脂高层，备用。

[
用法
]
从斜面上挑取少许培养物，同时

穿刺接种两支培养基，其中一支接种

后，滴加液体石蜡于培养基表面，高

度约
1cm
。置
35
℃
孵箱培养
24~48h
。

培养基变
xx
表示细菌分解葡萄糖而产

酸，颜色不变为不分解葡萄糖。

[
质量控制
]
金黄色葡萄球菌
ATCC2 5923
、大

肠埃希菌
ATCC 25922
发酵型；铜绿假


35

/
92



单胞菌
ATCC 27853
氧化型；易变微球

菌、粪产碱杆菌不利用。

注：

(1)
有些细菌不能在上述培养基上生

长，需在该培养基中加入
2%
血清或
10g/L
酵母浸膏，重做试验。

(2)
指示剂不能用乙醇配制，因有些细

菌可使乙醇产酸，导致发酵或氧化反应影响

结果判断。

（四）其它革兰阴性杆菌用培

xx
1.
军团菌培养基

缓冲活性炭酵母
xx
培养基

（
BCYE
）

[
用途
]
用于嗜肺军团菌的分离培养。

[
配法
]
酵母浸液
10g
，活性（
NoritSG
）

2g
，
L-
半胱氨酸盐酸盐
0.4g
，可溶性
< br>焦磷酸铁盐
0.25g
，琼脂
17g
，
N-2-
乙< br>
酰氨基
-
乙氨基乙醇磺酸（
ACES
）
10g,

36

/
92



蒸馏水
80ml
。

上述成分除半胱氨酸及焦磷酸铁

外，其余成分混合加热溶解，经
121
℃

15min
灭菌，放水浴中冷却到
50
℃
。

另外分别配
xxL-
半胱氨酸溶液

（
10ml
蒸馏水中含
0.4g
）及焦磷酸铁

溶液（
10ml
含
0.25g
），分别过滤除

菌，再加入已灭菌
xxxx
，加入

1mol/L
氢氧化钾溶液
4
～
5ml
使培养

基的最终
pH
为
6.9
～
7.0
，可用

1mol/L
盐酸溶液校正，倾注平板，冷

却后置
4
℃< br>冰箱备用，亦可制成斜面，用于保存菌种。该培养基为黑色。

[
用法
]
液体标本可直接接种培养基，肺、肝、脾等固体标本须制成
100g/L
悬液后
再接种培养基，接种后的培养基置
35
℃
需氧 环境培养，培养箱需保持一定的湿
度。每天用解剖镜检查平板培养物，用略大于
100
角的斜射光源照明。在
BCYE
平板上，培养
4
～
5
天，菌 落直径约
1
～
2mm
，并出现亮蓝和切削玻璃样的构
造；继续培养后 菌落增大呈黄绿色，较光滑。

[
保存
]
在室温、暗室中可保存
1xx
2.
弯曲菌选择性培养基（
1
）
Skirrow’s
培养基
[
用途
]
用于空弯及幽门螺杆菌分离培养。


37

/
92



[
配法
]
蛋白胨
5 g
，胰蛋白胨
5g
，酵母膏
5g
，氯化钠
5g
，琼 脂粉
12g
，万古霉素
10ml
，多粘菌素
B 2500U
，
TMP 5mg
，脱纤维羊血
70ml
，蒸馏水
930ml
。
除血和抗生素外，其余成分混合于水中，加热溶解，调
pH
至
7.2
，< br>121
℃
灭
菌
15min
。待冷至
50
℃< br>时加入羊血
7ml
和多抗液
0.5ml
，摇匀，倾注无菌平板。

[
用法
]
将标本接种平板，置
25
℃
或43
℃
微需氧环境中培养
48h
，菌落直径达
1~2mm
，为不溶血的菌落。

[
质量控制
]
大肠埃希菌
ATCC 25922
和粪肠球菌
ATCC 33186
不生长；空肠弯曲菌胎儿亚
种
ATCC 29424
生长良好。

注：

1
）多抗液的配制：
①
乳酸
62mg(
约
2
滴
)
加入
100 ml
灭菌水中，然后加入
TMP100mg
，混合加热
100
℃灭菌。
②
取
①
液
5ml
，再加万古霉素
100 mg
和多
粘菌素
B

0.38mg
，摇匀后即可。将上述 成分（除羊血和抗菌补充
2
）弯曲菌属系微需
氧菌，培养时可提

供
5%
氧气及
10%
二氧化碳。高浓度氧不利

于细菌生长，尤其是幽门螺杆菌。因此标本

采集后，应尽快接种培养，或置运送培养基

中运送。

3
）弯曲菌运送可用布氏菌汤培养基。剂外），加入
900ml
蒸馏水，加热溶
解，调< br>pH
至
7.2
后分装，
121
℃
灭菌
15m in
，加入羊血和抗菌药物添加剂，充分
混匀后倾注于无菌平皿内。


38

/
92



⑵
Campy-BAP
培养基

[
用途
]
用于分离培养弯曲菌。
[
用法
]
取标本接种于平板，置
2 5
℃
或
43
℃
微需氧环境中培养
48h
，菌落直径 达
1~2 mm
，不溶血。

[
配法
]
蛋白胨
10g
，胰胨
10g
，葡萄糖

10g
，酵母浸膏
3g
，氯化钠
5g
，
xx
硫酸钠
0.1g
，蒸馏水
900ml
，脱纤维羊

血
100ml
，万古霉素
10mg
，多粘菌素

B 2 500 U
，
TMP 5mg
，两性霉素
B

2mg
。
[
质量控制
]
大肠埃希菌
ATCC 25922
不生长；粪肠球菌
ATCC 33186
不生长；空肠弯曲菌
胎儿亚种
ATCC 29424
生长良好。

第五节生化试验培养基

一、糖发酵试验培养基

1.
糖醇发酵试验培养基

[
用途
]
检查细菌对不同糖
(
醇
)
类的发酵

能力，达到鉴定细菌的目的。

[
配法
]

39

/
92



蛋白胨
10g
，牛肉膏
3g
，氯化钠

5g
，安德烈
(Andrade)
指示剂
10ml
，蒸

馏水
1L
，各种糖
(
醇
)
类
5~10g
。
将上述成分混合后，加热溶解。

xxpH
至
7.2
。根据需要，分别再加

相应的糖和醇。分装于
13mm×100mm
的试管，每管约
3ml
，
115
℃
灭菌

15min
。如需观察产气，可在试管
xx
小倒管
1
只。

将分离的纯菌接种到糖（醇）发

酵管中，置
35
℃
培养
18
～
24h
。接种

菌若能分解培养基中的糖（醇）类而

生成酸，使指示剂呈酸性反应，若产

生气体，则可使液体培养基中的倒管

(Durham
管
)
内出现气泡；若接种菌不

分解糖（醇）则无反应。用于肺炎链球菌与其它链球菌鉴别。

[
配法
]
血清
(
兔血清或牛血清
)25ml，
1g/L
酚红溶液
2ml
，菊糖
1g
，蒸馏水
75ml
。

先取血清
25ml
、蒸馏水
75ml
混合，置阿诺灭菌器内加热
15min
，以破坏血
清内的淀粉酶。调
pH< br>至
7.4
，然后加入菊糖
1.0g
、
1g/L
酚红溶 液
2ml
摇匀。分
装于
13mm×100mm
的试管，每管
2ml
。用间歇灭菌法灭菌，每天
1
次，连续
3
天，每次
2 0min
。


40

/
92



[
用法
]
将被检菌接种培养基，置
35℃
培养
18~24h
。分解菊糖的菌株使培养基变
黄；不分解菊糖的菌株 ，培养基不变色。

[
质量控制
]
肺炎链球菌
ATCC 10015
阳性；化脓性链球菌
ATCC 19615
阴性。

3.
胆汁七叶苷试验培养基

2.
血清菊糖试验培养基

[
用途
][
配法
]
蛋白胨
5g
，牛肉浸 膏
3g
，牛胆汁
40g
，七叶苷
1g
，枸橼酸铁
1 5g
，蒸馏水
1L
。

将上述成分混合加热溶解，调
pH
至
7.2
，分装试管，
115
℃
灭菌

15min
。

将待测菌种接种到七叶苷培养基

的斜面上 ，置
35
℃
孵育
18
～
24h
，观

察结果。培养基变为黑色或棕色者为

阳性；不变色者为阴性。

[
质量控制
]
粪肠球菌
ATCC 29212
阳性；化脓

性链球菌
ATCC 19615
阴性。

[
保存
]

41

/
92


0.5g
，琼脂

置
4
℃
冰箱，
2
周内用完。

二、酶类测定培养基和试剂

1.
氨基酸脱羧酶试验培养基

[
用途
]
检查细菌使氨基酸脱羧

基形成胺使培养基变碱的能力。常用

的氨基酸有赖氨酸、鸟氨酸和精氨

酸。

[
配法
]
蛋白胨
5g,
牛肉浸膏
5g,
溴甲酚紫

0.1g,
甲酚
xx0.005g,
吡多醛

(VB 6)0.005g,
葡萄糖
0.5g,
蒸馏水
1L
。

加热慢慢溶解，按
10g/L
浓度加

入所需要的氨基酸，调
pH
至
6.0
，呈

深亮紫色。分装每支
2ml
，同时配对照

管
(
不加氨基酸
)
，高压灭菌
121
℃

15min,
冷却后
4
℃
冷藏备用。

[
用法
]
将试验菌接种培养基，同时接种

对照管
1
支。并用灭菌的液体石蜡覆

盖，置
35
℃
培养
18~24h
。阳性菌初期


42

/
92



由于细菌发酵葡萄糖产酸呈黄色，若

继续孵育，氨基酸经脱羧产生胺类使

培养基变碱，指示剂改变颜色，呈紫

色或
xx
。阴性呈黄色或不变色。

[
质量控制
]
赖氨酸脱羧酶
:
迟缓
xx
菌阳

性，弗劳地枸橼酸菌阴性；鸟氨酸脱

羧酶
:
产气肠杆菌阳性，弗劳地枸橼酸

菌阴性
;
精氨酸脱羧酶
:
鼠伤寒沙门菌

阳性，普 通变形杆菌阴性。
2.
耐热
DNA
酶培养基
[
用途
]
用于检测细菌所产生的耐热脱氧核糖核酸酶。

[
配法
] 胰蛋白胨
1.5g,
植物蛋白胨
0.5g,
氯化钠
0.5g,D NA 2g/L,
琼脂
1.5g,
蒸馏水
100ml,2g/L
甲苯 胺蓝溶液

0.25ml
。

将前
6
种成分徐徐加 热溶解后，调
pH
至
7.4
，加入甲苯胺蓝溶液，分装试
管，
121
℃
灭菌
15min
后备用。

[
用法
]
上述琼脂倾注于载玻片上，凝固后，打孔，孔径
2cm< br>，孔内加入经
100
℃
15min
隔水加热处理后的肉汤培养物。将载 玻片孵育于
35
℃
湿盒内
4h,
取
出观察结果。阳性反应在 孔周围出现不小于
4mm
直径粉红色圈，阴性反应培养
基的颜色无改变。


43

/
92



[
质量控制
]
金黄色葡萄球
ATCC 25923
阳性；表皮葡萄球菌
ATCC 12990
阴性。


酶试验培养基
[
用途
]
供细菌
DNA
酶测定用。

[
配法
]
DNA 2g
，胰酪胨
15g
，大豆胨
5g
，氯化钠
5g
，琼脂
20g
，蒸馏水
1L
。

将
5
种成分混合于蒸馏水中，加热溶解，校正
pH
至
7.2~7.4
， 分装三角烧
瓶，经
115
℃
灭菌
15min
，倾注灭菌平皿 ，
4
℃
冷藏备用。

[
用法
]
将待检菌 作点状穿种在平板上，置
35
℃
培养
24h
。待细菌生长成集落菌苔
后，在其菌苔上及周围滴加

0.1mol/L
盐酸溶液数毫升，待片刻后， 如待检菌
DNA
酶阳性，可在菌苔的
周围出现明显的透明圈；而阴性者则无透明圈出现 。

[
质量控制
]
金黄色葡萄球菌
ATCC 25923
和粘

质沙雷菌
ATCC 274
阳性
;
表皮葡萄球

菌
ATCC 14990
和大肠埃希菌
ATCC

25922
阴性。

[
保存
]
置
4
℃
冰箱
1
周内用完 。

氧化酶试验

4.
[
用途
]
区别假单胞菌与氧化酶阴性的肠


44

/
92



杆菌科细菌。

[
配法
]
盐酸二甲基对苯二胺（或四甲基

对苯二胺）
0.1g
加蒸馏水
10ml
。

[
用法
]
取白色洁净滤纸一角，沾取试验

菌落少许，加试剂一滴。阳性者立即

显粉红色，并于
5
～
10s
内呈现深紫色

反应。若用四甲基对苯二胺则阳性为

蓝色。

[
质量控制
]
铜绿假单胞菌
ATCC 27853
阳性；

大肠
xxATCC25922
阴性。

[
保存
]
置棕色瓶内可用一周，
4
℃
冰箱保

存，或分装于棕色瓶内
xx
。

5.
尿素酶试验培养基

[
用途
]
用于细菌尿素酶测定。

[
配法
]
蛋白胨
1g,
葡萄糖
1g,
氯化钠
5g,

45

/
92



磷酸二氢钾
2g,4g/L
酚红溶液
3ml,
琼

脂
18~20g,200/L
尿素溶液
100ml,
蒸馏

水
1L
。

将前
5
种成分混合于蒸馏水中，

加热溶解，校正
pH
至
7.0
，然后加入

酚红溶液，分装每瓶
100ml
，经
121
℃

灭菌
15min
备用。临用时，加热溶

解，冷却至
55
℃
左右，加入无菌的尿

素溶液
10ml
，摇匀立即无菌分装于灭

菌试管，每支
2ml
，并置成斜面。经无

菌试验后备用。

[
用法
]
取培养物接种斜面，
35
℃
孵育

24h
。尿素酶阳性者斜面变红色
,
阴性者颜色无变化。

[
质量控制
]
普通变形杆菌
ATCC 13315(8h)
整个培养基变红、肺炎克雷伯菌
ATCC 27236
仅斜面变红
(24h)
；大肠埃希菌
ATCC 25922
为阴性
(24h)
。

[
保存
]
置
4
℃
冰箱，
2
周内用完。

6.
磷酸酶试验培养基
[
用途
]

46

/
92