长春人流恊和一流人免疫球蛋白G(IgG) ELISA检测方法及步骤

2021年1月19日发(作者：谢学锦)

人免疫球蛋白
G(IgG) ELISA
检测方法及步骤



人
(Human)
免疫球蛋白
G (IgG) ELISA
检测试剂盒

本试剂仅供研究使用





标本：血清或血浆



试验原理：

IgG
试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验
(ELISA).
已知
IgG
浓度的标准品、未知浓度的样
品加入微孔酶标板内进行检测。先将
IgG
和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲
和素标记过的
HRP
。再经过温育和 洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物
A
、
B
，和
酶结合物同 时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中
IgG
的浓度呈比例关系。



试剂盒内容及其配制

试剂盒成份
(2-8
℃
保 存
)96
孔配置
48
孔配置配制

96/48
人份 酶标板
1
块板
(96T)
半块板
(48T)
即用型

塑料膜板盖
1
块半块即用型

标准品：
80g/L1
瓶
(0.6ml)1
瓶
(0.3ml)
按说明书进行稀稀

空白对照
1
瓶
(1.0ml)1
瓶
(0.5ml)
即用型

标准品稀释缓冲液
1
瓶
(5ml)1
瓶
(2.5 ml)
即用型

生物素标记的抗
IgG
抗体
1
瓶< br>(6ml)1
瓶
(3.0ml)
即用型

亲和链酶素
-HRP1
瓶
(10ml)1
瓶
(5.0ml)
即用型
< br>洗涤缓冲液
1
瓶
(20ml)1
瓶
(10ml)
按说 明书进行稀释

底物
A1
瓶
(6.0ml)1
瓶
( 3.0ml)
即用型

底物
B1
瓶
(6.0ml)1
瓶
(3.0ml)
即用型

终止液
1
瓶
(6.0 ml)1
瓶
(3.0ml)
即用型

标本稀释液
1
瓶
(12ml)1
瓶
(6.0ml)
即用型





自备材料

信息来源环保英才网：





1
．蒸馏水。

2
．加样器：
5ul
、
10ul
、
50ul
、
100ul
、
2 00ul
、
500ul
、
1000ul
。

3
．振荡器及磁力搅拌器等。



安全性
1
．避免直接接触终止液和底物
A
、
B
。一旦接触到这些液体， 请尽快用水冲洗。

2
．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

3
．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。



操作注意事项

1
．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后 的标准品应丢弃，不可保存。

2
．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

3
．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4
．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物
A
、
B
液时，避免使用带金属部分
的加样器。

5
．使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

6
．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

7
．底物
A
应挥发，避免长时间打开盖子。底物
B
对光敏感，避免长 时间暴露于光下。避免
用手接触，有毒。实验完成后应立即读取
OD
值。

8
．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

9
．按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。



样品收集、处理及保存方法

1
、血清
-----
操作过程 中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，
1000×
g
离心
10
分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2
、血浆
-- ---EDTA
、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。
1000×
g
离心
30
分钟去除颗粒。

3
、细胞上清液
---1000×
g
离心
10
分钟去除颗粒和聚合物。

4
、组织匀浆
-----
将组织加入适量生理盐水捣碎。
1000×
g
离心
10
分钟，取上清液

信息来源环保英才网：