做试管得多长时间胃蛋白酶效价测定实验方案

2021年1月20日发(作者：试管冻胚移植全过程)
胃蛋白酶

检验用试剂
:
盐酸、酪氨酸、胃蛋白酶、三氯醋酸、牛血红蛋白

酪氨酸烘干至恒重（
10 5
℃）
、试管（
16
支
/
组，至少
12
支
/
组，最少
8
支试管）

试液的配制：

1mol/L
盐酸溶液：
90ml
盐酸，加水稀释并定容至
1000ml。
（配
500ml
）

盐酸溶液：取
1mol/L盐酸溶液
65ml
，加水至
1000ml
。
（每组各配
1000ml
）

5%
三氯醋酸溶液：配
600ml
血红蛋白试液：配
600ml

（每组至少
20ml
）

血红蛋白试验



取牛血红蛋白
1g
，加盐酸溶液
(
取
1mol/ L
盐酸溶液
65ml,
加水至
1000ml)
使溶解成
10 0ml
，即得。本液置冰箱中保存，
2
日内使用。



试管编号

对照品溶液

供试品溶液

水浴保温

预热的血红蛋白
试液





对照品

1
、
2
、
3
1.0ml

供试品

4
、
5
、
6

1.0ml
供试品的空白对
照

7


对照品的空白对
照

8
37
℃
±
0.5
℃水浴中，保温
5
分钟


加入预热至
37
℃
±
0.5
℃的血红蛋白试液< br>5ml
，摇匀，在
37
℃
±
0.5
℃水浴
中反应
10
分钟

加入
5%
三氯醋酸溶液
5ml
摇匀



摇匀，滤过，取续滤液备用

275nm
的波长处测定吸收度

供试品溶液
1ml
盐酸溶液
1ml
本品系自猪、
羊或牛 的胃黏膜中提取的胃蛋白酶。
每
1g
中含蛋白酶活力不得少于
3800
单位。


【效价测定】对照品溶液的制备


精密称取经

105
℃干燥至恒重的酪氨酸适量，加盐酸溶
液〔取< br>1mol/L
盐酸溶液
65ml
，加水至
1000ml
〕制成每
1ml
中含
0.5mg
的溶液。


供试品溶液的制备


取本品适量，精密称定，用上述盐酸溶液制成每
1ml
中约含

0.2
～
0.4
单位的溶液。


测定法


取试管
6
支，其中
3
支各精密加入对照品溶液
1ml
，另
3
支各精密加入供试品
溶液
1ml
，置
37
℃
±
0.5
℃水浴中，保温
5
分钟，精密加入预热至
37
℃
±
0.5
℃的血红蛋白试
液< br>5ml
，摇匀，并准确计时，在
37
℃
±
0.5
℃ 水浴中反应
10
分钟。立即精密加入
5%
三氯醋
酸溶液
5m l
，
摇匀，
滤过，
取续滤液备用。
另取试管
2
支，
各精密加入血红蛋白试液
5ml
，
置
37
℃
±
0.5
℃水浴中保湿
10
分钟，
再精密加入

5
％三氯醋酸溶液
5ml
，
其中
1
支加供试品
溶液
1ml
，另
1
支加上述盐酸溶液
1ml
，摇匀，滤过，取续滤液，分别作为供试品和对照
品的空白对照，
照分光光度法（附录Ⅳ
A
）在
275nm
的波长处测定吸收度，
算出平均值Ａ
S
和Ａ，按下式计算。





























Ａ
×
Ｗｓ
×
ｎ


每
1g
含蛋白酶活力
(
单位
)
＝
─────────────



























Ａ
s ×
Ｗ
×
10×
181.19