什么是试管婴儿第一代血凝实验实验报告

2021年1月21日发(作者：试管二代可以龙凤胎)

影响血液凝固的因素

（一）实验目的：通过本实验来了解血液凝固的基本 过程及了解影响血液凝固的一些因
素。

（二）实验对象：家兔

（三）实验步骤：（略）

（四）实验结果：

1
、观察纤 维蛋白原在凝血过程中的作用：实验中可见到静置杯内血液发生凝固。搅拌杯
内血液不凝固，但在毛刷上 见到红色的血凝块，经水冲洗后毛刷上缠绕有白色丝状物。

2
、观察影响血凝的一些理化因素：如下表
9-1
所示。

表
9-3
影响血凝的一些理化因素

实验条件

1.

加少许棉花

2.

用石蜡油均匀涂试管内壁

3.

放置
37
℃
水浴

4.

放置冰水水浴

5.

加肝素
10
个单位

6.

加草酸钾
2mg
（表
9-3
文字说明：略）

3
、观察内源性及外源性凝血过程：如下表
9-2
所示

表
9-2
内源性和外源性凝血过程的观察

试剂

1
、富血小板血浆

2
、少血小板血浆

3
、生理盐水

4
、羊肺悬液

5
、
0.025mol/l cacl2
血液凝固时间

（表
9-2
文字说明：略）

（五）讨论：

血液凝固是指血液由流动的液体状态变为不流动的冻胶状态血液凝固过 程大致分为三个
主要阶段：
①
凝血酶原激活物形成；
②
凝血酶原激活 成凝血酶，
③
纤维蛋白原转变为纤维蛋
白。在凝血酶原激活物的形成过程中分有两种不 同的途径：内源性凝血途径和外源性凝血途
径。内源性凝血途径是由凝血因子
?
启动的 ，参和血凝的全部凝血因子都在血浆内。凝血因子
?
可被各种带负电荷的物质等所激活，如血管 内膜暴露的胶原纤维、玻璃、陶器等。外源性凝血
途径是由存在于血管外组织中的凝血因子
ⅲ< br>所启动的，其余参和的凝血因子也在血管内。凝
血因子
ⅲ
在脑、肺、胎盘组织含 量很丰富。

不管是内源性凝血途径或外源性凝血途径，他们最后的是使血纤维蛋白的形成而使 血液
发生凝固。在观察纤维蛋白原在凝血过程中作用的实验中，由于参和凝血的全部凝血因子都在
血浆中，因此其凝血过程是属于内源性凝血。由于玻璃和毛刷表面都带有负电荷，后者可激活
凝血因子
?
，启动内源性凝血过程。凝血到最后阶段时，在凝血酶的作用下，把纤维蛋白原水
解 成血纤维蛋白；形成的纤维蛋白不断地交叉成网状结构，把血液中的所有血细胞网凝血时间

50’’ 8’15’’ 2’15’’ 6’45’’
不凝

不凝

试管
1 0.2 ml 0.2 ml 0.2 ml
2’15’’
试管
2 0.2 ml 0.2 ml 0.2 ml 3’45’’
试管
3 0.2 ml 0.2 ml 0.2
ml 45’’

罗于其中，从而使血液发生凝固。静置杯中的血液，由于发生了上述的血液凝固过程 ，
所形成的纤维蛋白没有被破坏，所以杯中血液凝固。而搅拌过的杯内血液，虽也发生血液凝固
过程，但所形成的纤维蛋白却不断缠绕到毛刷上，当杯内血液的纤维蛋白原全部水解掉后，形
成的纤维蛋 白也全部缠绕在毛刷上，这时血纤维只能网罗毛刷附近的一些血细胞，在毛刷上见

有血凝块。 经水漂洗后，血细胞被冲走，毛刷上剩下的是白色细丝状的纤维蛋白。搅拌后的杯
内血液因纤维蛋白原全 部被耗尽，无法再形成纤维蛋白，则搅拌后的杯内血液不发生凝固。由
此可见，血液凝固的过程实际上是 纤维蛋白形成的过程，任何一个步骤被破坏，就不会引起血
液凝固。

在血液凝固的两 个过程中，它们是有所不同的。两者的主要区别如下表
9-3
所示：

表
9-3
内源性和外源性凝血的主要区别

区别点

启动的凝血因子

ｘ因子的激活

参和凝血的凝血因子

凝血过程

凝血时间

内源性凝血
?
需要
?
因子复合物

数量多，且全部在血管中

复杂

慢、约数
分钟

外源性凝血

ⅲ

需要
ⅲ
因子复合物

数量少，
ⅲ
因子在血管外，其余在血管内

简单

快、约几十秒钟

由上可知，外源性凝血比内源性凝血所需的时间短。在实验结果表< br>9-2
中，第
1
、
2
试
管都是由血小板、生理盐水和
cacl2
溶液组成的，参和凝血的凝血因子都在血浆中，故其凝
血过程为内源性凝血 。而第
3
试管是由血小板、羊肺悬液和
cacl2
溶液组成。在第
3
试管中
含有羊肺悬液，其内含有丰富的第
ⅲ
凝血因子。显然第
3试管发生的血液凝固过程主要是外
源性凝血途径。因此第
3
试管凝血时间最快。在 第
1
、
2
试管中虽然所含成分相同，但血小板
含量不一样，第
1
试管血小板含量高于第
2
试管。血小板对血液凝固具有促进作用，表现
为 ：
①
血小板的质膜上吸附有许多凝血因子，如纤维蛋白原、因子
v
、因子xi
等。
②
其
α
颗粒中也含有许多凝血因子以及血小板因子。< br>③
血小板因子为血液凝固过程提供磷脂表面，
其激活后能加速血凝；同时其能对一些血凝 因子具有保护作用，免受抗凝血酶
ⅲ
和肝素的破
坏。可见，第
1
试管 内因含有丰富的血小板，故其凝血时间比第
2
试管快。

血液凝固受许多因素的影响，如凝血因子的质和量、各种理化因素等。

棉花给血液凝 固提供一个粗糙表面，容易使血小板发生粘着、聚集，然后发生解体，释
放许多凝血因子和血小板因子； 另外，棉花含许多带负电荷植物纤维，也能激活凝血因子
?
，
启动内源性凝血途径。因 此放有棉花的试管内血液凝固加快。试管内壁涂上一层石蜡油时，由
于石蜡油表面光滑，不易引起血小板 粘着，即不易使血小板发挥促进凝血的作用。另外石蜡油
为绝缘体，其把试管表面所带的负电荷覆盖，不 利于凝血因子
?
的激活，因此血液凝固变慢。

血液凝固实际上是一系列蛋白 酶的水解过程。参和血液凝固的凝血因子大多数是蛋白质
酶原，其水解后变成有活性的蛋白质酶，如因子
ii
、因子
xi
、因子
xii
等（因子
vii是有
活性的）。这些蛋白质酶具有酶随温度升高催化活性加强的特性，也具有蛋白质受热变性的特< br>点。当温度低时，蛋白质酶的活性下降，而当温度升高到
42
～
45
℃
以上时，由于蛋白质发生
变性，蛋白质的空间结构被破坏，从而使蛋白质功能受损，蛋白质酶的 活性下降或失活。因
此，把血液放入
37
℃
水浴时血液凝固的时间就比放入冰 冻水浴时所需时间短。

体内重要的抗凝物质是抗凝血酶
ⅲ
和肝素。抗凝血酶
ⅲ
和凝血酶等多种凝血因子的活性
中心
------
丝氨酸残基结合 ，使这些凝血因子的活性受到抑制或失活，从而达到抗凝作用。
肝素则主要通过和血浆中的一些抗凝蛋白 ，如抗凝血酶
ⅲ
结合，加强后者的抗凝作用。此
外，肝素还能使血管内壁细胞释放凝血 抑制物和纤溶酶原激活物，增强纤溶作用。因此在试管
内

放入肝素时血液不会发生凝固。

血凝过程中，
ca
是重要的凝血因 子，其参和了血液凝固的许多环节，当血液中没有
ca2+
时血液就不会发生凝固。在试管内放 有草酸钾时，由于草酸钾和血液中的
ca2+
发生化学

2+
反应， 生成草酸钙沉淀，使血液中没有
ca
，故血液不会发生凝固。

（六）结论：


通过本实验可知：
①
血液凝固过程可分为 三个互相联系的主要阶段，任何一个阶段被破
坏，凝血过程就终止，而血液凝固的过程实际上是纤维蛋白 形成的过程。
②
根据凝血酶原激
活物形成的途径不同，可把血液凝固分为内源性和外源 性两条凝血途径，内源性凝血途径所消
耗的时间比外源性凝血途径长。
③
血小板在血液 凝固过程中具有发挥促进作用。
④
血液凝固
除受凝血因子的质和量影响外，还受接触面 、温度等理化因素的影响。血液接触面粗糙、适当
加温能加速血凝，而血中加肝素等抗凝剂、以及除去血 中游离钙离子等可延缓血液凝固。
2+
篇二：血凝血凝抑制试验总结

1
、

如果是马上要做实验，先把实验所需的抗原、标准阳性血清、阴性血清、待检血清
取出

回温，如果待检血清已冷藏，可取出放入
37
℃
恒温培养箱中回温，待血清析 出后取出
（时间大约看具体情况而定）。

2
、

试验准备阶段：

a
准备好清洗干净的血清离心管（要有刻度装血液）。

b
采血：注 射器内先加入一半体积的阿氏液（防止血液凝集，当所需红细胞较多时，加
入注射器量程一半的阿氏液， 当所需红细胞较少时，加入
1.5 ml
～
2 ml
的阿氏液）。

c 1%
红细胞悬液的制备

采集至少
3
只
spf
（无特定病原体）公鸡或无禽流感和新城疫等抗体的健康公鸡的血液
和等体积的阿氏液混合，用
ph 7.2
、
0.01 mol/l pbs
液洗涤
3
次 ，每次去掉上层的清液
后加入少量
pbs
用注射器反复抽吸使之混匀，再加至所要刻度 ，放入离心。每次均以
1000
r/min
离心
10 min
，洗 涤后用
pbs
配成体积分数为
1%
的红细胞悬液，
4
℃保存备用（实际
pbs
液用
1%
的生理盐水代替）。

d
所需
1%
红细胞悬液的体积

≥ 4 hau+1 ml
（本例中为
30 ml+1 ml=31 ml
），否
则配置的
1%
红细胞悬液不够用（理论计算为
30.1 ml
，取
31 ml
以防万一）。

e
阿氏液（
alsevers
）制备

葡萄糖
2.05 g
柠檬酸钠
0.80 g
柠檬酸
0.055g
氯化钠
0.42 g
加蒸馏水至
100 ml
，散热溶解后调
ph
值至
6.1, 69 kpa
高压灭菌
15 min
，
4
℃
保存备用。

3
、

血凝试验

目的：检测试验所用的标准抗原的血凝滴度，如检测结果血凝滴度为
210 = 1024，表
示标准抗原稀释
1024
倍仍能和红细胞发生凝集反应。

注意：

一瓶新的未使用的抗原（禽流感或新城疫为粉状），需要加入（用注射器）< br>2ml
的稀释
液（
0.9%
生理盐水，一般瓶身上有标注加入的体积< br>2ml
）

a
反应板要同时做三排（每排
12
孔）， 原因：根据三排的多数结果来确定血凝滴度。例
如：

10999
三个结果为 ：
2
、
2
、
2
，则本次试验标准抗原血凝滴度为
2
。

b
加入
1%
的红细胞悬液后放到微量震荡器上震荡混合
1min
，室温
20
℃
～
25
℃
下静置< br>40 min
，放
4
℃
静置
60 min
。当
pbs
对照孔红细胞呈明显纽扣状沉到孔底时判定结果。

4
、
4 hau
抗原

例如：标准抗原血凝滴度为
210 = 1024
，则
4 hau
抗原
=
（
1
：
210
）
/4 = 1
：
256
，稀释时，将
1 ml
的抗原加入到
255 ml
的
pbs
中即为
4 hau
。

5
、

计算配置
4 hau
所需稀释液体积
v
和标准抗原体积
x
假设：待检血清
100
份

每排
12
个孔（实际 只需要
11
孔，但多计算一些，以防不
够）


每孔加入
25 ul 4 hau
抗原体积
= 25 ul×12×100 = 30000 ul = 30 ml
设标准抗原体积为
x
则有：
1
：
256 = x
：
30000
标准抗原体积
x = 3000 / 256 = 117.1875 ul =0.117 ml
稀

释

液体积
v = 30 - 0.117 = 29.883 ml
但实际量取时稀释液体积直接用
30ml
计算，因为
0.117 ml
数量很小，可以忽略不
计。

6
、

血凝抑制试验

a
红细胞在使用过程中应经常摇匀。

b< br>加入
1%
的红细胞悬液后放到微量震荡器上震荡混合
1min
，室温< br>20
℃
～
25
℃
下静置
40 min
，若环境温度过高，放
4
℃
静置
60 min
。当
pbs
对照孔红细胞呈明显纽扣状沉到孔
底时判定结果。

7
、

结果判定

血凝试验：将反应板倾斜，看是否呈泪滴状，不呈泪滴状的说明发生血凝

血凝抑制： 将反应板倾斜，看是否呈泪滴状，呈泪滴状的说明未发生血凝或血凝不完全
即血凝抑制

8
、篇三：血凝试验检查的影响因素分析

血凝试验检查的影响因素分析

【关键词】血凝试验

血凝试验是临 床工作中常用的检测项目，血凝试验结果的准确性是指导临床正确治疗的
保障。作为血凝功能异常的筛查 试验，在出血性疾病的诊断、抗凝治疗监测，术前检查中具有
重要作用，且使用广泛。由于凝血试验和一 般的检验项目测定不同，其影响因素具有特殊性。
当其启动因子被某些因素激活后，就会发生一系列连锁 反应，导致检测结果的极大误差。因
此，对于检验人员和临床医生掌握和了解影响血凝试验相关因素显得 尤为重要。血凝试验的因
素有以下几个方面。

1.

血样的采集和处理

1.1.

采血技术

1.1.1.

患者应处于平静状态。因为情绪紧张，剧烈运动会激活或干扰血小板、 凝血因
子和纤溶酶原等成分。

1.1.2.

患者应空腹。进餐后，血中的乳糜微粒等将对血凝试验结果造成干扰。

1.1.3.

采血前不应拍打采血部位，必须顺利
“
一针见血”
，避免混入组织液或发生溶
血。因为组织液中会有丰富的因子
ⅲ
，可激 活外源性凝血途径，加速凝血酶源
的消耗，使试验结果偏低。

1.1.4.

压脉带不应扎的太紧，压迫时间不应过长。压力大及束缚时间过长可影响局部
血液的浓缩和内皮 细胞释放
t-pa
，后者可引起纤溶活动增强。

1.1.5.
< br>采血速度要适当，若太快易产生气泡，使纤溶蛋白原、因子
v
、因子
ⅲ
变性。
因此，建议使用定量真空采血管。

1.1.6.

采血后要 立即和抗凝剂混合，但不要用力震荡。
nccls
推荐使用带塞塑料或聚
乙烯试管采血 ，因不带盖，血浆
ph
值升高，影响试验结果。

1.1.7.
< br>采血顺序对试验结果也有影响。朱忠勇报道［１］：
pt
血样采集顺序第二管、
第三管和第一管比较差异有显著性
(
ｐ＜
0.01)
，
aptt的差异则无显著性
(p
＞
0.05)
。这可能和采血时压脉带压迫时间过 长有关。因此，采多管血样时，血
凝试验标本应取第一管。

1.2.

标本运输、保存和处理

标本应随采随测，如需运输，标本应在室温下运送，因低温会损伤血小板活化因子使
pt
、
aptt
结果降低，血浆标本原则上应 立即检测，
血液一旦离体后即开始变化，随离体的时间不同凝血因子逐渐消耗，从而检测出
的结 果也不同。在原血浆管置室温
2h
测得的结果和立即测定的
pt
、
a ptt
结果