医学检验-粪便标本处理

2021年1月21日发(作者：柴蓁)
粪便标本

粪便标本中常见的病原菌
:
革兰氏阳性菌











革兰氏阴性菌

金黄色葡萄球菌







厌氧链球菌种









结核分枝杆菌








产气荚膜杆菌








艰辨梭菌

白色念珠菌



伤寒及其他沙门氏菌

志贺菌属

致病大肠埃希氏菌

弧菌属菌种

气单胞菌种

邻单胞菌

小肠结肠炎耶尔森菌

弯曲菌

沙门< br>-
志贺氏菌
:
接种
HE
及麦康凯平板
,35
℃、
18
～
24
小时后检查平板
,
有疑似菌落
,< br>接种双糖
,
细菌分纯后用细菌鉴定仪上
板鉴定后与沙门、志贺氏菌因子血清凝集
,
以确诊
.




霍乱弧菌培养:
取疑似患者粪便接种于碱性蛋白胨水中
,
进行增菌
,
同时划线 接种于碱性琼脂平板
/
双洗平板血琼脂平板
,
孵
育
.
增菌培养孵育
6
小时后
,
取菌膜移种于上述平板
,
进行分 离培养
,
并同时做涂片
,
行革兰染色和悬滴标本
,
检查形态 和活动力
.
各
种分离平板在孵育
18-24
小时。观察菌落
,
挑取可疑菌落
,
先与生理盐水混匀
,
观察有无自凝现象
.
再用
O1
群霍乱多价血清作玻
片凝集试验
.
如发现霍乱病人
,
立即向当地防疫部门提供及时准确的信息
.




致病大肠埃希氏菌培养
:
引起腹泻的大肠杆菌有四种
--ETEC
、
EPEC
、
EIEC
、
EHEC.
取液体状、脓血或糊状粪便或肛拭子
划线接种于麦康凯或伊红美兰及血琼脂平板上
,3 5
℃孵育
18-24
小时
,
挑选乳糖发酵菌落
5
个
,
移种于
KIA
和
MIU
孵育过夜
,
并< br>同时进行细菌分纯，用细菌鉴定仪上板鉴定并进行血清学分型
.





副溶血弧菌培养
:
取粪便接种于副溶血弧菌增菌液中
, 6-8
小时后接种于
TCBS
和
SS
琼脂平板上
,35℃孵育
18-24
小时后
,
观察菌落
,
挑取
T CBS
上绿色微隆、浑浊、湿润菌落
,SS
上挑取无色透明、不易挑起菌落进行分纯后 用细菌鉴定仪上板鉴定
.





真菌培养< br>:
真菌性腹泻多继发于抗生素治疗后
,
常见于白色念珠菌、
球拟酵母菌
.
将标本接种于含氯霉素的沙保氏琼脂及血
琼脂平板
,
置
2 5-30
℃孵育
24-48
小时
,
根据菌落形态及涂片革兰氏染色所 见结果
,
决定鉴定方法
.




< br>菌群失调及菌交替症
:
根据临床提示粪便培养需选用数种培养基
,
包括 强选择性和弱选择性肠道培养基、需氧及厌氧血琼
脂平板、沙保氏琼脂等
,
按各类细菌 分别进行培养鉴定
,
并观察其数量变化
.
3
、操作流程
(
沙门
-
志贺氏菌属检查
)


























粪便或肛拭子





















































↓
























↓





分离培养


















增菌培养





















































HE
及麦康凯琼脂分离培养


血平板分离纯培养


















血清学鉴定








细菌鉴定










药敏试验































报告


4
、报告方式
:




以分离目的菌种的结果而决定
,
如
:
目前常规以
SS/HE
和中国蓝或伊红美兰分离粪便中的致病菌
,
阳性者应报告“沙门菌或
志贺氏菌”
,
阴性应报告“未检出沙门菌属或志贺菌属”< br>.
其他培养结果报告方式与上述原则基本相同
.
5
、注意事项

（
1
）人类肠道中的细菌种类繁多，数量亦 多，在健康人肠道内经常寄居的大量的细菌，一旦肠道发生病理改变时，就可能
侵入病变部位而引起疾病 。

（
2
）提高阳性检出率必须注意：标本要采集新鲜的、陈旧标本大大影响 阳性检出率。

（
3
）痢疾患者要采集大量脓血部位进行培养。

(4)
切勿粪尿混合否则也会影响阳性检测率。

穿刺液培养常见的病原菌

革兰氏阳性菌













革兰氏阴性菌

金黄色葡萄球菌

A
群链球菌

肺炎链球菌

草绿色链球菌

肠球菌

厌氧链球菌

结核分枝杆菌

产气荚膜芽胞杆菌

放线菌

念珠菌


淋病奈瑟氏菌


流感嗜血杆菌

大肠埃希氏菌

产气肠杆菌

伤寒及其他沙门氏菌

肺炎克雷伯氏菌

产碱杆菌

铜绿假单胞菌

不动杆菌

梭杆菌

拟杆菌



当留取标本时
,
为防止穿刺液凝固< br>,
可在无菌容器内预先加入灭菌肝素
,
再注入各种穿刺液
.


(1)
涂片检查
:
标本如为浆液
,
可经
3000r/min
离心
,
取沉淀涂片
.
如为脓液
,可直接涂片
,
涂片固定后
,
做革兰氏染色和抗酸染色
.


(2)
除常规一般培养外，
应根据临床提示的要求增加真菌和 结核培养
,
穿刺液含细胞数量较少
,
必须做增菌培养
.
如标 本外观非
脓样
,
可加大接种量
.
平板经
35
℃24-48
小时孵育后
,
如有细菌生长
,
按常规鉴定
,
无菌生长的平板还应继续孵育至
48
小时
.
方可报
告阴性< br>.
浆膜腔积液采集

穿刺液（胸水、腹水、关节液、鞘膜液）














































涂片革兰氏染色








血平板、麦康凯







巧克力平板


35
度
18-24h
，
5%-10%CO2


初步报告结果
















挑取可疑菌落分离培养


菌种鉴定
,
药敏试验


























报告结果

4
、报告方式
:
穿刺液中检出细菌均应报告鉴定结果及药敏试验
.
5.

注意事项

（
1
）

穿刺 液盛于含有抗凝剂的试管或小瓶中，充分混合后，立即送检或置
4
度冰箱保存。

（
2
）

应根据临床要求选择相应的培养基。

（
1
）对疑有淋病性关节炎患者之关节液，采集应即刻送检或床边培养为佳。

脑脊液标本

正常人体脑脊液是无菌的。当人体患有脑脊髓膜炎症时，在脑脊髓液中可 以出现病原菌。常见的病原菌有细菌、真菌和结核
菌等，引起脑脊髓膜炎的微生物主要有：

革兰氏阳性菌


















革兰氏阴性菌

金黄色葡萄球菌
















脑膜炎奈色氏菌

Ｂ群链球菌




















卡他布兰汉菌

Ａ群链球菌




















流感嗜血杆菌

肺炎链球菌




















肠杆菌科菌种

消化链球菌




















脑膜败血性黄杆菌

炭疽芽胞杆菌


















假单胞菌

结核分枝杆菌


















无色杆菌

产单核细胞李斯特菌












拟杆菌

新型隐球菌、白色念珠菌


腰穿法收取脑脊液
3
～
5ml
，盛于无菌试管，应立即送检，否则影响检出率，同时注意保温，不可置冰箱保存，会使 病原
菌死亡，尤其是脑膜炎奈色氏菌、肺炎链球菌及流感嗜血杆菌。





实验室接到标本须立即做直接涂片镜检和培养。



(1)
肉眼观察和涂片检查






首先观察脑脊液的外观，除结核性脑膜炎外，其他细菌引起的化脓性脑膜炎多呈明显混浊，经抗生素治疗 后，亦可不
混浊或轻度混浊。






革兰氏染色：混浊或脓性脑脊液可直接涂片，染色镜检。无色透明的脑脊液，应以
3000r/min
离心，
10-15min
，取沉淀
物涂片，行革兰氏染色，镜检。根据染色反 应及细菌形态特征，常可初步提示感染细菌的种类。






结核分枝杆菌涂片检查：脑脊液以
4000r/min
离心
30m in
，取沉淀物作小而集中的涂片；亦可将脑脊液在室温下静置数
小时或
18-24h
，待形成纤维网后，取此脑脊液倾于新的无划痕的洁净载玻片上，多余的液体任其溢出载玻片，使纤维网 自然
展开，干燥、固定后用萋纳氏染色。






新型隐球菌涂片检查：脑脊液的离心沉淀物行墨汁负染色，可在黑色背景中，见到菌体周围有 透明的荚膜，似一晕轮，
有时可见到出芽的酵母菌。新型隐球菌，特别是荚膜窄者易与白细胞相混淆，可 用
0.1%
甲苯胺兰染色法加以区别。新型隐球
菌的菌体呈红色园球状，荚膜不着色， 白细胞染成深蓝色。



(2)
培养





A
．

一般培养应抽
2
—
3ml
放如血培养瓶中
（同血培养）
。
主要用于脑膜炎奈色氏菌、< br>链球菌、
葡萄球菌、
大肠埃希氏菌、
产气杆菌、流感嗜血杆菌等细菌的分离。< br>





对有的未直接打入血培养瓶的标本，用 接种环挑取混浊脑脊液或经离心沉淀的沉淀物，分别接种于血琼脂平板及巧克
力琼脂平板上，置
35
℃
CO2
环境中培养
18-24h
，检视有无细菌生长。根据菌 落特点及染色后镜检的特征，初步判定细菌的
种类，并进一步分离纯培养后配制菌悬液上板条并做细菌鉴 定及血清学检查，并作出报告。






血平 板和巧克力平板是分离用的最基本培养基。巧克力平板需放入
CO2
环境中，有利于检出脑膜炎 奈色氏菌、肺炎链
球菌及嗜血杆菌等。






结核分枝杆菌培养：取离心后的沉淀物，接种罗－琴氏培养基，斜置于
35
℃温箱，孵 育
7
天后，直立，继续孵育生长
至八周，无菌落生长，发阴性报告；有菌落生长，鉴定 后发报告。






真菌培养：取经离心后的 沉淀物，接种于科玛嘉显色平板上，放在
35
℃孵箱中孵育，一般
2-3
天即 可出现菌落。极少
数真菌需培养
2-3
周，才能出现菌落，甚至培养阴性。根据菌落形 态、涂片所见和细菌鉴定结果等进行鉴定。

3
．操作流程：



































脑脊液



















混浊液可直接检验清亮液应离心取沉淀














涂片、革兰氏染色、镜检
















必要时作抗酸染色或墨汁染色法











血琼脂平板















巧克力平板


35
℃
18-24h











CO2
环境下
35
℃
18-24h






















































观察菌落


























































































涂片检查






细菌鉴定
/
药敏试验



血清学鉴定

































































































































发出报告

4
、

报告结果：





无论是涂片还是培养，一旦检测到阳性应立即通知临床医师 。培养并经鉴定的结果报告“×××菌”
，同时报告药敏试
验结果。

5
、

注意事项

（
1
）
由于脑脊液奈瑟氏菌离体后容易自溶，流感嗜血杆菌等也易死亡，故不论是做涂片镜检，还是进行培养检查必 须立即
送检。

（
2
）

标本若混浊，最好进行床边培养。

（
3
）

做好治疗前采集标本。

（
4
）

要切实防止皮肤表皮葡萄球菌和其它细菌的污染、
。

尿液标本

1
、标本的采集






①

中段尿：女性采样前应先用肥皂水或
0.1
％高锰酸钾溶液冲洗 外阴部及尿道口；男性须翻转包皮冲洗，用
0.1
％新洁
尔灭消毒尿道口．灭菌纱布擦 干后收集标本。






②

导尿管导尿采样可减少污染。
对留置导尿者，
可用碘酒消毒尿道口处的导尿管壁，
用 空针细针头斜穿管壁抽吸尿液。
或消毒后解开接口，弃去导尿管前段尿被、留无污染的膀胱内尿液数毫升 送检。不可从集尿袋的下端管口留取标本。






③送检标本以晨起第一次尿液为佳。






④

室温下尿标本耽搁稍久，可致尿内细菌浓度明显增加而影响病原菌与污染菌的区分 。不能立即送检者，可暂存
4
℃
冰箱。

正常人体中，膀胱中的尿液 是无菌的，从膀胱穿刺取出的尿液业应是无菌的。尿液经尿道排出时，受到尿道中细菌的污染而
混有细菌 。取经尿道排出的中段尿，细菌数不会超过
10^3CFU/ml
。患有泌尿系感染时，尿中的 菌数高于
10^4-5CFU/ml
，因
而，以此界限作为诊断泌尿系感染的依据。< br>

2
、

检验步骤
:


留检的标本应立即送检，否则尿中细迅速繁殖
,
使菌落计数不可靠而影响诊断
.实验室

接到标本后，须立即进行涂片和培养。用定量接种环或定量加样器取中段尿
10UL
，滴注在血平板上，用接种环涂抹，待表
面干燥后，
35
℃培养< br>24H
，计数生长的菌落数，乘以
100
，求出每
ML
的菌落 数。



(1)
涂片检查
:
一般细菌细菌涂片
:
以无菌操作作吸取尿
5
～
7ml,
放入无菌试管内，经
3000r/min
离心
30
分钟后，
倾去上清液
,
取其沉渣
,
制成涂片
,
行革兰氏染色
,
镜检
.
如发现有革兰氏阴性或阳性细菌
,
即可做出报告
.





淋球菌涂片
:
尿标本如上处理后另制一
< br>张涂片以革兰染色
,
镜检
.
如查到细菌并为革兰氏阴性双球菌
,
肾形
,
存在于细胞内
或细胞外
,
经培养证实后方可做出报 告。






念珠菌涂片
:
将尿液离心沉淀后
,
取沉淀物放于洁净玻片上
,
覆以盖玻片
,
略加压力
,
使成薄片
,
直接用高倍镜观察
.
如沉渣太多
,
可滴加
10%
氢氧化钠
,
使之溶解后再做镜检.
也可制成薄片
,
干后经火焰固定
,
革兰氏染色
,油镜检查
.
发现有卵圆形的芽生孢子
和管状的假菌丝
,
且革兰氏 染色为阳性
,
就可报告检出念珠菌
.





结核分枝杆菌涂片
:
尿液经
4000r/min
离心30
分钟
,
取沉淀作涂片
,
行萋纳氏染色及潘本
汉氏染色
,
如两张涂片均查见红色杆菌
,
可报告为“找到结核分枝杆菌”
.
如萋纳氏染色片上查见红色杆菌
,
而潘本汉氏染色未查
见红色杆菌
,
则为耻垢分枝杆菌
.
也可用金胺
O-
罗丹明荧光染色法< br>.


(2)
培养
:
临床多用中段尿做细菌培养
,
应做菌落计数
,
培养结果才有诊断意义
.





培养基常用血平板
,
在检查淋球菌时
,须使用淋球菌平板
,
并防入
CO2
环境中孵育
.





许多抗生素是经肾脏代谢的
,
所以尿中抗 生素浓度较高
,
细菌的细胞壁结构易受破坏
,
可形成
L-
型 细菌
,
常规方法不能检出
.
对用过抗生素的患者
,
尿培养有 条件时须接种高渗培养基
,
以免漏检
.

3
、

操作流程
:

尿液





涂片

定量培养

分离培养

淋病奈瑟氏菌培养


离心沉淀

计数菌落

血琼脂平板

麦康凯平板

专用淋球菌平板


涂片、革兰氏染色
5%
～
10%CO2

镜检
35
℃
,18
～
24h 35
℃
,18
～
24h

观察菌落







涂片、染色、镜检

鉴定细菌

药敏试验



报告

4
、报告方式

10%
的尿路感染患者< br>,
可能会在同份尿标本中分离到两种细菌
,
并且都是病原菌
.
若同份标本中检到
3
种以上不同微生物
,
一般认为污染。
尿标本中革 兰氏阴性杆菌菌落计数大于
10^5CFU/
：
菌菌落计数大于
10^4CF U/ml
有诊断意义
,
报告鉴定结果即
药敏试验


5
、注意事项

（
1
）尿液标本的采集除婴儿外，一般均使 用导尿法，然而就目前国内外细菌室则多用中段


尿，个别病例也可行膀胱穿刺术，在收集标本时应切实防止污染，及时接种，以免细菌繁殖。

（
2
）

通常正常尿液本应是无菌的，由于外生殖道细菌的存在和其 它因素的影响，虽经消毒的导尿，也难免绝对无菌，因
而在实际工作中必须和定量培养法（菌落计数）同 时检查。

伤口、创伤面、脓液采集

脓汁及创伤分泌物中常见的病原菌

革兰氏阳性菌












革兰氏阴性菌

葡萄球菌

链球菌

消化链球菌

炭疽芽胞杆菌

破伤风芽胞杆菌

产气荚膜梭菌

溃疡棒状杆菌

结核分枝杆菌

放线菌、奴卡菌

念珠菌

假单胞菌

肠杆菌科细菌

腐败谢瓦纳拉菌

拟杆菌

梭杆菌

嗜血杆菌

产碱杆菌

无色杆菌

弧菌属细菌

气单胞菌



(1)
涂 片检查
:
脓汁标本在培养的同时均应做涂片
,
涂片的结果一方面报告临床提供 最初的诊治依据
,
另一方面可作为分离培
养的质量指标
.
涂片见到的 细菌均应分离得到
.
陈旧性脓液
,
其中细菌已被消化
,
涂片 观察不到细菌
,
也不可能分离出细菌
.


(2) 培养
:
血琼脂平板和中国蓝
/
麦康凯琼脂平板是基础的分离培养基
,
对于内源性感染病灶

的分泌物往往是多种细菌混合存在
,
且以 革兰氏阴性菌为主
,
这就需要选择培养基并以分区划