临床免疫学与检验重要知识点汇总

2021年1月23日发(作者：惠能)
临床免疫学与检验重要知识点汇总

免疫应答主要分为哪几个阶段？

1
）识别阶段
2
）活化和增值阶段
3
）免疫效应

中枢免疫器官和外周免疫器官有哪些器官组成？各有什么功能？

1
）中枢免 疫器官：免疫细胞发生、分化、成熟的场所，如骨髓，胸腺
2)
外周免疫
器官：免疫细 胞产生应答的场所。如脾脏，淋巴结，黏膜，扁桃体等。

T
细胞、
B
细胞和
NK
细胞的主要功能分别是什么？

1
）
T
细胞：

介导细胞免疫，辅助体液免疫。
2
）
B
细胞：

产 生体液免疫
3
）
NK
细
胞：介导天然免疫，发挥细胞毒作用。

根据作用方式及其特点的不同，机体存在两类免疫简述各自的概念和特征？

1)
先天性免疫或固有性免疫，是个体出生是就具有的天然免疫，可通过遗传获得，
是机体在长期进 化过程中逐渐建立起来的主要针对入侵病原体的天然防御功能。其
主要特征是反应迅速，针对外来异物的 范围较广，不针对某个特定异物抗原，也称
非特异性免疫。
2)
适应性免疫，
是个体出生后，
接触到生活环境中的多种异物抗原，
并在不断刺激中逐渐建立起来的后天免疫， 也称获得性免疫。其主要特征是针对某
个特定的异物抗原而产生免疫应答，开始的应答过程比较缓慢，一 旦建立清除该抗
原的效率很高，特异性很强，也称特异性免疫。

简述抗原抗体反应的原理。

答：抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原表位与抗体超 变区分子间的结构互补性
与亲和性，这种特性是由抗原、抗体分子空间构型所决定的，它们之间的结合是 抗
原表位与抗体超变区沟槽分子表面的结合

简述抗原抗体反应的类型。
< br>答：
抗原抗体反应分为五种类型：
①颗粒性抗原与相应抗体结合所产生的凝集反应；②可溶性抗原与相应抗体结合所产生的沉淀反应；③抗原抗体结合后激活补体所致
的细胞溶解反应； ④细菌外毒素或病毒与相应抗体结合所致的中和反应；⑤免疫标
记的抗原抗体反应等。

什么是带现象
?
答：在抗原抗体反应等价带前后，由于抗体或抗原过量
(< br>形成前带或后带
)
，上清液
中可测出游离的抗体或抗原，形成的沉淀物少，不出 现可见反应，这种现象在做血
清学试验时称为带现象。

影响抗原抗体反应的环境条件有哪些
?
在实验中如何控制这些条件因素
? < br>答：环境条件包括：电解质，酸碱度和温度。稳定条件：①电解质：常用
O
．
8 5
％
氯化钠或各种缓冲液作抗原及抗体的稀释液及反应液；②酸碱度：
pH
过 高或过低都
将影响抗原与抗体的理化性质，抗原抗体反应一般在
pH
为
6～
8
时进行；③温度：一
般以
15
，

40
℃为宜，最佳反应温度为
37
℃。

简述单克隆抗体制备技术的主要步骤。

单克隆抗体是应用
B
细胞杂 交瘤技术进行制备的，其主要操作步骤包括抗原免疫、
亲本细胞的选择和制备、细胞融合、杂交瘤细胞的 筛选和克隆化、杂交瘤细胞体内
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接种或体外增量培养、单克隆抗体的纯化与鉴定。

试述免疫血清应如何进行纯化。

免疫血清的纯化主要是指提纯免疫血清中的
IgG
并去除无关的杂抗体。提纯
IgG
类抗
体的方法有：硫酸胺盐析法粗提 、离子交换层析法和亲和层析法，采用亲和层析法
提取
IgG
时，可使用纯化抗原或葡 萄球菌蛋白
A
交联
sephamse 4B
制成层析柱。另外，
还可 通过吸附法获得单价特异性抗血清。方法是将不含特异性抗原的杂抗原与戊二
醛等双功能试剂混合制成固 相吸附剂，以吸附免疫血清中的杂抗体，或将杂抗原交
联于
sephamse 4B
上，通过亲和层析去除杂抗体。

叙述杂交瘤技术的基本原理。

杂交瘤技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏
B
细胞
和 具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为
B
细胞杂交瘤。这种杂交瘤细胞具有两种
亲本细 胞的特性，即既能够分泌抗体又能在体外长期繁殖，经过克隆化后成为单个
细胞克隆，分泌的抗体即为单 克隆抗体。

简述间接血凝试验的基本原理。

间接血凝试验是将可溶性抗原
(
或抗体
)
吸附于人的
0
型红细胞或绵羊、家兔的红细胞制成抗原致敏的红细胞，与相应抗体
(
或抗原
)
作用，在有电解质存在 的条件下，
经过一定时间可出现肉眼可见的红细胞凝集现象，又称被动血凝试验

简述 抗人球蛋白试验的原理
(
又称
Coombs
试验
)
、类型及 其在临床上的应用。

Coombs
试验又称抗人球蛋白试验，其原理是不完全抗体多 半是
7S
的
IgG
类抗体，能
与相应的抗原牢固结合，但在一般条件 下不出现可见反应，利用抗球蛋白抗体作为
第二抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异抗体，可使红细 胞凝集。
Coombs
试
验有二种类型：
(1)
直接
Co ombs
试验：用于检测红细胞结合的不完全抗体。
(2)
间接
Coombs
试验：用于检测血清中游离的不完全抗体。

抗球蛋白试验主要应用于那些方面？

①输血：对于“危险”受体（指曾经输血、肌肉 注射过血液制品或母子间血型不合
的妊娠而可能产生免疫性血型抗体的人）的配血试验必须包括各种不完 全抗体的检
查，以抗球蛋白法最为可靠。②血型抗原抗体的检查：主要检查
Rh
—
者，其体内
是否有抗
-D
抗体，应用抗球蛋白试验对外表为
D
阴性的供体血液作常规检查。最可
靠和灵敏的方法是将待检
D
阴性的红细胞与高效价的不完全抗
-D
血清混合，然后
加抗球蛋白血清检查 细胞上有无致敏抗体。③对新生儿溶血性贫血性疾病的诊断：
母体产生的最常见的免疫性抗体为
Rh
抗体和
ABO
抗体，一般为
7S
的
IgG
，可通过
胎盘屏障，作用于胎儿红细胞，引起新生儿溶血性疾病，可借抗球蛋白试验检出而
采 取预防性措施。④对溶血性贫血的研究：获得性溶血性贫血患者大多数可借助该
方法证实有自身红细胞的 抗体存在。⑤对细菌或立克次体的不完全抗体的检查。
Coombs
试验还可采用专一性特异性的抗球蛋白的血清，如抗
IgG
血清、抗
IgM
、抗
IgA
以及抗补体血清等，分析结合于红细胞上的不完全抗体免疫球蛋白的亚类。

什么是协同凝集试验？主要用于何种检测？

协同凝集试验与间接凝集反应 的原理相类似，但所用的载体为金黄色葡萄球菌。这
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种细菌的细胞壁中含有
A
蛋白（
SPA
），
SPA
能与特异性抗体
IgG
的
Fc
段结合（
IgG3
除外）。抗体的
F(ab
ˊ
)2
段暴露在葡萄球菌的表面，仍保持与相应抗 原特异性结
合的特性。当这种葡萄球菌与
IgG
抗体连接时，就成为抗体致敏的载体颗 粒，若与
相应抗原接触，即出现反向间接凝集反应。可用于细菌、病毒、毒素及各种可溶性
抗原 的检测。

何谓间接凝集反应？

将可溶性抗原（或抗体）先吸附或偶联于与 免疫无关大小适当的颗粒表面，使之成
为致敏载体颗粒，然后与相应抗体（或抗原）作用，在适宜电解质 存在条件下，出
现特异性的凝

集现象，称为间接凝集反应

间接凝集反应如何进行分类？各试验的原理是什么

根据致敏载体用的是抗原或抗体分 为正向间接凝集试验和反向间接凝集试验；根据
载体种类，分为间接血凝试验和胶乳间接凝集试验；根据 反应方式分为间接凝集试
验、间接抑制凝集试验和协同凝集试验。
间接凝集试验
是用抗 原致敏载体检测标本
中的相应抗体。将可溶性抗原与载体颗粒结合，再与标本中的抗体反应，通过抗体< br>桥联，形成肉眼可见的凝集颗粒或凝集块，为阳性反应。
反向间接凝集试
验
选用 已
知特异性抗体致敏载体检测标本中的相应抗原。用特异性抗体致敏颗粒，与样品中
的待检抗原 反应，通过抗原桥联，形成肉眼可见的凝集为阳性。临床上用于检测
HbsAg
、
AF P
等。
间接凝集抑制试
验
诊断试剂为已知抗原致敏的颗粒载体及相应的抗体，用于检测标本中与致敏抗原相同的抗原。将标本与抗体试剂相反应，然后加
入致敏抗原，若出 现凝集现象，说明标本中不存在相应抗原
;
如未出现凝集现象，
则说明待检标本中含有 相应抗原，凝集反应被抑制。同理，用抗体致敏载体颗粒及
相应抗原作为诊断试剂，检测标本中的抗体， 称为
反向间接凝集试验
。
协同凝集试
验
与间接凝集反应的原理相似，
但所用载体为金黄色葡萄球菌，
该菌细胞壁上的
SPA
能与特异性抗体的
IgG
的
Fc
段结合（
IgG3
除外），抗体的
F(ab
ˊ
)2
段暴露在葡萄
球菌的表面，仍能与相应抗原特异性结合。当这种葡萄球菌与
IgG < br>抗体连接时，就
成为抗体致敏的载体颗粒，若与相应抗原接触，即出现反向间接凝集反应。
间接血
凝试验
是以红细胞作为载体的间接凝集试验，用已知的抗原或抗体致敏红细胞，然后与样品中的抗体或抗原在适宜条件下反应，出现红细胞凝集者为阳性。根据红细
胞凝集的程度判断 阳性反应的强弱。
胶乳凝集试验
是以聚苯乙烯胶乳微粒作为载体
的间接凝集试验。
HAT
培养基筛选杂交瘤细胞的机制是什么？

答：
1.淋巴细胞：不能生长，
5
到
7
天死亡；
DNA
的主要合 成途径被
A
阻断
2.
骨髓瘤细
胞：不能生长，
5
到
7
天死亡；
HGPRT
缺乏，
DNA
合成的旁路途经受阻< br>3.
骨髓瘤细胞和
脾细胞融合形成杂交瘤细胞，可长期生长繁殖。利用淋巴细胞的
HGRT
将Ｈ合成为嘌
呤碱并最终与Ｔ一起合成ＤＮＡ从淋巴细胞获得产生某种抗体的遗传信 息，从骨髓
瘤细胞获得不断繁殖的能力

简述免疫系统的三个生理功能。

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答：免疫系统的三个生理功能为免疫防御、免疫自稳、免疫监视

免疫防御：是机体排斥外来抗原性异物的一种免疫保护功能。该功能正常时，机体可抵御病原微生
物及其毒性产物的 感染和损害，即抗感染免疫；异常情况下，反应过高会引起超敏
反应，反应过低或缺失可发生免疫缺陷。 免疫自稳：是机体免疫系统维持内环境稳
定的一种生理功能。该功能正常时，机体可及时清除体内损伤、 衰老、变性的细胞
和免疫复合物等异物，而对自身成分保持免疫耐受；该功能失调时，可发生生理功能紊乱或自身免疫性疾病。免疫监视：是机体免疫系统及时识别、清除体内突变、
畸变细胞和病毒感 染细胞的一种生理功能。该功能失调时，有可能导致肿瘤发生，
或因病毒不能清除而出现持续感染。
决定抗原抗体最佳配比的方法有几种
?

(1)
抗原稀释法： 将可溶性抗原作一系列倍比稀释，然后向各管中加入一定浓度的
适量抗血清，
37
℃反 应后，产生的沉淀量随抗原量变化而不同，以沉淀物最多的管
为最适比例管。
(2)
抗 体稀释法：是将恒定量抗原与不同倍比稀释的抗体反应，出
现沉淀物最多的管为抗体最适比例管。
(3)
棋盘格法：亦称方阵法。抗原抗体同时
稀释，可一次完成抗原和抗体的滴定，并找出抗 原、抗体的最适比。是前二法的结
合

简述单向免疫扩散试验的基本原理和技术要点。
(1)
原理：待测抗原从局部含有定
量抗体的凝胶内自由向周围扩散，抗原抗体特异性 结合，在两者比例合适的部位，
形成白色沉淀环，沉淀环的大小与抗原的浓度呈正相关。
(2)
技术要点：将抗体和
热融化琼脂
(
约
50
％
)混合，倾注成平板。待凝固后在琼脂板上打孔，孔中加入已稀
释的抗原液，和不同浓度的抗原标准品 ，置
37~12
温箱，
24
～
48h
后观察孔周围沉淀环。量取沉淀环直径，通过抗原标准品，计算待测抗原的浓度。

在双向免疫扩散试验中，如何判定结果
?

双向免疫扩散中，出现沉淀线，表 明存在相应的抗原、抗体，不出现沉淀线则表明
缺乏抗原或抗体。
沉淀线的形成是根据抗原抗体 两者比例所致，
沉淀线靠近抗原孔，
提示抗体含量高；靠近抗体孔，提示抗原含量较多

免疫电泳技术的优点是什么
?
免疫电泳有哪些用途
?

1)
优点：免疫电泳技术是将免疫扩散和电泳相结合的一种免疫学分析技术，既有抗
原抗体反应的高 度特异性，又有电泳分离技术的快速、灵敏和高分辨力，广泛应用
于牛物医学领域。
(2)用途：①纯化抗原或抗体的成分分析，分析其纯度；②正常
及异常体液中蛋白质成分的分析，如无丙 种球蛋白血症、冷球蛋白血症、多发性骨
髓瘤、白血病、系统性红斑狼疮、肝病等病人的血清蛋白成分的 分析，多发性骨髓
瘤血清
M
蛋白的检测和鉴定；③免疫后不同抗体组分的动态变化研究

对流免疫电泳时，抗体为什么流向负极
?
大部分蛋白质抗原在碱性溶液中 带负电荷，电泳时从负极向正极泳动，而抗体
IgG
分子量大，
暴露的极性基团较少，
在缓冲液中解离的也少，
向正极的泳动速度较慢，
电泳时由电渗引向负极的液流速度超 过了
IgG
向正极的泳动，带动抗体流向负极，
使抗原和抗体定向对流并发生反应，出 现肉眼可见的沉淀线。

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简述火箭免疫电泳的原理和主要用途。

(1)
原理：火箭免疫电泳是将单向 免疫扩散和电泳相结合的技术。抗原在电场作用
下，在含有适量抗体的琼脂糖凝胶中向正极泳动，逐渐形 成梯度浓度，在抗原抗体
比例适当时形成沉淀，随着抗原量的减少，沉淀带越来越窄，形成火箭峰样沉淀 ，
峰形高低与抗原量呈正相关。用已知量标准抗原作对照，绘制标准曲线，根据检测
样品沉淀峰 的高度可算出待测抗原的含量。
(2)
主要用途：
①抗原蛋白定量，
如
IgA
、
IgG
、
IgM
和
sIgA
检测；②< br>C3
、
C4
及其裂解产物检测；③
AFP
等检测。

免疫浊度测定的基本原
理是什么
?
有哪些类型
?

(1)
基本原理：免疫浊度测定是将液相内的沉淀试验与现代光学仪器和自动分析技
术相结合的 一项分析技术。
当可溶性抗原与相应的抗体特异结合，
在二者比例合适、
并有一定浓度 的电解质存在时，
可以形成不溶性的免疫复合物，
使反应液出现浊度。
这种浊度可用肉 眼或仪器测知，并可通过浊度推算出复合物的量，即抗原或抗体的
量。
(2)
类型：按 测量方式可分为透射免疫比浊法和散射免疫比浊法。按测定速度
可分为速率比浊法和终点比浊法。

散射免疫比浊法的基本原理是什么
?
沿水平轴照射的一定波长的光，在通过溶液 时，光线可被其中的免疫复合物粒子颗
粒折射，发生偏转，产生散射光。根据
Rayle
培
h
散射方程，散射光强度与粒子
(
免
疫复合物
)
的浓度和体积成正比，通过测量散射光的强度，可计算出待测抗原的浓
度。

速率散射比浊法中的“速率”是指什么
?
所谓速率是指单位时间内抗原与抗体反应的 速度。抗原与抗体结合形成免疫复合物
的速度，在每个单位时间内是不相同的，在抗体过量的情况下，随 着反应时问的延
长，免疫复合物的总量逐渐增加，通常在
25s
时出现一个反应最快的 速率峰。峰值
与抗原量呈正相关。

免疫浊度测定的反应体系中，为什么必须始终保持抗体过量

抗原和抗体的比例是浊度 形成的关键因素，抗原和抗体必须在一个适当的浓度才会
出现最高结合率。当抗原过量时，由于钩状效应 ，形成的免疫复合物分子小，而且
会发生再解离，使浊度下降，光散射减少。当反应液中抗体过量时，免 疫复合物的
形成随着抗原量的增加而递增，光散射的强度也随之递增，因此，免疫浊度测定的
反 应体系中必须始终保持抗体过量，以保证免疫复合物的生成量与浊度的改变一
致，这是免疫浊度测定的基 本原则。

单向琼脂扩散试验有那些影响因素？

单向扩散试验有下列影响因素：

①

抗血清的亲和力、特异性、及 效价。要求亲和
力强，特异性好、效价高。注意存放的方法，防止效价下降。

②

标准曲线必须在
每次测定时同时制作，
绝不可一次作成，
长期应用。

③

测定时必须加测质控血清，
以保证定量的准确性。

④

有时出现扩散环呈现两重的双环现象，这是出现了抗原
性相同的两个组分 ，其扩散率不同，例如α重链病血清中出现的α重链和正常的

IgA
两种成分并存，皆与抗
IgA
抗体发生反应，就形成内外两重环。

⑤

在单扩试
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验时，有时回出现结果与真实含量不符，这主要出现在
Ig
测定中。如用单克隆抗
体或骨髓瘤纯抗原免疫动物获得的抗血清，都存在单一结合价的现象，若用此作为
单扩试剂测量 正常人的多态性抗原，则抗体相对过剩，是沉淀圈直径变小，测量值
降低。

⑥

测得假阳性升高现象与上面相反，如用多克隆抗体测定单克隆病，则抗
原 相对过剩（单一抗原决定簇）

，致使沉淀圈呈不相关扩大，从而造成某一成分
的伪性增加。

沉淀反应可应用在那些方面？

沉淀反应主要应用于体液内包括血液、尿液、脑脊液、 胸水、泪液、关节腔液等内
的蛋白质（如
MW10000~50000
，标本浓度为< br> 1mg/L~100g/L
）测定，应用最广泛的是
可以准确定量的免疫浊度法，也可 用于药物的测定。

双向琼脂扩散试验的原理是什么？

双向琼脂扩散试验 的原理为可溶性抗原和抗体在含有一定电解质的琼脂凝胶板的
对应孔中各自向对方扩散，在最适当的比例 处形成抗原抗体沉淀线，根据沉淀线的
位置、形状及对比关系，可作出对抗原或抗体的定性分析

试对沉淀反应各类试验方法进行评价。

沉淀反应可分为单向免疫扩散试验、双向免疫扩散试验、絮状沉淀试验、免疫浊度
测定

等试验。

单向免疫扩散试验是一种稳定、简便、不需要特殊设备、一般试验室都可使用的常规方法。

双向免疫扩散试验简单易行，结果可靠，特异性高，分辨率
高于对流免疫电泳，
成本低廉，
结果可经染色干燥后长期保存；
缺点是敏感性较低、< br>扩散缓慢，不能精确定量。

免疫浊度法①快速、②敏感，最小检出量可达
ng
水平。③检测范围广

④缺点是
所用抗血清质量要求高，仪器须装电脑，价格较贵。

絮状沉淀试验 较实用、简便、
不需要特殊设备一般试验室都可使用，但须稀释标本比较麻烦。

放射免疫分析技术有何应用？

答：放射免疫技术由于其测定的灵敏度高，特异性强， 精密度好，而且可对半抗原
和抗原测定以及测定仪器设备条件要求不高，因此广泛用于生物医学检验。常 用于
各种激素、微量半抗原、肿瘤标志物、药物等微量物质的测定。

由于大多数检验
项目均有
RIA
或
IRMA
试剂盒供应，目前仍是基层单位对超微量物质测定的主要
手段。

试述放射免疫分析与免疫放射分析。

答：放射免疫分析（
RIA
）是放射免疫技术最经典的模式。它是以放射性核素标记
抗原与反应系统中未标记抗原竞争性结合特异性 抗体为基本原理来测定待检样品
中抗原量的一种分析方法。而免疫放射分析（
IRMA
）是用放射性核素标记的过量抗
体与待检测抗原直接结合，采用固相免疫吸附载体分离结合与游离标记抗 体的非竞
争性放射免疫分析。二者的异同点如下：

①标记物
RIA
以放射性核素标记抗原；
IRMA
则是标记抗体。

②反应速率
IRMA
反应速度比
RIA
快。

③反应原理
RIA
为
竞争抑制性结合，反应参数与待检抗原量成反相关；
IRMA
为非竞争结合，
反应参数
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与待检抗原成正相关。

④特异性
IRMA
特异性较
RIA
高。

⑤灵敏度和检测范围

IRMA
测定的灵敏度明显高于
RIA
，
IRMA
标准曲线工作范围较
RIA
宽
1~2
个数量级。

⑥其他
RIA
所用抗体为多克隆抗体，对亲和力和特异性要求较高，但用量很少；
IRMA
为试剂过量的反应，
对抗体亲和力的要求不及
RIA
，
但用量大。
此外，
RIA
可
以测量半抗原，但
IRMA
只能测定至少有两个以上表位的抗原。

试述用于标记的荧光素应具备什么条件
?
DA
用于标记的荧光素应符合以下 要求：①应具有能与蛋白质分子形成共价键的化学
基团，结合后不易解离，而未结合者易清除；②荧光效 率高，与蛋白质结合后，仍
能保持较高的荧光效率；③荧光色泽与背景组织的色泽对比鲜明；④与蛋白质 结合
后不影响蛋白质原有的生化与免疫学性质；⑤标记方法简单、安全无毒；⑥与蛋白
质的结合 物稳定，易于保存。

试述荧光免疫显微技术基本原理。

DA
荧光 免疫显微技术是以荧光显微镜为检测工具，用荧光素标记特异性抗体或抗抗
体，检测固定组织细胞上的抗 原或血清中的抗体，常用于定性和定位检查的一门技
术。

试述荧光免疫显微技术的临床应用。

DA
临床常应用于：①血清中自身抗体 的检测；②各种微生物的快速检查和鉴定；⑧
寄生虫感染的诊断；④白细胞分化抗原的检测。

时间分辨荧光免疫测定法具有哪些优点
?

DA
时间分辨荧光免疫测 定法具有特异性强，灵敏度高，标准曲线范围宽，分析速度
快，标记物制备较简便、有效使用期长，无放 射性污染等优点，因此是很有发展前
途的超微量物质免疫分析技术。

目前临床检验中常用的荧光物质有哪些？

DA
目前临床检验中常用的荧光物 质有：四乙基罗丹明、异硫氰酸荧光素、四甲基异
硫氰酸罗丹明、
Eu3+
的螯合物等 。

简述荧光抗体的制备及纯化方法。
DA
荧光抗体的制备方法纯化方法有透 析法、凝胶
过滤法、有撑搅拌法及透析法。

荧光抗体技术有哪些优缺点，在临床上有哪些应用？

荧光抗体技术的优点：（
1
）能做到快速、敏感、定位。（
2
）
Ag
和
Ab < br>的特异性与
形态的检查结合在一起；缺点：⑴对组织细胞进行微细结构的观察做不到；⑵标本不能永久保存，荧光有自然消退现象，需及时观察及对照相；⑶有非特异性荧光的
干扰。
荧 光抗体技术的应用：
⑴病毒学方面：
病毒鉴定和病毒在感染
cell
内的定位 ；
⑵寄生虫学方面：用于寄生虫的诊断（鉴定、分型）；⑶免疫学方面：研究、用于
自身免疫病 的诊断；⑷细菌学方面：菌种鉴定和
Ag
结构的研究。

用于标记的酶应符合哪些要求
?

DA(1)
酶活性高，能对低浓度 底物产生较高的催化反应率。
(2)
具有可与抗原、抗体
共价结合的基团，标记后酶活 性保持稳定，而且不影响标记抗原与抗体的免疫反应
性。
(3)
酶催化底物后产生的信 号产物易于判定或测量，且方法简单、敏感和重复
临床免疫学与检验重要知识点汇总

性好。
(4)
酶活性不受样品中其他成分
(
内源性酶、抑制物
)的影响；用于均相酶免
疫测定的酶还要求当抗体与酶标抗原结合后，酶活性可出现抑制或激活。(5)
酶、
辅助因子及其底物均对人体无危害，理化性质稳定，且价廉易得。

简述酶免疫技术的分类。

DA(1)
酶免疫技术按实际用途，分为酶免疫组 化和酶免疫测定两大类。
(2)
按抗原抗
体反应后是否需将结合的和游离的酶标记物分 离，分为均相酶免疫测定和异相酶免
疫测定，异相酶免疫测定又可分为固相酶免疫测定和液相酶免疫测定 。

简述均相酶免疫测定的原理。

DA
酶标抗原
(AgE )
与
Ab
结合形成
AbAgE
后，其中的酶
(E)
活性将减弱或增强。因此，
不需对反应液中的
AbAgE
和
AgE
进 行分离，直接测定反应系统中总酶活性的变化，即
可推算出被测样品中
Ag
的含量。< br>
简述双抗体夹心法的原理。

DA
连接于固相载体上的抗体和酶标抗 体，与待检抗原上两个不同的抗原决定基结
合，形成固相抗体一抗原一酶标抗体复合物。由于反应系统中 固相抗体和酶标抗体
的量相对于待检抗原是过量的，因此复合物的形成量与待检抗原的含量成正比。测< br>定复合物中酶作用于加入的底物后生成的有色物质量，即可确定待检抗原含量。

斑点
-ELISA
有哪些优点
?
DA(1)NC
膜吸附蛋 白力强，微量抗原吸附完全，故检出灵敏度可较普通的
EusA
高
6
～
8
倍；
(2)
试剂用量较
EusA
省
10
倍；< br>(3)
操作简便，试验及结果判断不需特殊设备条
件；
(4)
吸附抗原
(
抗体
)
或已有结果的
NC
膜可长期保存
(-20℃可达半年
)
。

简述
ELISA
的基本原理、方法类型及应用。

DA(1)
基本原理：
抗原或抗体预先结合到某种固相载体表面；
测定时，
将受检样品
(
含
待测抗体或抗原
)
和酶标抗原或抗体按一定程序与结合在固相载体上的抗 原或抗体
起反应形成抗原或抗体复合物；反应终止时，固相载体上酶标抗原或抗体被结合量
(< br>免疫复合物
)
即与标本中待检抗体或抗原的量成一定比例；经洗涤去除反应液中其
他物质，加入底物进行显色，最后通过定性或定量分析有色产物量即可确定样品中
待测物质含量。(2)
方法类型及应用：①双抗体夹心法：用于检测抗原，适用于检
测两个或两个以上抗原 决定基的多价抗原；②间接法：用于检测抗体；③竞争法：
用于抗原和半抗原的定量测定，也可对抗体进 行测定；④捕获法：用于血清中某种
抗体亚型成分
(
如
IgM)
的测 定。

简述酶增强免疫测定技术的原理。

DA
具抗原及酶活性的< br>Ag-E
与
Ab
结合形成
AgAb
后，所标的酶
(E )
因与
Ab
接触

紧密，空间位阻影响了酶的活性中心，酶活性受到 抑制。加入未标记抗原
(
标准或
样品

中的
Ag)
后，
Ag
即与
Ab
叫竞争结合反应系统中限量的
Ab
形成< br>AgAb
复合物，从而使反
应液中
AgAb*(
酶活性被抑制
)
的比例减少，具酶活性的游离
AgE
增多。最终测得的酶
活性随着反应体系 中未标记抗原
(Ag)
浓度升高而增强。

简述免疫印迹法的原理。

临床免疫学与检验重要知识点汇总

免疫印迹法由
SDS-PAGE
、蛋白质转印和酶免疫测定三项技术结合而成。抗原等蛋白
样品经
SDS
处理后带负电 荷，
SDS-PAGE
时从阴极向阳极泳动，分子量小者，泳动速
度快；将凝胶中已经 分离的蛋白质条带在电场作用下转移至硝酸纤维素膜上；将印
有蛋白质条带的硝酸纤维素膜依次与特异性 抗体和酶标第二抗体作用，加入能形成
不溶性显色物的酶反应底物，使区带染色；根据电泳时加入的分子 量标准，可确定
各组分的分子量。

何谓金免疫测定技术
?
简述其技术类型及原理。

DA
金免 疫测定技术是指用胶体金颗粒作为标记物进行抗原抗体反应的一类免疫学
测定技术，其主要技术类型有斑 点金免疫渗滤试验和斑点金免疫层析试验。
1)
斑点
金免疫渗滤试验：在以硝酸纤维素 膜为载体并包被了抗原或抗体的渗滤装置中，依
次滴加标本、免疫金及洗涤液，因微孔滤膜贴置于吸水材 料上，故溶液流经渗滤装
置时与膜上的抗原或抗体快速结合并起到浓缩作用，达到快速检测目的，阳性反 应
在膜上呈现红色斑点。
2)
斑点金免疫层析试验：是将胶体金标记技术和蛋白质层析
技术相合的以硝酸纤维素膜为载体的固相膜免疫分析技术，滴加在膜一端的标本溶
液受载体膜的 毛细管作用向另一端移动，犹如层析一般，在移动过程中被分析物与
固定于载体膜上某一区域的抗体或抗 原结合而被固相化，无关物则越过该区域而被
分离，然后通过胶体金的呈色条带来判读实验结果。

免疫溶血试验的原理和用途。

DA
原理是补体能使已被抗体致敏了的红 细胞发生溶血。免疫溶血试验所参与的成分
有补体，抗原
(SRBC)
及抗体
(
溶血素
)
，这三种成分中如有两种是已知的就可测知第
三个成分，
稀释该成分可测定其效价或含量。
如溶血素的滴定，
溶血空斑试验，
CH50
试验，补体结合试验，抗补体试验等。

如何进行补体单个成分的测定
?
DA
补体单个成分可测其溶血活性或含量。测定溶血活性应先制备缺乏该补体单个
成分的“补体 试剂

。而后利用免疫溶血试验的原理，将致敏红细胞与“补体试剂”
混合，再加入待测 血清，孵育后，溶血程度与待测血清中的该补体成分的溶血功能
有关。测定含量可用已知抗体以单向琼脂 扩散等方法进行。

血清免疫球蛋白测定方法有那些？

答：单向免疫扩散法 ：原理，优点：简单，条件要求低，但抗体需要高效价高特异
性，灵敏度：
mg/ml 免疫比浊法
:
原理，优点：检测结果准确，精密度高，耗时短，
灵敏度高
ug/ml
免疫球蛋白
IgG
、
IgA
、
IgM
测定有何意义？

答：
IgG
、
IgA
、
IgM< br>均升高则慢性疾病，
IgG
升高则多为细菌感染导致，新生儿血
清
IgM
升高则常为
< br>宫内感染。
单一
Ig
显著升高则多为免疫增殖病：
多发性骨髓瘤，重链病、恶性淋巴瘤。
Ig
降低则体液免疫缺陷或联合免疫缺陷。

某患者临床疑为细胞免疫功能缺陷，应做哪些检查以协助诊断？

答：从以下几个方面检测
1)
皮肤试验

，显示有迟发超敏反应能力 ，表示受试验者
细胞免疫功能完善
2)T
细胞及其亚群检测，常采用荧光抗体检测T
细胞表面标志分
临床免疫学与检验重要知识点汇总

子
CD3
，
CD4
等

3)T
细胞功能检 测，利用
PHA
刺激淋巴细胞增殖，转化来判断
T
细胞的功能

简述原发性吞噬细胞缺陷病的发病机制主要包括哪几种？

主要包括：①吞噬细胞趋化 和（或）粘附功能障碍。②吞噬和杀菌功能障碍。③单
核吞噬细胞的特殊异常，如
IgG Fc
受体缺陷。

简述
AIDS
的主要免疫学特征？
①免疫系统的
CD4T
淋巴细胞受
HIV
感染，
使
CD 4T
细胞受损而减少。
②单核
-
巨噬细胞、
滤泡树突状细胞和朗格汉 斯细胞亦可受
HIV
感染而受损。③进行性细胞免疫缺陷，
继而体液免疫缺陷。④< br>B
淋巴细胞可克隆激活伴免疫球蛋白增多。

简述体液免疫缺陷的检测方法？

有①血清
Ig
的测定，常用免疫扩散法和免疫比浊法。②分泌型
IgA
的测定，用单
向免疫扩散或
ELISA
等。③同种血细胞凝集素测定。④特 异性抗体产生能力测定，
疫苗接种后抗体产生的测定。⑤抗
IgA
抗体的测定，测自身 抗体。⑥
SmIg
测定，检
测
B
细胞数量和其成熟程
简述细 胞免疫缺陷的检测方法？

有①迟发性皮肤过敏反应试验，常为初筛试验。②
T
细胞及其亚群的检测，为主要
的试验测定
CD3
、
CD4
、
CD8
分化抗原进行分类鉴定。
③
E
玫瑰花结试验，
现常用
CD2
测定所代替。④淋巴细胞增殖反应试验，为体 外免疫功能试验，方法有形态法和同
位素法。⑤
T
细胞分泌产物功能测定，测定激活的
T
细胞和单个核细胞分泌的细胞因
子。

简述
IDD
的共同临床特点？

.
①对病原体的易感性强、 常发生反复感染、严重感染，难以治愈。
T
细胞缺陷易发
生病毒真菌和寄生虫感染。余 缺陷病易发生细菌感染，尤以化脓感染为主。②易发
生恶性肿瘤和并发自身免疫病。
③临床表现 和病理损伤有明显的多样性，
症状各异，
复杂多样，主要是累及多系统和多器官所致。

简述
IDD
的常见发病原因？
①遗传基因异常，常表现为
X
连锁隐性遗传和常染色体
隐性遗传，显性遗传亦有，少见。②中枢免疫器官发育障碍，由遗传或其他原 因所
致。③免疫细胞内在酶的缺陷，如
ADA
、
PNP
、
G -6-PD
缺乏所致。④免疫细胞间调
控机制异常，辅助不足或抑制过剩均可导致免疫缺陷。

简述原发性
B
细胞缺陷病的主要免疫学和临床特征？

.
本组疾病有三种主要免疫学和临床特征：
①全部
Ig
缺失或极度降低，
如
Bruton
综
合征。
②部分
Ig
缺失，
如选择性
Ig
缺陷。
③
Ig
量正常，
但在抗原刺激后无免疫应答，
功能缺陷。

叙述
AIDS
三大标志的主要免疫学检测？

AIDS
检 测主要是病毒标志、免疫标志和相关标志三大类。病毒标志主要是直接分
离培养检测病毒或检出
HIV
组分，
P24
、
gp120
和
gp160 的免疫印迹检测；免疫标
志主要是检测
HIV
的抗原或抗体及
T
细胞，
HIV
抗体用
ELISA
测定为初筛试验，确认试
验用免疫印 迹法，亦可用
PCR
法。我国判定标准为：①
HIV
抗体阳性：至少有两条膜
（
gp41/gp120/gp160
）或至少有一条膜带与
P24
带同时测定；②
HIV
抗体阴性：无