什么样的人需要做试管土壤脱氢酶测定-TTC还原法

2021年1月20日发(作者：试管进入周期要做什么)
土壤脱氢酶测定
-TTC
还原法

仪器：

试管、定量滤纸、三角瓶、分光光度计、摇床、
Ph
计

试剂：

TTC
（氯化三苯基四氮唑）
、
浓
HCl
、
Tris
（三强甲基氨基甲烷）
、
甲醇、
TPF
（三苯基甲臜
za
）

配制：

1.

Ph 7.6
、
0.5mol/L Tris
缓冲溶液：
60.57g Tris
溶于水，用
1mol/L
HC l
（按浓盐酸：
水
=1
：
1
比例配制）
准确调pH
至
7.6
，
定容至
1000ml
；

2.

1% TTC
溶液：
1g TTC
溶于上述缓冲液，定容至
100ml
；

3.
1%
葡萄糖溶液：
1g
葡萄糖溶于水，定容至
100ml
；
测定步骤：

1.

4g
过
2mm
（
10
目）
筛新鲜土样于试管
（
25ml
）
，加
1%TTC
溶液
2ml
，
1%
葡萄糖溶液
2 ml
，摇匀；同时每个处理设置用
Tris
缓冲液
2ml
代替
TTC
对照；

2.

试管于恒温箱（烘箱）暗室
37< br>℃培养
24h
，加甲醇
20ml
（少量多
次）
，移入
50ml
三角瓶，摇床（
180-220r/min
）振荡

1h
，过滤；

3.

先用量筒测量滤液体积，然后将滤液 于分光光度计
485nm
处测定
吸光度值，用水和待测液润洗，直接测量下一个样品。

4.

整个实验设置无土壤对照（加
TTC
溶液和葡萄糖 溶液各
2ml
）
。


标准曲线制备：