昆明做试管哪家医院好-试管动物过程图
乳酸菌的鉴定
吲哚试验
1
）.
试管标记：取装有蛋白胨水培养基的试管
2
支，分别标记乳酸菌和空白对照。< br>
2
）
.
接种培养：以无菌操作分别接种少量菌 苔到标记乳酸菌的试管中，标记有空白对照的不接种，置
37
摄氏度恒温箱中培养
24 ~48
小时。
3
）
.
观察记录：在培养基中加入乙醚
1~2 ml ,
经 充分振荡，使吲哚萃取至乙醚中，静置片刻后乙醚层浮于
培养液的上面，此时沿管壁缓慢加入
5 ~10
滴吲哚试剂，如有吲哚存在，乙醚层呈玫瑰色，此为吲哚试验阳
性反应，否则为阴性反应 。
糖发酵试验
1
）
.
试 管标记：取分别装有葡萄糖，蔗糖发酵培养液试管各
2
支，每种糖发酵试管中分别标记乳酸菌和
空白对照。
2
）
.
接种培养：以无 菌操作分别接种少量菌苔至以上各相应试管中，每种糖发酵培养液的空白对照均不
接菌。将装有培养液的 杜氏小管倒置试管中，置
37
摄氏度恒温培养箱中培养
24
小时，观察结果。
3
）
.
观察记录：与对照管比较，若接种培 养液保持原由颜色，其反映结果为阴性；如果培养液呈黄色，
反映结果为阳性。培养液中的杜氏小管内有 气泡为阳性反应，杜氏小管内没有气泡为阴性反应。
1.2.3
乳酸的检测
选用已经分离的菌种做小型发酵实验，取发酵液的上清液约
10
ml
于试管中，加入
10%
硫酸
1
ml
,
再加
2%
高锰酸钾
1 ml ,
此时乳酸转化 为乙醛，把事先在含氨的硝酸银溶液中侵泡的滤纸条搭在试管口中，
微火加热试管至沸，观察滤纸变化。
1.
结果和分析
2.1
乳酸菌的分离提纯
在平板上出现了圆形稍扁平的黄色菌落，周围培养基变为黄色，初 步定为乳酸菌⑴，取出少量在显微镜下
观察到了链球状和杆状两种形状（如图一
2.2
乳酸菌的鉴定
该菌种的菌落 为圆形稍扁平的黄色菌落，有杆状和链球状两种形状。在吲哚试验中，
加入菌种的试管无任何变化，证明 为阴性反应（如图二）
。
说明该菌不具有分解色氨 酸产生吲哚的能力。也说明此菌种不是大肠杆菌，因为大肠杆菌的吲哚试验证
明为阳性。在糖发酵试验中 ，在加入葡萄糖的发酵培养液中加入菌种后，培养液变为黄色，反应结果为
阳性，且杜氏小管内无气泡（ 如图三）；加入蔗糖的发酵培养液中加入菌种后的反应结果也为阳性且杜
氏小管内无气泡（如图四）。< br>
证明该菌种能分解葡萄糖和蔗糖而产酸。杜氏小管内没有气泡，说明该菌种分解糖后不产气。也 证明此菌
种不是大肠杆菌，因为如果是大肠杆菌除了产酸反应结果为阳性外，而且杜氏小
管内会有气泡，因为大肠
杆菌具有分解葡萄糖和蔗糖产酸并产气的能力。为了进一步鉴定该
菌种
，还做了小型发酵实验，通过滤纸条变黑，说明有乳酸存在（如图五）
因为在发酵液的上清液中加入
10%
硫酸
1 ml
和
2%
高锰酸钾
1 ml
后，此时上清液中的乳酸转化为乙醛，< br>加热后使乙醛挥发，因此使滤纸条变黑⑴。以上种种特征均符合乳酸菌的特征。杆状的即为乳酸菌中的短< br>乳杆菌，链球状的即为乳酸菌中的乳链球菌。
2.
讨论
通过对菌落特征，菌体细胞形态以及该菌的生理生化反应实验和运用该菌种做小型发酵实验，证实了该菌种为乳酸菌。杆状的即为短乳杆菌，链球状的即为乳链球菌。实验证明：用
BCG
牛乳 琼脂培养基易于
得到乳酸菌。为了高效分离筛选乳酸菌，应该注意挑取具有典型特征的黄色菌落。另外， 在吲哚试验中，
为了保证实验的准确性，在加入吲哚试剂后切勿摇动试管，这样乙醚层就不至于被破坏。 在糖发酵试验中，
应该在灭菌时适当延长煮沸时间，这样可以防止倒置杜氏小管内有残留气泡。注意了上 述几点有利于实验
的成功性。此外随着现代科学技术的不断发展，对菌种的鉴定也逐渐应用了分子生物学 手段，但由于本实
验室条件有限，不能做这个方面的实验。如有条件，可以做测定
DNA
的
G+C
含量，限制性片段长度多态
性分析（
RFLP
）
,
随机扩增
DNA
多态性分析（
RAPD
）等等，这样就能更精确地 鉴
定该菌种。
参考文献
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1
）
.
黄秀梨，夏立秋等
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微生物学实验指导
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北京：高等教育出版社；德国：施普林格出
版社，1996
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沈萍，范秀容，李广武
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1996
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东秀珠，
蔡妙英等编著
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常见细菌系统鉴定手册
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科学出版社，
2001
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2
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289~294
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399~412
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