网红试管茶小鼠早期胚胎发育和胚胎移植

2021年1月20日发(作者：男性生殖支原体影响试管婴儿)
小鼠早期胚胎发育和胚胎移植

/
、

小鼠的早期胚胎，是 研究哺乳动物以及人类自身早期发生机理常用的实验材料。胚胎移植，
就是把一头雌性动物的早期胚胎从 输卵管或子宫内取出，
移植到另一头雌性动物的输卵管或
子宫内，使其继续发育为胎儿。胚胎移 植技术在畜牧业已开始应用于生产。

小鼠的早期胚胎，是研究哺乳动物以及人类自身早期发生 机理常用的实验材料。胚胎移植，
就是把一头雌性动物的早期胚胎从输卵管或子宫内取出，
移植 到另一头雌性动物的输卵管或
子宫内，
使其继续发育为胎儿。
胚胎移植技术在畜牧业已 开始应用于生产。
一些发达国家已
有经营奶牛和肉牛胚胎移植的企业公司，
向国外销售 胚胎。
在我国，
这一技术的研究起步较
晚，
1974
年在绵羊上获得 成功，
1978
年在奶牛上获得成功，
80
年代后期
90
年 代初，
奶牛、
安哥拉山羊和绵羊的胚胎移植开始在生产上应用。
胚胎移植术也是显微操 作中最基本的实验
技术，
是从事其它显微操作如嵌合体动物、
胚胎干细胞、
转 基因动物和细胞核移植等实验必
不可少的步骤。下面以小鼠为例，介

绍哺乳动物的早期胚胎发育及胚胎移植的操作过程。

实验技术

一、人工催情和超数排卵

1.
小鼠的性别鉴定：

成年 小鼠的性别较易鉴别。
雌鼠可见有明显的阴道开口和明显的五对乳头，
雄鼠可见明显的
阴囊，
仔鼠或幼鼠则主要以它们的外生殖器与肛门的距离来区别，
距离近的为雌鼠，
距 离远
的为雄鼠。

2.
人工催情：

成年小鼠在非妊娠和 非哺乳期间，
任何时间都可发情，
性周期为
4-5
天。
超数排卵一般 选用
体重在
20-30g
的雌鼠，注射孕马
血清
（
PMSG
）促使超排。每头雌鼠注射
PMSG 5-10IU
，
注射时间可在第一天下 午
4
时左右，注射部位为腹腔。在第三天的下午
4
时左右腹腔再注
射 绒毛膜促性腺
激素
（
hCG
）
5IU
，并和雄鼠合笼饲养让 其自然交配。第四天上午
8
时左右
检查雌鼠，
如有阴道栓形成者，
即 可供采卵。
阴道栓是雌鼠交配后精液与阴道分泌物及阴道
上皮等凝结而成的，位于阴道口附近， 一般在交配后数分钟即可出现

（图
16.3
）
。
最初阴栓 湿润而软，
随后逐渐变硬转为黄色，
最后阴栓缩入阴道液化而消失，
此过程需
10
余小时，有的在
24-48
小时后仍可见。在合笼后每天上午
8-9 < br>时，下午
5-6
时
检查阴栓，出现阴栓即可认为是妊娠的第一天，即胚龄的第一 天。

二、受精卵及囊胚的获得

1.
受精卵的获得：

将检查有阴栓的小鼠用脊椎脱臼法处死，
70%
酒精消毒腹部。
在腹部中央横 剪一小口
（
0.5cm
宽），将两边皮肤肌肉沿切口部剪开，暴露腹部器官；用剪刀和 镊子除去卵巢、输卵管和子
宫周围的脂肪组织，把输卵管取出（图
16.4
，
16.5
），置于盛有培养液的表面皿中。在解
剖镜下找到输卵管膨胀的壶腹部，用镊子撕开一 小口，卵子即自然流出（图
16.6
）。如受
精卵已迁移到输卵管的狭窄部，
则可用冲洗法收集受精卵。
方法是：
在解剖镜下找到输卵管
喇叭口，
可以用小 玻璃探针帮助，
将吸有冲卵液的注射器针头对准喇叭口，
右手用小镊子轻
轻将喇叭口套 在针头上，套进约
1mm
即可，并用镊子把管

口轻轻夹住；
左手轻 推注射器，
压出
0.5ml
冲卵液即可将输卵管中的卵冲出。
一般在一侧输< br>卵管中可冲出
4-10
个卵。收集到的受精卵带有卵丘细胞，必须在含有透明质酸酶（
Hyaluronidase,1mg/ml
）
的培养液中溶去卵丘细胞，再将受精卵换到新鲜的培养液内洗涤
3-4
次才可用于移植。冲卵液要保持
37< br>℃。

2.
囊胚的获得：

取妊娠第四天的供胚鼠，
同法取出子宫，
放在消毒
滤纸
上，
吸净子宫周围的血液。
用装有冲
卵液的注射器针头从上端
（即靠近卵巢一端）
插入子宫，
将胚胎冲入培养皿中 。
用移卵
吸管
吸取胚胎放入新的培养液中清洗一下，用于移植。

三、假孕鼠的制作

1.
不育雄鼠：

选性成熟且健壮的 雄鼠，结扎输精管，恢复
2-3
周后，与性成熟的雌鼠交配，检查雌鼠有阴
道栓但不怀 孕产仔。证明结扎手术成功，可作为不育雄鼠或称阉割鼠。

2.
供胚鼠：


选择性成熟且处于发情期的雌鼠，在下午
4
时左右与雄鼠合笼，第二天早晨 挑出有阴道栓
者为供胚鼠或称孕鼠。

3.
假孕鼠：

假 孕鼠是胚胎移植时的受体。
其生殖系统生理状态与移入卵的发育阶段同步，
从而为移植的
胚胎提供着床和继续发育的条件。
一般选择生过一胎，
母性较好的雌鼠和阉割鼠合笼，
次日
上午挑选有阴道栓者为假孕鼠。

四、胚胎移植

从受精卵到 囊胚（受精
0.5-3.5
天），都可以转移至假孕鼠的生殖管道以完成发育。胚胎移
植有输卵管移植和子宫移植两种。
单细胞到桑椹期的卵可转移至受孕
0.5
天的假孕鼠 的输卵
管。输卵管移植仅适用于被透明带包裹的卵；
3.5
天的囊胚转移至假孕鼠的子 宫。用于子宫
移植的胚胎不需有透明带。

1.
输卵管移植（图
16.7
）：

（
1
）将假孕鼠麻 醉后在背部偏下方表皮，
70%
酒精消毒。

（
2
）在背腰 中央纵向剪开皮肤，开口约为
0.7cm
。用镊子沿切口剥开皮肤、肌肉，透过肌
层可 见白色脂肪垫位于脊柱两侧约
1cm
处。

（
3
）在脂肪垫 的位置剪开肌肉层，切开
0.5cm
的小口，用小镊子夹住脂肪组织，把一侧的
卵巢、 输卵管与子宫一起拉出，固定好，置于显微镜下。

（
4
）
用移胚管 吸取卵子。
可先吸入部分石蜡油，
再吸卵以便于控制。
吸卵前先吸
1
个气泡，
然后再吸一段培养液，接着吸卵，再吸一个气泡，最后吸进一些培养液。

（
5
）用镊子夹住输卵管喇叭口周围接合部，随即将移胚管插入喇叭口中，轻轻向输卵管内
吹气，
直至第二、
第三个气泡进入输卵管内。
移胚管略停一下再行拔出，
以 防气泡与卵子逸
出。

（
6
）将脂肪垫、卵巢、输卵管及子宫等复位 ，缝合伤口。小鼠苏醒后单笼饲养，
18
天左右
分娩。

2.
子宫移植（图
16.8
）：

（
1
）小鼠的麻醉和解剖同输卵管移植。