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2021年1月19日发(作者：明炳麟)
罗庄区

人民医院

技术操作规程

ABO
和
Rh
（
D
）血型鉴定操作规程

血


库

文件编号：

第


页






共



页

第


版






第


次修改

颁布日期：
2012
年
1
月
1
日


红细胞血型系统最具有临床意义的是
ABO
和
Rh
两大系 统，因此目前要求对所有的患者
进行
ABO
血型及
Rh
血型常规检测 。在
Rh
系统中，
D
抗原的免疫原性最强，
50%~75%
的
Rh
阴
性个体通过输血或妊娠，可受
D
抗原刺激产生抗
- D
，其重要性仅次于
A
和
B
抗原，所以对
Rh
血型 只要求检测
D
抗原。





根据红细 胞上有或无
A
抗原或
B
抗原，将血型分为
A
、
B< br>、
AB
及
O
型
4
种。对
ABO
血型 系
统而言，每个个体针对自身缺乏的
A
、
B
和
H
抗 原，天然地产生相对应的抗体，如
A
型个体红
细胞上缺乏
B
抗原，其 体内含有抗
-B
，
O
型个体缺乏
A
、
B
抗 原，其体内含有抗
-A
和
-B
，孟买
型个体由于红细胞上缺乏
A
、
B
和
H
抗原，所以其体内含有抗
-A
、-B
和
-H
。因此在
ABO
血型
检测中，
要求 同时做正反定型，
即采用已知型特异性的抗体试剂检查红细胞的抗原，
以及用
已知血型 的试剂红细胞检查血清中的抗体，综合两者结果判断血型。





检测红细胞上有无
D
抗原，采用抗
-D
试剂与被检者红细胞反应，如 果出现凝集，表示含
有
D
抗原，为
Rh
阳性，反之为
Rh< br>阴性。

1.1

目的

规范
ABO/R h
（
D
）血型鉴定操作；保证临床用血的安全性及有效性。

1.2

职责

血库技术人员负责
ABO
和
Rh
（
D
）血型鉴定。

1.3

适用范围

适用于血库
ABO
和
Rh
（
D
）血型鉴定血标本。

1.4

所需材料和设备


1.4.1
材料


抗
-A
、抗
-B
、抗
- D
试剂、
A
、
B
、
O
型反定型试剂红细胞、生理盐 水、小试管、
滴管、患者血标本。

1.4.2
设备


普通离心机、显微镜、血型血清学专用离心机。

1.5

操作步骤

1.5.1

将标本离心，使标本血浆
/
血清与红细胞分离，并吸取红细胞配制
3
％悬液。

1.5.2

取小试管
3
支，分别标明抗
-A
、抗
-B
、抗-D
，用滴管分别加抗
-A
、抗
-B
、抗
-D
试剂各
2
滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者
3%
红细胞悬液
1
滴，混匀。

1.5.3

另取小试管
3
支，分别 标明
A
、
B
、
O
细胞，用滴管分别加入受检者血清
2
滴于试管底
部，再分别以滴管加入
3%A
、
B
、
O
型试剂红细胞悬液
1
滴，混匀。

1.5.4

以
1300g
离心
15s
。

1.5.5

将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现
象，如肉眼不 见凝集，应将反应物倒在玻片上，再以显微镜检查。

1.5.6

ABO
血型结果判定（见表
3-1
）
：

表

3-1 ABO
血型结果判断

受检者血清
+
试剂红细胞

分型试剂
+
受检者红细胞（正定型）





受检者












（反定型）

血型


抗
-A
+

抗
-B
-
A
A
细胞




B
细胞




O
细胞

-
+
-
续表

受检者血清
+
试剂红细胞

分型试剂
+
受检者红细胞（正定型）





受检者












（反定型）

血型


抗
-A
-
-
+
注：

“
+
”

凝集；
“
-
”不凝集。


抗
-B
+
-
+
B
O
AB
A
细胞




B
细胞




O
细胞

+
+
-
-
+
-
-
-
-
1.5.7

Rh
（
D
）血型判定：红细胞与 抗
-D
试剂凝集为
Rh
（
D
）阳性；无凝集为
Rh
（
D
）
阴性。

1.5.8

凝集强度判断标准：

4+
红细胞凝集成一大块，背景清晰透明；

3+
红细胞凝集成数小块，背景尚清晰；

2+
红细胞凝块分散成许多小块，背景可见到游离红细胞；

1+
肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞；

±

镜下可见数个红细胞凝集在一块，周围有许多游离红细胞；

混合外观凝集（
Mixed
Field
，
MF
）是指镜下 可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞
仍分散分布；

-
阴性

镜下未见凝集，红细胞均匀分布。

1.6

注意事项


1.6.1

单克隆抗体试剂和试剂细胞（除谱细胞外）每天使用前必须与 相对应的红细胞和血
清作阳性、阴性对照，以检测其活性。

1.6.2
< br>观察结果时既要看有无凝集或溶血现象，更要注意凝集强度，此有助于
A
、
B< br>亚型、
类
B
或顺式（
cis
）
AB
的发现。

1.6.3

人红细胞
ABO
血型检验结果是根据红细胞 的抗原和血清
/
血浆中的抗体反应结果所
决定，
因此正反定型的结果应该一致 。
正反定型起到一个互相验证和质控的作用。
只有正反
定型结果相符才能正确判定ABO
血型。

1.6.4

反定型对
ABO
亚型的发现特别有帮助。原因是亚型患者红细胞上
A
或
B
抗原很弱，通
过正反定型易于发现二者结果不一致，从而引起警惕。

1.6.5

如果 正反定型不一致，则需进一步鉴定。可在正定型试验中增加抗
-A
1
、抗
-A B
及抗
-H
；
反定型试验中增加
A
2
、
O
及自身细胞。
正定型试验中的抗
-AB
是用来确认弱
A
和弱
B
抗原，
抗
-A
1
用来鉴定
A
亚型，抗< br>-H
用于鉴定亚型及孟买型；反定型试验中的
A
2
细胞用于鉴定
A
2
亚
型，
O
型细胞用于鉴定是否存在
ABO
系 统以外的同种抗体影响定型，
自身对照用于鉴定是否
存在自身抗体影响定型。如果是
O
型细胞或自身对照为阳性，则定型结果不可靠，必须进一
步进行血型鉴定。

1.6.6

ABO
正反定型不一致的原因：

1.6.6.1
新生儿尚未形成
ABO
同种抗体，所以三个月内的新生儿只 要求做正定型确定
ABO
血
型。

1.6.6.2
漏加试剂，试剂污染或失效、血标本和试剂搞错等，均可造成假阴性、假阳性结果。

1.6.6.3
器材不洁可产生假阳性结果。

1.6.6.4
分型血清效价太低，亲和力不强等均可使凝集反应强度减弱，易误定血型。

1.6.6.5
红细胞悬液过浓或过淡，导致抗原抗体比例不适当，出现前带或后带现象，易 误判
为假阴性。

1.6.6.6

受检者红细胞上抗原位点过少 （如亚型）或抗原性减弱（见于白血病或某些恶性肿
瘤）以及类
B
或
cisA B
等，均可使凝集反应强度减弱。

1.6.6.7
受检者血清蛋白紊乱（如巨球蛋白血症）或实验温度过高，常引起细胞呈缗钱状排
列。

1.6.6.8
受检者血清中缺乏应有的抗
-A
或抗
-B
，如丙种球蛋白缺乏症，可引起正、反定型不