化妆的正确流程EB的染色原理及其相关讨论

2021年1月17日发(作者：雷天觉)
基因分子生物学实验——
EB
的染色原理

溴化乙锭（
Et Br
，
EB
）为芳香族荧光化合物，是一种高度灵敏的嵌入性荧光染色剂，用
于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的核酸。
是一种核酸染料，
常在琼脂糖凝胶电泳中用于核酸染色；是一种强的诱变剂，可能也是一种致癌物或致畸剂。

EB
与核酸的作用原理：

这种扁平分子可以嵌入核酸双链的配对的碱基之间 ，
在紫外线激发下，
未与核酸结合的
溴化乙锭可被激发出橙红色萤光。在与
D NA
或双股
RNA
结合时，萤光强度会增强
20
倍，使
得核 酸电泳后的胶片可以辨识核酸的相对位置。在核酸分子中，
EB
分子插入到两层碱基对
之间，发出红色荧光。在凝胶中加入终浓度为
0.5
μ
g/ml
的
E B
，可以在电泳过程中随时观
察核酸的迁移情况，这种方法使用于一般性的核酸检测。

问题讨论

1
、溴化乙锭
EB
在琼脂糖凝胶电泳中先加与后加的区别？

先加
EB
，染色与电泳同时进行：

a.
加在胶里总体积小，所以比较方便节省；

b.
会导致胶的整体背景稍微高些，比较暗；

c.
长时间、长距离的电泳先加
EB
的话，信号强度会相应下降；

d.
不宜用于核酸分子大小的确定和定量。

原因分析：

EB
带正电荷，中和核酸分子的负电荷，同时由于的他的嵌入增加了核酸分子的刚性，
使迁移速率减 慢，故不宜用于凝胶电泳测定核酸分子的大小。
另外，由于在凝胶中，游离的
EB
分子 向负极泳动，会使样品中前后各带染色不均匀，影响定量。

后加
EB
，染色在电泳完成后：

a
．可以减少污染，无背景色，图较漂亮；

b.
相对浪费时间。

2
、
EB
废物的如何处理？

EB
废物的处理如下：

(1)
对于
EB
含量大于
0.5mg/ml
的溶液，可如下处理：



a.
将
EB
溶液用水稀释至浓度低于
0.5mg/ml
；



b.
加入一倍体积的
0.5mol/L KMnO4
，混匀，再加入等量的
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