波尔山羊人工授精的技术程序

2021年1月22日发(作者：许冠杰)
山东永丰牧业

波尔山羊人工授精的技术程序

1
．采精

(1)
采精前准备

(I)< br>采精室
(
场
)
的准备。
采精室地面用
0
．< br>1
％的新洁尔灭溶液或
3
～
5
％煤酚皂
(
来 苏儿
)
或石炭酸溶液喷洒消毒，
夜间打开紫外线灯消毒，
山东永丰牧业工作服 可在夜间挂在采精室
进行紫外
线消霉。


(Ⅱ)台羊或采精 台的准备。采精前，将活台羊牵入采精架加以保定，然后彻底清洗
其后躯，特别是尾根、外阴、肛门等部 分。外阴部用
2
％来苏儿水消毒，并用干净抹布
擦干。如用假
母羊
做 台羊，须先经过训练，即先用真母羊为台羊，采精数次，再改用假
母羊为台羊。


(Ⅲ)公羊性准备。
种公羊采精前性准备的充分与否，
直接影响着精液的数量和质量。
因此，在临采精前，均须以不同诱情方法使公羊有充分的性欲和性兴奋。一般采取让公
羊在活台 羊附近停留片刻，
进行几次假爬跨或观看其他公羊爬跨射精等方法，可增加性
刺激强度，表现出 较强烈的性行为。


利用假台羊采精，要事先对种公羊进行调教，使其建立条 件反射。调教的方法：在
假台羊的后躯涂抹发情母羊的阴道黏液和尿液，
公羊
则会受到 刺激而引起性兴奋并爬跨
假台羊，经过几次采精后即可调教成功；在假台羊旁边牵一发情母羊，诱使公羊 进行爬
跨，但不让其交配而把其拉下，反复多次，待公羊的性冲动达高峰时，迅速牵走母羊，
令 其爬跨假台羊采精；
将待调教的
公羊
拴系在假台羊附近，让其目睹另一头已调教好的< br>公羊
爬跨假台羊，然后再诱其爬跨。在公羊调教过程中，要反复进行训练，耐心诱导，
切 勿施用强迫、恐吓、抽打等不良刺激，以防止性抑制而给调教造成困难。获得第一次
爬跨采精成功后，还 要经过几次反复，
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以便使公羊建立巩固的条件反射。
此外，还要注意人畜 安全和公羊生殖器官的清洁卫生。

(2)
采精方法
(
假阴道
)
(I)
假阴道的准备 。假阴道的安装和消毒。首先检查所用的内胎有无损坏和沙眼。
安装时先将内胎装入外壳，使光面朝内， 并要求两头等长，然后将内胎一端翻套在外壳
上，依

同法套好另一端，此时勿使内胎 有扭转情况，并使松紧适度，然后在两端分别
套上橡皮圈固定之。
用长柄镊子夹上
70
％酒精棉球消毒内胎，
从内向外旋转，
勿留空间，
要求彻底，待酒精挥发后， 用生理盐水棉球多次擦拭。
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将消毒好的集精杯
用生理盐水棉球多次擦之， 然后安装在假阴道的一端，如图
4
—
2
所示。

2

7 1

图
4-2
羊采精用假阴道

1
．外壳
2
． 内胎
3
．固定胶圈
4
．集精杯
5
．气嘴
6
。水管
7
．温水


(Ⅱ)灌注温水。
左手握住假阴 道的中部，
右手用量杯或吸水球将温水
(50
～
55'U)
从
灌水孔灌人，水量为外壳与内胎间容量的
l
／
2
～
1
／< br>3
为宜。实践中常竖立假阴道，水
达灌水孔即可。最后装上带活塞的气嘴，并将活塞关好 。


(Ⅲ)涂抹凡士林。
用消毒玻璃棒取少许经消毒的凡士林涂抹一 薄层，涂抹深度以假
阴道长度的前
l
／
3
～
1
／< br>'2
处为宜。


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(Ⅳ)检温、吹气加压。用消毒的温度计插入假阴道内检查温度，以采精时达
39
～
4 2*(2
为宜。若温度过高或过低，
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可用冷水或热水加以调节。当温度适 宜
时向夹层注入空气，使涂凡士林一端的内胎壁遇合，口部呈三角形裂隙为宜。最后用纱
布盖好 入口，准备采精。

(V)
采精技术。采精人员右手握住假阴道后端，固定好 集精杯
(
瓶
)
，并将气嘴活塞
朝下，蹲在台羊右后侧，让假阴道靠近 母羊的臀部；在公羊跨上母羊背侧的同时，将假
阴道与地面保持
35
～
40< br>。
角，
迅速将公羊的阴茎引入假阴道内，
切勿用手抓碰摩擦阴茎；
若假 阴道内温度、
压力、
滑度适宜，
当公羊后躯急速用力向前一冲时，
即已射精；
此时，
顺公羊动作向后移下假阴道，并迅速将假阴道竖起，集精杯一端向下；然后打开活塞上< br>的气嘴，放出空气，取下集精杯，用盖盖好，送精液处理

室待检。


(Ⅵ)采精频率。
合理安排公羊采精频率是维持
公羊
健康和最大限度采集精液 的重要
条件。公羊采精频率要根据精子产生数量、储存量、每次射精量、精子活率、精子形态
正 常率和饲养管理水平等因素来决定。随意增加采精次数，不仅会降低精液品质，而且
会造成公羊生殖机能 降低和体质衰弱等不良后果。
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在生产上，公绵羊和公
山羊射精量少而附睾 储存量大。由于配种季节短，每天可采精多次，连续数周，不会影
响精液质量。
山羊
的 适宜采精频率见表
4
—
3
。
对于常年采精公羊，
采精频率通 常为每周
2 d
采精，每天采精
2
次。生产上所采精液样品中如出现未成熟精 子、精子尾部近头端
有未脱落原生质滴、种公羊性欲下降等，都说明公羊采精次数过多，这时应立即减少 或
停止采精。

表
4
—
3
正常成年公羊的采精频率及其精液特性


2
．精液品质检查
(
评定
)
(1)
精液的外观检查

(I)
精液量。
射精量是指公羊
1
次采精所射出精液的容积，
可以用带有刻度的集精瓶
(
管
)直接测出，绵、山羊公羊射精量如表
5
—
3
所列。当公羊的射精量太多或 太少时，都必
须查明原因。若射精量太多，可能是由于副性腺分泌物过多或其他异物
(
尿、假阴道漏
水
)
混入；
如过少，
可能是由于采精技术不当、
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采精过频或生殖器官机能衰
退所致。凡是混入尿、水及其他不良异物的精液，均 不能使用。


(Ⅱ)色泽与气味。羊正常精液呈乳白色或浅乳黄色，其颜色因 精子浓度高低而异。
乳白程度越重，表示精子浓度越高。若精液颜色异常，表明公羊生殖器官有疾病。如 精
液呈淡绿色表示混有脓汁；呈淡红色是混有血液；呈黄色是混入尿液等。诸如此类色泽
的精液 ，应该弃去或停止采精。


精液一般无味。有的带有动物本身的固有气味，如 羊精液略有膻味。任何精液若有
异昧如尿味、腐败臭味时应停止使用。

(Ⅲ)云雾状。羊正常精液因精子密度大而呈混浊不透明状，肉眼观察时，由于精子
运动翻腾滚滚如 云雾状。精液混浊度越大，云雾状越显著，乳白色越浓，表明精子密度
和活率也越高。


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(2)
显微镜检查。

(I)
精子活率检查。精子活率是指精液中呈前进运动精子所占的百分率。由于只有具
有前进运 动的精子才可能具有正常的生存能力和受精能力，
所以精子活率与母羊的受胎
率有密切关系，< br>它是目前评定精液品质优劣的重要指标之一。
一般鲜精子活率在
60
％以
下不可用于配种。

检查精子活率的常用方法是目测评定法。
通常采用光学显微镜放
大
200 4 00
倍，对精液样品检查标本进行目测评定。
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可在普通的玻璃片上
滴一滴精液，然后用盖玻片均匀盖着整个液面，做成压片，在显微镜下目测评定标本。
也可采用精液检 查板法。
精液检查板是由日本西川义正等人设计，可使被检查的精液样
品厚度均匀地保持在50
tan
，
因此观察时不易产生误差。
使用时将精液滴在检查板中央 ，
过量的精液将会自动流向四周，再盖上盖玻片，即制成检查标本。羊的原精液密度大，
可用生 理盐水、
5
％的葡萄糖溶液或其他等渗稀释液稀释后再进行制片。


精子的活动受室内温度影响极大。温度高了，活动加快；温度低了，则活动减弱。
因此，
检查时室温应保持在
18
～30℃之间，
显微镜周围温度
37
～< br>38
的保温箱内进行。


精子运动方式可分为直线前进运动、 旋转运动、摆动运动
3
种。精子的直线前进运
动最有利于受精。评定精子活率时就是以 精液中精子直线前进运动的百分比来衡量。


(Ⅱ)精子密度检查。
精子密度通常是指每毫升精液中所含精子数。
根据精子密度可
以计算出每次射精量中的总精子数 ，再结合精子活率和每次输精量中应含有效精子数，
即可确定精液合理的稀释倍数和可配
母羊< br>的只数。
因此，
精子的密度也是评定精液品质
优劣的常规检查中的主要项目。< br>但一般只需在采精后对新鲜的原精液做一次性密度检查
即可。


目前测定精子密度的主要方法是目测法、
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血细胞计计数法和光电比色
测 定法。
目测法
(
又称估测法
)
——在检查精子活力时同时进行，在显 微镜下可根据精子
稠密程度，
分为密
(25
亿个／
mL
以上
)
、
中
(20
亿～
25
亿个／
mL)、
稀
(20
亿个／
mL
以下
)3
级，如图4
，
3
所示。“密”指在视野中精子之间距离小于
1
个精子的长 度；“中”指
在视野中精子之间距离大约等于
l
个精子的长度；
“稀”指在视 野中精子之间距离大于
1
个精子的长度。


血细胞计计数法 ——采用该法计算精子与计算血液中红细胞、
白细胞的操作方法相
类似。这是一种比较准确地测 定精子密度的方法，且设备比较简单，但操作步骤较多，
故一般





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图
4-3
羊精子密度示意图

也只对公羊精液品质做定期检查时采用 。
其操作方法如下：
用红血细胞吸管吸至
“
0
．
5”，然后再吸人
3
％氯化钠溶液至
“101”刻度，
稀释
200倍。
以拇指及食指分别按住吸管的
两端，充分摇动使精液和
3
％氯化钠溶 液混合均匀，然后弃去吸管前端数滴，将吸管尖
端放在计算板与盖玻板之间的空隙边缘，使吸管中的精液 流入计算室，充满其中。在
400
～
600
倍显微镜下观察，
以计数 器数出
5
个大方格内精子数。
计算时以精子头部为准，
在方格四边线条上的精 子，只计算上边和左边的，避免重复。选择的
5
个大方格，应位
于
l
条直角线上或四角各取
l
个，再加上中央
1
个。
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求得
5
个大方格的精
子总数后，乘上
1 000
万或加
7
个零，即可得每毫升精液所含精子数。


光电比色计精子密度测定法——美国
Sa
Lisbury
等
194 3
年以后研究应用此法。其
原理是精子密度越高，其精液越浓，以至透光性越低，从而使用光电 比色计通过反射光
或透射光能准确地测定精液样品中的精子密度。目前世界各国已较普遍应用于牛、羊精
子密度的测定。其优点是准确、快速、使用精液量少，仪器价格一般，经久耐用，操作
简便，一般技术人员均可掌握。其方法是事先将原精液稀释成不同倍数，并用血细胞计
计算其精子密度，
从而制成已知系列各级精子密度的标准管，然后使用光电比色计测定
其透光度，根据透光度求出 每相差
1
％透光度的级差精子数，编制成精子密度查数表备

用。一般检测精 液样品时，只需将原精液按
1
：
80
～
1
：
100
的比例稀释后，先用光电比
色计测定其透光值，
然后根据透光值查对精子密度查数表， 即可从中找出其相对应的精
子密度值。


(Ⅲ)精子形态检查。精子的形态正常与否与受胎率有着密切的关系。如果精液中形
态异常的精子所占的比例过大，不仅影 响受胎率，甚至可能造成遗传障碍，所以有必要
进行精子形态的检查。特别是冷冻精液，对精子的形态检 查更有必要。精子形态检查有
畸形率和顶体异常率检查
2
种。


①畸形率。一般品质优良的精液，
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其精子畸形率不超过
14％，普通的
也不能超过
20
％，超过
20
％以上者，则会影响受 精率，不宜用做输精。


畸形精子一般分四类：头部畸形，如头部巨大、瘦小 、细长、圆形、轮廓不明显、
皱褶、缺损、双头等；颈部畸形，如颈部膨大、纤细、屈折、不全，带有原 生质滴、不
鲜明、双颈等；体部畸形，如体部膨大、纤细、不全，带有原生质滴、弯曲、屈折、双
体等；尾部畸形，如尾部弯曲、屈折、回旋、短小、长大、缺损、带有原生质滴、双尾
等。正常精子及 各类型畸形精子如图
4
—
4
所示。一般头、颈部畸形较少，体、尾部畸
形较多。


精液中有大量畸形精子出现时，证明：精子的生成过程中受到破 坏；副性腺及尿道
分泌物有病理变化；
由精液射出起至检查时或保存过程中，因没有遵守技术操 作规程使
精子受到外界不良影响。


畸形精子检查方法：
先 将精液用生理盐水或稀释液做适当稀释后，
做涂片。
干燥后，
浸入
96
％酒精或
5
％福尔马林中固定
2
～
5
min
， 用蒸馏水冲洗。
阴干后可用伊红
(
美蓝、
龙胆紫、红墨水也可以
)< br>染色
2
～
5rain
用蒸馏水冲洗即可放在


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图
4
—
4
畸形精子类型图

1
．正常精子
2
．脱落的原生质滴
3
．各类畸形精子
4
．精子头尾分离< br> 5
，
6
．带原生质滴精
子
7
．尾弯曲精子
8
．脱落顶体
600 1 500
倍显微镜下检查，总数不少于
300
个。畸形精子

率的计算 为畸形精子占计算总精子数的百分比。
在日常精液检查中，
不需要每天检查，
只有在必要时才进行。


②精子顶体异常率。
同畸形率检查一样制成 抹片，
待自然干燥后再用福尔马林磷酸固定
液固定
15 min
，水冲洗后用 姬姆萨缓冲液染色
l
．
5
～
2
．
0 h
，再用水冲洗干燥后，用树脂
封装，置于
l
000
倍以上普通显 微镜下随机观察
500
个精子
(
最少不得少于
200
个)
，即可计
算出顶体异常率。
山东永丰牧业顶体异常一般表现有膨胀、
缺 损、
部分脱落和全部脱落等情
况
(
图
4
—
5)。


福尔马林磷酸盐固定液的配制：
先配制
0
．
89
％氯化钠
(Na
—
a)
溶液。
取
2
．
25
9
Na2Ht
】
O4·
2H20
和
0
．55
9
NattzP04‘2H20
放入容量瓶中加入
0
：
8 9
％氯化钠
(NaCl)
溶液约
30mL
。
在



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图
4
—
5
精子顶体异常图

1
．
正常顶体
2
．
顶体膨胀
3
．
顶体部分脱落
4
．
顶体全部脱落
3012
左右待磷酸盐全部溶
解，加入经碳酸镁
( MgC03)
饱和的甲醛
8 mL
。再用
0
．
89
％氯化钠
(Naa)
溶液配制到
100
n1L
，静止
24 h
后即可使用。

姬姆萨原液的配制：取姬姆萨染料
1 9
，甘油
66 mL
，
甲醛
66 mL
；先将姬姆萨粉剂溶 于少量甘油中，在研钵内研磨，直至无颗粒为止；再将
全部甘油倒人，置于
56℃恒温箱中2 h
；然后加入甲醛，密封保存于棕色瓶中。

3
．精液的稀释

(1)
精液稀释的目的。绵、山
羊的精液
密度大，一般
1 mL

原精液中约有
25
亿个精子，但每次配种，只要输入
5 000
万～
8 000
万个精子，
就可使母羊受胎。精液稀释以后不仅可以扩 大精液量，增加可配母羊只数，更重要的是
稀释液可以中和副性腺的分泌物，
缓解对精子的损害 作用，
同时供给精子所需要的营养，
为精子生存创造一个良好的环境，
从而达到延长精 子存活时间，
便于精液的保存和运输。

(2)
稀释液的主要成分和作用。

(I)
稀释剂。
稀释剂 主要用于扩大精液容量。
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各种营养物质和保护物质
的等渗溶液都具有稀释 精液、扩大容量的作用，只不过其作用有主次之分而已。一般用
于扩大精液量的物质多采用等渗氯化钠、 葡萄糖、果糖、蔗糖及奶类等。