可以试管婴儿Folin酚测蛋白质含量实验报告

2021年1月20日发(作者：西安党员考试管理平台)





生物化学实验报告





姓

名：




学

号：


专业年级：
2014
级生物信息学


组

别：

第
8
实验室




生物化学与分子生物学实验教学中心

1


实验名称

实验日期

合作者

评分


Folin-
酚试剂法测定蛋白质含量

2015-11-2

教师签名


实验地点

指导老师

批改日期


第
8
实验室


一、实验目的

1
、掌握
Folin
-
酚试剂法测定蛋白质含量的原理及其实验操作技术。

2
、掌握制作标准曲线的要领和通过标准曲线求样品溶液中待测定物质含量的方法。

3.
熟悉分光光度计的用法。

二、实验原理

1.
在碱性溶液中，蛋白质分子中的肽键与碱性铜试剂中的
Cu
2+
作用生成紫红色的蛋
白质
- Cu
2+
复合物。

2.
蛋白质
- Cu
2+
复合物中所含的酪氨酸或色氨酸残基还原酚 试剂中的磷钼酸和磷钨
酸，生成蓝色的化合物。

3.

在一定浓度 范围内，蓝色的深浅度与蛋白质浓度呈线性关系，故与同样处理的
蛋白质标准液比色即可求出蛋白质的含 量。

三、材料与方法

1.
实验材料

（
1
）样品

健康人血清（
300
倍稀释）
；正常人血清蛋白质含量：
60~80 g/L
（
2
）试剂


牛血清白蛋白标准液（
200
μg/ml
）
；碱性硫酸铜溶液（现配现用）
；
Folin< br>-
酚试剂

2


（
3
）仪器与器材

V-1100
分光光度计；恒温水 浴箱；试管
6
支、试管架；加样枪、加样枪架；坐标
纸

2.
实验步骤

（
1
）图示


（
2
）取
6
支试管做好标记，再按下表加样：
（
1
作空白对照，
2-5
作标准，
6
为待测
样品）


（
3
）加样时按横向顺序加样，并在加入碱性硫酸铜时：于
1
号试管 加入碱性硫酸
铜溶液
2ml
后等待
1
分钟再往下一支试管加入等量的 碱性硫酸铜溶液，
摇匀。
以此类推。

（
4
）在全部试管加 完碱性硫酸铜试剂之至距第一支试管加样
10
分钟后，于第
1
支
试管 立即加入
0.20
mL Folin
-
酚试剂，
并于
2s< br>内摇匀。
1
分钟后第
2
支试管加入
0.20
mL < br>Folin
-
酚试剂，
2
分钟后加第
3
支试管，以此 类推。


（
5
）加样完毕后将各试管每隔
1
min
按
1-6
顺序放一只试管入水浴箱，分别
40
℃
水 浴
10
min
后取出冷却至室温。

3