抗双链DNA抗体检测试剂盒(酶联免疫法)说明书

2021年1月21日发(作者：缪氏)



































北京利米生物科技有限公司






























LM- SMS-007
抗双链
DNA
抗体检测试剂盒（酶联免疫法）说明书


【产品名称】

通用名称：抗双链
DNA
抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

英文名称：
Test Kit for Antibody to Double Stranded DNA (ELISA)

【包装规格】


48
人份
/
盒。


【预期用途】

本试剂盒用于体外定性检测人血清中的抗双链
DNA
抗体（
ds- DNA
抗体）水平。

[8]
适用于系统性红斑狼疮（
SLE
）的辅助诊断
。


【检验原理】

本试剂盒应用间接酶联免疫吸附实验原理。在微孔板预包被
ds- DNA
抗原，加入样本稀释液及待检样本进行温育，样本中存
在的抗
ds-DNA抗体与包被抗原形成“包被抗原
-
抗体”复合物，洗板去除不与包被抗原结合的物质；加入 酶结合物（辣根过
氧化物酶标记的抗人
IgG
抗体）进行第二次温育，酶标二抗将与“ 包被抗原
-
抗体”复合物结合，形成“包被抗原
-IgG
抗体
-酶标二抗”复合物；再次洗板后加入显色剂，复合物上连接的
HRP
催化显色剂反应，生成 蓝色产物。终止反应后，变为黄
色。若样本中无抗
ds- DNA
抗体，不显色或很浅色。


【主要组成成分】

表
1.
抗双链
DNA
抗体检测试剂盒（酶联免疫法）组成成分

组成成份名称

数量

主要成分

-DNA
包被板

4
×
12
孔

固相化
ds-DNA
抗原

-DNA
抗体阴性对照质控

150
μ
l
×
1
支

ds- DNA
抗体阴性的混合人血清

-DNA
抗体阳性对照质控

150
μ
l
×
1
支

ds- DNA
抗体阳性的混合人血清

4.
样本稀释液

6ml
×
1
瓶

含
10%
小牛血清和
0.05%
硫柳汞的
0.01M pH 7.4 PBS
5.
酶结合物（
ds-DNA
抗体用）

6ml
×
1
瓶

辣根过氧化物酶标记鼠抗人
IgG
抗体

6.
显色剂
A
3ml
×
1
瓶

3
，
3
，
5
，
5
四甲基联苯胺（
TMB< br>）

7.
显色剂
B
3ml
×
1
瓶

H
2
O
2

8.
终止液

3ml
×
1
瓶

2M H
2
SO
4

9.
浓缩洗涤液（
30
×
0.01MPBST
）

15ml
×
1
瓶

Tween-20 , 30
×
0.01MPBS
10.
自封袋

1
个


11.
封板膜

2
张


注：不同批号的包被板、阴阳性对照质控、酶结合物不可互换。其他组份在有效期内可以互换。


【储存条件及有效期】

1.
储存条件：
2
～
8
℃避光贮存。

2.
有效期：
12
个月。

3.
打开后的包被 板条用自封袋密封，
2
～
8
℃避光贮存不超过
2
周。


【适用仪器】

含波长
450nm
的酶标仪。


【样本要求】


1.
本试剂使用的样本为人血清。

2.
不能检测含 有叠氮钠的样本，因叠氮钠抑制辣根过氧化物酶的活性；不能检测含有悬浮纤维蛋白或聚集物、重度溶血的
样本。

3.
样本中应无微生物。无菌分离的样本可在
2
～8
℃贮存
1
周，低于
-18
℃贮存三周，避免反复冻融。

4.
使用前请将样本置于室温（
10
～
30
℃）平衡
30
分钟以上，冷冻样本实验前需解冻至室温（
10
～
30
℃）并混匀。


【检验方法】


1.
配液：

用蒸馏水或去离子水将
1
瓶浓缩 洗涤液全部稀释至
450ml
。

2.
样本稀释：
取
90
μ
l
生理盐水于塑料试管中，再加
10
μ
l
样本混匀。阴、阳对照已经
1
：
10
稀释可直接使用。

3.
编号：

将样本对应的微孔按序 编号，每板设阴性对照
3
孔、阳性对照
2
孔和空白孔
1
孔（ 双波长测定可不设空白孔）
。

4.
加样：

每孔加100
μ
l
（或
2
滴）样本稀释液，空白孔不加。分别在相应的 孔中加稀释过的样本或阴、阳对照
10
μ
l
，轻
轻振荡混匀。

5.
温育：

用封板膜封板后放入
37
±
1
℃温箱温育
45
±
1
分钟。

6.
洗涤：

小心揭掉封板膜，用洗板机洗涤
5
次（也可手工洗板），每次浸泡
30
秒，洗涤时各孔均需加满洗涤液，最后一次
在吸水纸上尽量拍干。

7.
加酶：

摇匀后每孔加
100
μ
l
（或
2
滴）酶结合物，空白孔不加，轻轻振荡混匀。

8.
温育：

用另一张封板膜封板后放入
37
±
1
℃温 箱温育
30
±
1
分钟。

9.
洗涤：操作同第
6
步。

10.
显色：每孔先加
50
μ
l
（或
1
滴）显色剂
A
，然后加
5 0
μ
l
（或
1
滴）显色剂
B
（包括空白孔）
，
37
±
1
℃避光显色
10
±
1
分钟。

11.
测定：每孔加
50
μ
l
（或
1< br>滴）终止液终止反应，轻轻振荡混匀，
10
分钟内在波长
450nm
下 分别测定各孔的吸光值
A
值。