试管男女比例-试管马上取精了得肺炎了
手工抗人球蛋白试验试管法标准操作规程
(
一
)
检验目的
建立手工抗人球蛋白试验的标准操作规程，确保手工抗
人球蛋白试验的规范性和准确性。
(
二
)
检验原理
血液中一些
IgG
类抗体或补体
C
。
(
主要是免疫性抗体
)
与红细胞表面相应抗原结合后，在盐水介 质中不出现肉眼可
见的凝集反应，但在加入抗
IgG
或抗
C
，抗体后 ，以其搭桥
则出现凝集反应，该试验称之为抗人球蛋白试验，也称
Coombs Test。包括直接抗人球蛋白试验
(DAT)
和间接抗人球
蛋白试验
(1AT)
。
(
三
)
适用范围
用于检测红细胞体内致敏情况
(1)
新生儿溶血病的诊断。
(2)
免疫性溶血性贫血的诊断。
(3)
研究药物致敏的红细胞。
(4)
溶血性输血反应的研究。
用于检测体外致敏红细胞的抗体
(1)IgG
类不规则抗体筛查与鉴定。
(2)
交叉配血试验。
(3)
检查用其他方法不能查明的红细胞抗原。
(4)
用于一些特殊研究，如混合凝集反应、白细胞抗体及
血小板抗体检测 试验。
(
四
)
设备性能参数
参见血清学专用离心机使用说明书。
(
五
)
器材与试剂
1.
器材
离心机、塑料软试管、塑料硬质试管
(75m m
×
12mm)
、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。
2.
试剂
生理盐水、抗球蛋白试剂
(
市售单克隆抗
IgG
、
单克隆抗
C3d
、抗
I gG+C3d)
、致敏的阳性对照细胞
(
自制
)
。
(
六
)
样本要求
1.
患者标本
ED TA-K
3
或
EDTA-K
2
抗凝全血≥
3m1
， 经
B600-A
型离心机在
1
760g
条件下，离心
5< br>分钟，离心后无
溶血及明显乳糜。紧急情况下可以使用抗凝动脉血。
2.
供者标本
枸橼酸盐抗凝， 全血量
3-5ml
，经
B600-A
型离心机在
1 760g
条件下，离心
5
分钟，离心后无溶血、无
凝块及明显乳糜。
(
七
)
校准步骤
参照血清学专用离心机使用说明书中的校准要求执行。
(
八
)
操作程序
1.
直接抗人球蛋白试验
< br>(1)
取
2
支洁净试管分别加入抗
IgG+C3d(
可根据需 要使
用多特异性抗球蛋白
)1
滴，
其中
1
支试管加
1
滴受检者
3
次
洗涤后的
3
％～
5
％红细 胞盐水悬液，
另
1
支试管加
2
滴正常
人
AB
型血清和
1
滴
3
％～
5
％正常人
O
型红 细胞悬液作为阴
性对照，分别混匀。
(2)
使用血型血清学专用离心机在
1
000g
条件下，离心15
秒，观察、记录结果。若离心后受检管出现红细胞凝集，
同时阴性对照管无凝集，可确 定为阳性结果。对于阳性结果
可以根据实际需要分别使用抗
IgG
、抗
C3d
区分其特异性。
若受检标本管中无红细胞凝集
(
阴性
)
，则 室温孵育
5
分钟，
在离心观察结果，如为阳性则为抗补体反应结果。
2
次离心
均为阴性结果的，在受检管中再加
1
滴
3
％～
5< br>％
IgG
致敏细
胞的标准
O
型红细胞悬液，
2
次离心后观察结果，若出现凝
集表明为阴性结果可靠。
2.
间接抗人球蛋白试验
(1)
按表
14-1
加入试剂。
(2)
混匀，使用血型血清学专用离心机在
1 000g
条件下，
离心
15
秒，观察、记录结果，阳性对照管凝集，阴性对照
管不凝 集则受检管出现凝集为阳性，不凝集为阴性。
致敏对照试剂红细胞的制备
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