试管卵裂4蛋白质标准曲线的制作

2021年1月21日发(作者：试管婴儿成功率认可坤和助孕)
考马斯亮蓝
G-250
（
Coomassie brilliant blue G-250
）法测定蛋白
质含量

考马斯亮蓝
G- 250
（
Coomassie brilliant blue G-250
）测定蛋 白质含量
属于染料结合法的一种。该法是
1976
年
Bradford
建立，试剂配制简
单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比
Lowry
法还高
4
倍，
可测定微克级蛋白质含量，
测定蛋白质浓度范围为< br>0
～
1
000μg
／
mL
，
是一种常用的 微量蛋白质快速测定方法。

关键词：
马斯亮蓝测定考马斯亮蓝
G-250C oomassiebrilliantblueG-250
蛋白质含量

一、目的

学习和掌握考马斯亮蓝
G-250
测定蛋白质含量的原理和方法。

二、原理

考马斯亮蓝
G-
250
（
Coomassie
brilliant
blue
G-250
）测定蛋白质
含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝
G-250
在游离状态下呈红
色，最大光吸收在
488nm
；当它与蛋白质结合后变为青 色，蛋白质
-
色素结合物在
595nm
波长下有最大光吸收。
其光 吸收值与蛋白质含
量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。
蛋白质与考马斯亮蓝
G-
250
结合在
2min
左右的时间内达到平衡，
完成反应十分迅速；
其结
合物在室温下
1h
内保持稳定。
该法是
1976
年
Bradford
建立，试
剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比
Lowry
法还
高
4
倍，
可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为
0
～
1 0
00μg
／
mL
，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。

二、材料、主要仪器和试剂

1
．实验材料

新鲜绿豆芽

2
．主要仪器

（
1
）
分析天平
、台式天平

（
2
）刻度
吸管

（
3
）具塞
试管
、
试管
架

（
4
）
研钵

（
5
）
离心机
、
离心管

（
6
）
烧杯
、
量筒

（
7
）微量取样器

（
8
）
分光光度计

3
．试剂

（
1
）牛
血清
白蛋白标准溶液的配制
：准确称取
100mg
牛血清白蛋
白，溶于
100mL
蒸馏水中，即为
1
000μg
／
mL
的原液。

（
2
）蛋白试剂考马斯亮蓝
G-250
的配制：称取
100mg
考马斯亮蓝
G-250
，
溶于< br>50mL90
％乙醇中，
加入
85
％
（
W
／
V
）
的磷酸
100mL
，
最后用
蒸馏
水定 容到
1
000mL
。
此溶液在常温下可放置一个月。

（
3
）乙醇

（
4
）
磷酸（
85
％）

四、操作步骤

1
．标准曲线制作

（
1
）
0~100μg
／
mL
标准曲线的制作：
取
6
支
10mL
干净的具塞试
管，按表
1
取样。盖塞后，
将各试管中溶液纵向倒转混合，放置
2
min
后用
1cm
光经的比色杯在
595nm
波长下比色，记录各管测 定
的光密度
OD595nm
，并做标准曲线。

表
1
低浓度标准曲线制作


（
2
）
0~1
000μg
／
mL
标准曲线的制作
：
另取
6
支
10mL
具塞试管，
按表
2
取样。其余步骤同（
1
）操作，做出蛋白质浓度为
0~1
000μ
g
／
mL
的标准曲线。