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肺炎支原体抗体检测
（被动凝集法）
1.
目的：
规范实验室肺炎支原体抗体检测操作。
2.
范围：
xxxx
院
xxxx
科
3.
测定原理：
将肺炎支原体
（
Mac
株）的细胞膜成分致敏人工载体明胶粒子制造而成。
这种致敏
粒子和样本中的肺炎支原体抗体进 行反应发生凝集，由此可以检测出血清和血浆中的
肺炎支原体抗体，并且用来测定抗体的效价。
4.
标本：
4.1
采用正确医用技术收集血清
/
血浆样本，血浆样本推荐使用肝素钠抗凝血浆，枸橼酸钠
和
EDTA
抗凝剂 。
4.2
样本中的沉淀物和悬浮物，红细胞等其它有形成分可能会影响试验结果，应 离心除去，
并确定样本未变质方可使用。
4.3
严重溶血或脂血的样本不能用于测定。
4.4
样本收集后在 室温放置不可超过
8
小时；如果不在
8
小时内检测需将样本放置在
2 ~8
℃
的冰箱中；若需
48
小时以上保存或运输，则应冻存于
-20
℃以下，避免反复冻融。使用前恢
复到室温，轻轻摇动混匀。
5.
试剂：
珠海丽珠试剂股份有限公司提供的试剂。
5.1
试剂盒在
2
℃—
10
℃储存，防止冷冻，避免强光照射，有效期
1 2
个月。
5.2
试剂盒开启使用后，冷冻干燥品配好后，
2℃—
10
℃保存可使用
7
日，使用前必须做对
照试验。
5.3
试剂组成
5.3.1
血清稀释液（液体）
：用于稀 释样品和复溶致敏粒子和未致敏粒子。
5.3.2
致敏粒子（冷冻干燥）
： 肺炎支原体（
Mac
株）抗原致敏的明胶粒子。使用时加入规定
量的血清稀释液。复溶 后的试剂含有
0.9%
的致敏粒子。
5.3.3
未致敏粒子
（冷冻干燥）
鞣化的明胶粒子冻干制品。
使用时加入规定量的血清稀释液。
5.3.4
阳性对照血清（液体）肺炎支原体（
Mac
株）抗体阳性的兔血清用血清 稀释液
1:10
稀释后的制品。
6.
临床标本测定
6.1
试剂的准备
6.1.1
溶解液（液体）
：按照测定操作规则使用。
6.1.2
血清稀释液（液体）
：按照测定操作规则使用。
6.1 .3
致敏粒子（冷冻干燥）
：加入一定量的溶解液进行调制。请在使用前
30
分钟于室温
（
15~30
℃）
下进行调制。
6 .1.4
未致敏粒子（冷冻干燥）
：加入一定量的溶解液进行调制。请在使用前
30< br>分钟于室温
（
15~30
℃）
下进行调制。
6.1.5
阳性对照血清（液体）
：按照操作规则使用。
6.2
手工操作步骤
6.2.1
用微量滴管将血清稀释液滴入微量反应板第1
孔中，
共计
4
滴
（
100ul
）
，
从第
2
孔至
第
8
孔（或更多）各滴入
1
滴 （
25ul
）血清稀释液。
6.2.2
用微量移液管取样品25ul
至第
1
孔中，然后用微量加样器或微量移液管以倍比稀释
的方式 从第
1
孔稀释至第
8
孔中（或更多）
。
6.2. 3
用试剂盒中提供的滴管在第
2
孔中加入
1
滴
(25ul)
未致敏粒子，用另一个滴管向第
3
孔至第
8
孔（或更多）各加入1
滴（
25ul
）致敏粒子。
6.2.4
用平板混匀 器以不会导致微量反应板中的检测物溅出的强度混合
30
秒钟，加盖后于
室温（
15~30
℃）下水平静置。
3
个小时后，在观察镜上记录并观察其反应图像，即使 静置
至次日也不影响结果的判定。
孔号
血清稀释液
(ul)
样品（
ul
）
样品稀释倍数
致敏粒子（
ul
）
最终稀释倍数
1
100
25
1:5
2
25
25
25
3
25
25
25
4
25
25
25
5
25
25
25
6
25
25
25
7
25
25
25
8
25
25
25
1:10
1:20
1:40
1
：
80
1:160
1:320
1:640
未致敏粒子（
ul
）
1:20
1:40
1:80
1:160
1:320
1:640
1:1280
进行混合，盖上盖子后静置反应
3
个小时
判定结果
6.3
对照试验
6.3.1
能够确 认每例样品未致敏粒子的反应（最终稀释倍数
1:20
）均是（
-
）
6.3.2
能够确认每次检查中血清稀释液和致敏粒子以及未致敏粒子的反应均是（
-
）
（介质对
照）
。
6.3.3
每个试剂盒中的阳 性对照血清都要与样品用相同的测定方法进行试验，
阳性对照血清
调制成抗体效价为
1
：
320
（最终稀释倍数）
。
孔号
血清稀释液
样品
样品稀释倍数
致敏粒子（
ul
）
最终稀释倍数
1
2
50
25
3
25
25
25
4
25
25
25
5
25
25
25
6
25
25
25
7
25
25
25
8
25
25
25
1:10
1:20
1:40
1
：
80
1:160
1:320
1:640
未致敏粒子（
ul
）
1:20
1:40
1:80
1:160
1:320
1:640
1:1280
进行混合，盖上盖子后静置反应
3
个小时
判定结果
6.4
吸收操作
对于未致敏粒子和致敏粒子均显示
（± ）
以上的凝集样品，
要按照下列顺序在完成吸收操作
的基础上进行再试验。
6.4.1
取用
450ul
的血清稀释液调制好的未致敏粒子加入小试管中。
6.4.2
加入样品
50ul
混合，于室温（
15~30
℃）下放置
30
分钟（孵育期间混合一或两次）
。
6.4.3
离心分离
（
2000rpm
，
5
分钟 ）
，然后分取上清液【吸收完毕的稀释样品
（
1:10
）
】
50ul
至反应板第
2
孔中，特别注意不要混入粒子。
6.4.4
从第
3
孔以后，要预先各滴入
25ul
血清稀释液，从第
3
孔至最后一孔用微量加样器
倍比稀释。
以后就与检验方法中样品检测同样的操作后进行 判定。
通常情况下可以用上述的
吸收操作吸收完全，但如果吸收不干净时，请用其他的检测方法 。
7.
性能指标
:
7.1
特异性试验：将室内参考品按 照规定程序进行试验时，阴性参考品显示阴性结果，阳性
参考品显示阳性结果。
7 .2
灵敏度试验：试剂盒中带有的阳性对照血清按规定进行试验时，抗体的效价相对于标准
值（ 最终稀释倍数
1:320
）在±
1
管内。
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