得了肝病怎么办-
体外受精中
1PN
及
0PN(2PB)
胚胎发育替能及影响因素分析
张亚摘
,
殷宝莉
,
张翠蓮·
,
韦多
,
郝好英
,
宋小兵
,
谢娟珂
(
郑 州大学人民医院生殖医学研究所
/
河商省人民医院生殖医学研究所
,
郑州
450003)
【摘要】
目的
初步探讨体外受精一胚胎移植周期中
lPN
及
OPN(2PB)< br>胚胎形成的影响因素和发育
潜能
,
以探寻提高卵母细胞利用率的可行性方法,
方法
对
787
个
IVF
周期和
298
个
ICSI
周期患者授精后
l8-20 h
观察到的
lPN
及
0PN (2PB)
胚胎继续进行体 外培养
,
观察其原核及卵裂情况
,
序贯培养至
D6 ,
观察囊胚形成情况
;
并回顾
性分析这些患者的临床资料
,研究
lPN
及
OPN(2PB)
胚胎形成的影响因素。
结果
(l)lPN
及
OPN(2PB)
胚胎可卵裂并形成囊胚
,
但卵裂率
(
分别 为
90.l6%
和
%)
和囊胚
形成率
(l7.09%
和
30.03%)
均显著低子
2PN
胚胎
(
分别为
98.40%
和
45.7l%)(P
均
<0. 05);
(2) lPN
胚胎的形成随患者的年龄、
体外受精方式及获卵数的不同而不同
,
而
0PN(2PB)
胚胎的形成只随患者年龄不同而异
(P< 0.05);
(3)
经
Logistic
回归分析发现
,lPN
和
0PN(2P B)
胚胎的形成与患者选择的受精方式、
MII
卵数、
2PN
胚胎数 相关
(P<
0.05),
而与患者的年龄、体重指数、基础内分泌水平及获卵数无关
(P< 0.05)
。
结论
患者的体外受精方式、
获得的
MII
卵数以及受精后的
2PN
胚胎数可能影响到
1PN
和
0PN(2PB)
胚胎的 形成
;lPN
及
0PN(2PB)
胚胎有一定发育潜能
,
但 较
2PN
胚胎低
;
在行補助生殖技
术助孕过程中
,
应综合考虑各种影响因素
,
以降低
lPN
和
0PN(2P B)
胚胎的发生率
,
提高卵母细
胞的临床利用率。
【关键词】
体外受精
;
单原核
(1PN)
胚胎
;
胚囊
;
发育潜能
;
Logistic
回归
在人类体外受精一胚胎移植
(IVF-ET)
技术中
,
常于授精后
16~20
h
内通过光学显微镜对
胚胎
原
核
数
目
进
行
观
察
及评
分
,
正
常
受
精
的
判
断标
准
为
观
察
到
胚
胎
内
存在
明
确
的
2PN(pronucleus)
及
2PB (polar
body)
。然而
,
在胚胎培养过程中
,
常 有相对较多的异常受精情况
出现
,
其中
IPN
的发生率约为
2%~5%
。在临床治疗过程中
, 1PN
及
0PN (2PB)
胚胎通常被视为
异常受精胚胎
,
与多原核胚胎及发育停滞的
2PN
胚胎一起作为废弃胚胎被销毁。事实上
,
部分
1PN
及
0PN(2PB)
胚 胎是正常受精的胚胎
,
只是因为错过了最住的观察时机
,
被误认为是异常受精
,
如果将这类胚胎全部销毁
,
会造成胚胎资源的浪费。
本研究回顾性分析
787
个< br>IVF
周期和
298
个
ICSI
周期患者的
1PN
及
0PN(2PB)
胚胎的继
续培养情况
,
探讨 这类
“异常受精”
胚胎的发育潜能
,
同时分析患者的
l1
告 床资料
,
研究
1PN
及
0PN(2PB)
胚胎形成的影响因素
,
为降低
1PN
及
0PN(2PB)
胚胎的发生率
,
提高卵母细胞利用率
提供指导。
资料与方法
一、临床资料
选择
2014
年
7
月
28
日至
2014
年
10
月
31
日就诊于河南省人民医院生殖中心的不孕症
夫妇的临床资料。
纳入标准
:
基础内分泌水平正 常
;
≤
3
个治疗周期
;HBV
及
HIV
阴性。
排除 标准
:
生殖泌尿系统急性感染或性传播疾病
;
严重的遗传、
躯体疾病 或精神疾患
;
吸毒
等不良嗜好
;
获卵数
< 1
个
;
短时受精联合早期补救
ICSI(Re- ICSI)
。
本研究共包括
787
个
IVF
周期和
298
个
ICSI
周期的不孕症夫妇的临床资料。
二、患者诊疗方法回顾
1.
促排卵方案及卵母细胞的采集与处理
:
接受
IVF- ET
治疗的不孕症患者采用本中心常规
方案进行控制性促排卵
,
当
≥
3
个卵泡直径达
18
mm
时
,
结合血清雌二醇
(E2
)
、孕酮
(P)
值
,
适时予以
HCG(
丽珠制药
)5000~10 000 U
肌肉注射
;36 h
后在阴道超声引导下
,
使用
18 G
取卵针
(Cook,
瑞典
)
来集卵冠丘复合体
( OCCC),
将其于加有
G-MOPS
缓冲液
( Vitrolife,瑞典
)
的培养皿中
洗涤两次后
,
转入含
G-IVF-P LUS
培养液
(Vitrolife,
瑞典
)
的培养皿中
,
置于
37
℃、
体积分数
6% C02
、
体积分数
5% 02
的饱和湿度培养箱中培养。
2.
精子处理
:
精液处理来用密度梯度离心法。处理后的精子沉淀经
1
m1
的
G-IVF-PLUS
培养液
Vitrolife,
瑞典
)
上游后
,
取上游液分析精子浓度。
3.
受精
:IVF
周期患者于取卵后约
3 h
后行体外授精
,
加精浓度为每卵
0 5~1
万条精子
;
精卵
共孵育约
,1 h
后机械剥离颗粒细 胞
,
转入含有
G,-PLUS
培养液
(Vitrolife,
瑞典
)
的培养皿中。
ICSI
周期患者于取卵后约
3 h
后将孵育后的卵母细胞经透明质酸酶(Vitrolife,
瑞典
)
消化后
机械剥离颗粒细胞
,将卵母细胞置于含有
G-IVF-PLUS
培养液
(Vitrolife,
瑞典
)
的培养皿中预培养
1 h
后
,
挑选形态相对正常的精子对成熟的卵母细胞行单精子注射
,
注射后的卵母细胞转入含
G1-PLUS
培养液
(Vitrolife,< br>瑞典
)
的培养皿中培养。
4.
胚胎观察及评分
:
授精后
18~20
h
于倒置显微镜下观察受精情况
,
记录原核数目
,
原核< br>和胚胎形态学的观察参照之前的研究。若观察时胚胎出现两个原核及两个极体
,
则为2PN
胚
胎
;
若只有一个原核
,
则为
1PN
胚胎
;
若观察不到原核但有两个极体
,
则为
0PN( 2PB)
胚胎。
2PN
胚胎于
D2
和
D3
在倒置显微 镜下评估卵裂期胚胎的形态
,
包括胚胎细胞数、
碎片比
例、细胞大小是否均匀 等情况
,
参照文献标准。可利用胚胎为细胞数多于
4
个且评分高于
2
分的胚胎
,
可继续培养至囊胚
;
根据患者的具体情况决定其
2PN
胚胎的去向
:
移植、
冷冻或是囊
胚培养。
进行囊胚培 养的
2PN
胚胎
,
于
D5
和
D6
对囊胚进行评估
,
囊胚分级的方法为
Gardner
囊胚分级法。
我中心可利用囊胚标准为
:3BB
及以上的囊胚
;优质囊胚标准为
:
评分为
4AA
、
4AB
、
4 BA
和
IBB
的囊胚
;
可利用囊胚及优质囊胚可进行移植 或冷冻保存
,
冷冻的囊胚择期复融后进
行移植。
临床上常规将
1PN
胚胎及
0PN(
2PB)
胚胎丢弃。本研究中所有的
1PN
及
0PN(2PB)
胚胎
均进行序贯培养
,
培养至
D6 ,
胚胎及囊胚的评分标准同上。
上述整个过程均取得患者的知情同意且获得医院伦理委员会的批准。
三、观察指标
2PN
胚胎形成率
=
(2PN
胚胎数
/
获卵数
)X
100%;2PN
胚胎卵裂率
= (
发生卵裂的
2PN
胚胎
数
/2PN
胚胎数
) x100% 2PN
囊胚形成率
= (2PN
胚胎形成的囊胚数
/
进行囊胚培养的
2PN
胚胎
数
)X 100%
。
相应的
1PN
及
0PN(2PB)
胚胎的形成率、卵裂率、囊胚形成率来用类似计算方式。
四、统计学处理
所有数据来用
SPSS17.0
软件进行统计学处理
,
数据结果以均数土标准差
(
?土
s)
或率
(%)
表示
,
组间两两比较采用
LSD-t
检验
,
率的比较来用< br>x2
检验
;P<0.05
为差异有统计学意义。
结
果
一、患者基本情况分析
787
例行
IVF
治疗的患者
,
年龄为
(31.94
土
5
63)
岁
,
患者的体重指数
(BMI)
为
(23.
26
土
3.
65)kg/m2;298
例行
I CSI
治疗的患者
,
年龄为
(32.11
土
6.86)岁
,
患者的
BMI
为
(23.02
土
7.52)kg/m2
。两组患者的基本资料和基础内分泌水平均无统计学差异
(P>0.0 5)(
表
1)
。
< br>IVF
治疗周期共
415
个周期进行了移植
,
共移植了
760
个
2PN
胚胎
,
临床妊娠
241
例
;ICSI
治疗周期有
164
个周期移植了
264
个
2P N
胚胎
,
临床妊娠
102
例。
二、< br>1PN
及
0PN(2PB)
胚胎形成及继续囊胚培养结局
370
个
IVF
周期的患者出现了
1PN
和
0PN(2PB)胚胎
,
形成
1PN
胚胎
305
枚
,
卵 裂
275
枚
,
形成囊胚
47
枚
; 0PN(2PB )
胚胎
412
枚
,
卵裂
363
枚
,
形成囊胚
109
枚
,
了
1PN
和
0PN(2PB)
胚胎
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