虾酱怎么做好吃法大全《中国药典》2020版—禽源性病毒荧光定量 PCR(Q-PCR)检查法

2021年1月18日发(作者：柏雪)

2020
年版《中国药典》三部

禽源性病毒荧光定量

PCR
（
Q-PCR
）检查法



本法 适用于禽源性生物制品的检测，包括流感全病毒灭活疫苗、流感病毒裂
解疫苗种子批毒种的外源性禽病毒 检测。本法用提取的供试品

RNA
，反转录成
cDNA

后，或用提取的供试品

DNA
，
针
对

3

种外源性禽病毒设计特异性引物探针，
进行荧光定量

PCR
检测特异性扩增信号，从而测定供试品中外源性禽源病毒核
酸序列，以检查供 试品的外源性禽病毒污染。

要求检测的

3
种禽源性病毒：

（
1
）

禽腺病毒

I
型（
DNA
病毒）

（
2
）

禽腺病毒

III
型（
DNA
病毒）

（
3
）

外源性禽白血病病毒（逆转录病毒）



试剂

（
1
）

RNA/DNA
提取试剂：
RNA/DNA
的提取可使用酚
-
氯仿法、磁珠法、离 心
柱法等。提取试剂中应含裂解液、洗涤液、洗脱液等，按试剂说明书要求配制。

（
2
）

反转录试剂：含逆转录酶、
RNA
酶抑制剂、
dNTP
混合液、随机引物、
逆转录反应缓冲液等，按试剂说明书要求配制。

（
3
）

引物序列、探针序列见表

1
。

表

1
引物序列及探针序列


病毒

外源性禽腺病
毒

I
型

引物、探针序列

上游引物：
5’
- CGCTTACTGCCGTTTAGCT -
3’

下游引物：
5’
- GGCATAGCTTGTCACTTGAATGGT -
3’

探针：
5’
-
（
FAM
）
- CCGCTGACCACGCCAC -
（
NFQ
）
-
3’

外源性禽腺病
毒

III
型

上游引物：
5’
- TGTGTCACATTAATCCCTTTGAAGCT -
3’

下游引物：
5’
- GCAACAGATGAGGTTTGGAAGGATA -
3’

探针：
5’
-
（
FAM
）
- TACCTCCCCGGCTTTG -
（
NFQ
）
-
3’

外源性禽白血
病病毒

上游引物：
5’
- ATCGTGGTATGATCGTGCCTTATTAG -
3’

下游引物：
5’
- GAGTTCGTCCAATCCATGTCAGA -
3’

探针：
5’
-
（
FAM
）
-CCCGTCTGTTGCCTTC-
（
NFQ
）
-
3’