做蛋糕为什么要用玉米油上海科华HBsAg-ELISA两步法

2021年1月19日发(作者：侯耀文)


医院检验科免疫室

乙型肝炎病毒表面抗
文件编号：

原诊断试剂盒
（酶联免
生效日期：

年

月

日

疫法）标准操作规程

版本：第
1
版

第

页，共

页

1
、

检验申请


单独检验项目申请：乙型肝炎病毒表面抗原（缩写
HBsAg
）测定；组合项目
申请： 肝炎标志物检查组合。临床医生根据需要提出检验申请。

2
、


样本采集与处理

2.1
样本采集

2.1.1
常规静脉采血约
2ml
，不抗凝，置普通试管中，或采用含分离胶的真空采
血管。也 可采集血浆，用肝素、
EDTA
或枸橼酸盐抗凝。

2.1.2
检验申请单和血样本试管标上统一且唯一的标识符。

2.1.3
急诊样本采集后，在检验申请单上填写样本采集时间。

2.1.4
样本采 集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责样本的接收
并记录样本的状态，对不合格样本予以拒 收。

2.1.5
下列样本为不合格样本

2.1.5.1 样本量不足：少于
0.3ml
的全血样本，或少于
0.1ml
的血清或血 浆。

2.1.5.2
对检测结果可能有干扰的样本，包括严重溶血、严重浑浊的样本。

2.1.5.3
无法确认样本与申请单对应关系的。

2.1.5.4
其他如标识涂改、样本试管破裂等。

2.2
样本保存

2.2.1
接收样本后放置
1-2h
后将样本离心分离出血清或血浆，避免溶血。离心
必须达到
3000rpm 15min
，离心后的血清中不能含有颗粒物和微量纤维蛋白。

2.2.2
样本保存时间：室温（
15-25
℃）下可稳定
48h
，普通冰箱中（2-8
℃）稳
定
7d
，在
-20
℃最多可保存
4
周。避免反复冻融。不可使用热灭活的样本。

2.2.3
已完成测试的样 本保持完整的识别号，置
4-8
℃冰箱内保存
7d
。

2.3
样本采集的注意事项

采血前使受检者保持平静、松弛，避免剧烈活动。


1


医院检验科免疫室

乙型肝炎病毒表面抗
文件编号：

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3
．

检验原理

本试剂盒采用抗< br>-HBs
包被反应板，加入待测样本，经孵育后，加入抗
-HBs-HRP
，< br>当样本中存在
HBsAg
时，
该
HBsAg
与包被抗
-HBs
结合并与抗
-HBs-HRP
结合形成抗
-HBs- HBsAg-
抗
-HBs-HRP
复合物，
加入
TMB
底物 产生显色反应，
反之
则无显色反应。

4
．试剂及其他用品

4.1
试剂：
乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒
（上海科华生物工程股份有限 公司
生产）
，试剂盒药品批准文号：国药准字
S10910114(48
人份
)
；

国药准字
S10910113(96
人份
)
。未打开的试剂盒保存于
2-8
℃，不可冻存。开启的包被反
应板放入干燥剂 密封后在
2-8
℃保存并尽快使用。

4.2
试剂盒组分

微孔反应板
HBsAg
阴性对照

HBsAg
阳性对照

酶结合物

显色剂
A
显色剂
B
终止液

洗涤液

（

蒸馏水
1
：
25
稀释）

封片纸

说明书

4.3
其他试剂及用品

加液器：

型号。

离心机：

型号。

温箱（或水浴箱）
：

型号。

洗板机：

型号。


酶标仪：

型号。

5
．

室内质控与室内质控规则

5.1
质控品：采用卫生部临床检验中心临床免疫室或其他单位提供的免疫质控
血清，浓度
IU/ml
。


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5.2
质控品重建方法：采购来的质控品按每周用量分装
-2 0
℃冻存，复融后充分
颠倒混匀。

5.3
质控品测定：在每一次（板）样本中测定质控血清。

5.4
质控规则：绘制质控图，求出
SD
和
CV
值。

6
．检测步骤

（
1
）

洗涤液配制：

将浓缩洗涤液用蒸馏水（或去离子水）作
1
：
25
稀释。

（
2
）

加样


加入
75
微升待测样本和阴、
阳性对照于反应孔中
（共预留阴性对照
3
孔、
阳性对照
1
孔、建议预留空白对照
1
孔。
）
，用封片纸覆盖反应板后，将
反应板置
37
℃孵育
60
分钟 。

（
3
）

取出反应板，撕去封片，在已加入待测样本和 阴、阳性对照的孔中加入
50
微升酶结合物；在微孔震荡器上震荡
10
秒钟， 或手工轻轻震荡
10
秒
钟
;
用封片纸覆盖反应板后，将反应板置
37
℃孵育
30
分钟。

（
4
）

洗板

手工洗板：弃去孔内液体，用洗涤 液注满各孔，静置
30-60
秒，甩干，
重复
5
次后，在干净的吸水 纸上拍干。

洗板机洗板：采用

洗板机洗板，选择洗涤
5
次程序，用配置的工
作浓度洗涤液注满每孔，每次工作浓度洗涤液在反应微孔
中的停 留时间为
30-60
秒，并确保每次吸净无残留，洗完
后在干净的吸水纸上拍干。
（
5
）

显色

每孔加显色剂
A< br>液、
B
液各
50
微升，充分混匀后封板，置
37
℃< br>
孵育
30
分钟。

（
6
）

终止

每孔加入
50
微升终止液，震荡反应板
5
秒 钟，使之充分混匀。


3