百色市试管婴儿细菌反应

2021年1月15日发(作者：试管取卵过后可以同房吗)
实验十一 细菌的生理生化反应
V．P．反应、甲基红试验、吲哚试验、糖发酵试验

一.实验目的与内容
二.实验材料和用具
三.操作步骤
四. 注意事项
五. 演示
六. 实验报告
七. 问题和思考

一.实验目的与内容

目的：
了解细菌鉴定中常用的主要生理生化反应试验法及其原理。
内容：
1．比较4种菌的V．P．反应(Voges—Prokauer反应或
称乙酰甲基甲醇试验)结果。
2．比较4种菌的甲基红反应结果。
3．比较4种菌的吲哚反应结果。
4．学习如何使用杜氏小管进行糖发酵试验，并比较3
种菌的糖发酵试验结果。

二.实验材料和用具
１.大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌
的斜面菌种。
2.葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培
养基(葡萄糖、乳糖或蔗糖)、40％NaOH溶液、肌酸、
甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、1．6％溴甲酚紫指示
剂。
3.超净工作台、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅、试管、
移液管，杜氏小管。
三.操作步骤
3.1V.P.反应
1．试管标记 取5支装有葡萄糖蛋白胨水培 养基的试管，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、
普通变形菌，枯草芽孢杆菌和空白对照。
2．接种培养 以无菌操作分别接种少量菌苔至以上相应试管中，空白对照不接菌。置37℃
恒温箱中 ，培养24～48h。
3．观察记录取出以上试管，振荡2min。另取5支空试管相应标记菌名， 分别加入3～5mL
以上对应管中的培养液，再加入40％NaOH溶液10～20滴，并用牙签挑入约 0.5～lmg微量
肌，振荡试管，以使空气中的氧溶入，放在37℃恒温箱中保温15～30
min后，若培养液呈红色，记录为V．P．试验阳性反应(用“+表示)；若不呈红色，则记录
为V ．P．试验阴性反应(用“-”表示)。
注意：原试管中留下的培养液供作甲基红试验用。
三.操作步骤
3.2甲基红试验
于V．P．试验留下的培养液中，各加入2～3滴 甲基红指示剂，注意沿管壁加入，仔细观察
培养液上层，若培养液上层变成红色，即为阳性反应，若仍呈 黄色，则为阴性反应，分别用
“+”或“一”表示。
三.操作步骤
3.3吲哚试验
1．试管标记 取装有蛋白胨水培养基的试管5支，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通
变 形菌、枯草芽孢杆菌和空白对照。
2．接种培养 以无菌操作分别接种少量菌苔到以上相应试管中， 第5管作空白对照不接种，
置37℃恒温箱中培养24~48h。
3．观察记录在培养基中加入乙醚1 2mL，经充分振荡使吲哚萃取至乙醚中，静置片刻后
乙醚层浮于培养液的上面，此时沿管壁缓慢加入5～10滴吲哚试剂(加人吲哚试剂后切勿摇
动试管，以 防破坏乙醚层影响结果观察)，如有吲哚存在，乙醚层呈现玫瑰红色，此为吲哚
试验阳性反应，否则为阴 性反应，阳性用“+阴性用“-”表示。
三.操作步骤
3.4糖发酵试验
可根 据细菌分解利用糖能力的差异表现出是否产酸产气作为鉴定菌种的依据。是否产酸，可
在糖发酵培养基中 加入指示剂溴甲酚紫(即B．C．P指示剂，其pH在5．2以下呈黄色，pH
在6．8以上呈紫色)， 经培养后根据指示剂的颜色变化来判断。是否产气，可在发酵培养基
中放人倒置杜氏小管观察。
三.操作步骤
3.4糖发酵试验
1．试管标记 取分别装有葡萄糖、蔗糖和乳糖 发酵培养液试管各4支，每种糖发酵试管中
均分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌和空白对照。
2．接种培养 以无菌操作分别接种少量菌苔至以上各相应试管中，每种糖发酵培养液的空
白 对照均不接菌。将装有培养液的杜氏小管倒置放入试管中置37℃恒温箱中培养，分别在
培养24h、4 8h和72h观察结果。
不产气 产气

三.操作步骤
3.4糖发酵试验
3．观察记录 与对照管比较，若接种培养液保持原有颜色，其反应结果 为阴性，表明该菌
不能利用该种糖，记录用“-”表示；如培养液呈黄色，反应结果为阳性，表明该菌能 分解
该种糖产酸，记录用“+”表示。培养液中的杜氏小管内有气泡为阳性反应，表明该菌分解
糖能产酸并产气，记录用“⊕”示；如杜氏小管内没有气泡为阴性反应，记录用“☉”表示。
四. 注意事项
1．V．P．反应中加入NaOH溶液和肌酸后要反复振荡试管，使
空气中氧溶人培养液中。
2．甲基红试验中，不要过多滴加甲基红指示剂，以免出现假
阳性反应。
3．吲哚试验中宜选用色氨酸含量高的蛋白胨(用胰蛋白酶水解
酪素，得到的蛋白胨中色氨酸含量较高)配制蛋白胨水培养
基，否则将影响产吲哚的阳性率；在加入吲哚试剂后切勿摇
动试管，以免破坏乙醚层而影响结果。
4．在糖发酵试验的培养管中装入倒置杜氏小管时，注意防止
小管内有残留气泡。灭菌时适当延长煮沸时间可除去管内气
泡。
五. 演示
1．杜氏小管倒置装入培养液管中不残留气泡的操作
过程。
2．分别显示V．P．反应、甲基红试验、吲哚试验和
糖发酵试验培养液阳性反应和阴性反应结果的颜
色变化情况。
六. 实验报告
1．细菌生理生化反应试验测定结果：

七. 问题和思考
1.以上生理生化反应能用于鉴别细菌，其原理是什么?
2.细菌生理生化反应试验中为什么要设有空白对照?
3.现分离到一株肠道细菌，试结合本实验学到的知识
设计一个试验方案进行鉴别。