试管婴儿一般多少钱诊断学试验指导

2021年1月13日发(作者：双方地贫第三代试管)
实验一、活化凝血时间测定

【实验原理】 同试管法CT测定。试验中加入白陶土-脑磷脂的悬液以充分激活因子Ⅻ
和Ⅺ，并为凝血反应提供丰富的 催化表面，故称为活化凝血时间（ACT）；还可以避免因接触
激活阶段的不同结果带来的影响，从而提 高了本试验的敏感性和重复性。
【试剂】
1．脑磷脂的制备 脑磷脂是将兔脑粉 中的组织凝血活酶除去参与外源凝血途径的蛋白
部分后所得的磷脂，故又称部分凝血活酶。取干燥兔脑粉 1.2g加25ml丙酮，放置2h后过
滤，将此兔脑粉加氯仿25ml，连续震荡2h，以滤纸过滤， 滤液蒸发后为淡黄色蜡状物，刮
入玻璃研钵中，加12ml生理盐水研磨成均匀乳剂，以每安瓶0.25 ml分装。
2．4%白掏土悬液 白陶土2g加入50ml生理盐水中，室温保存，用前摇动。
3．4%白陶土-脑磷脂悬液 将脑磷脂用巴比妥缓冲液作1：50稀释后，再加等量4%白
陶土悬液混合而成。4C可保存3天，用时 充分混合。
4．巴比妥缓冲液 巴比妥钠11.75g、NaCl14.67g、0.1m olL的HCl430ml，加蒸馏水
至2000ml。此缓冲液pH应为7.3，否则影响试验稳定性 。
【操作方法】
1．在含4%白陶土- 脑磷脂悬液0.2ml的试管中注入受检全血0.5，轻轻混匀。
2．其余操作同试管法CT测定。
【参考值】 1.70±0.76 (1.14～2.05)min。
【临床意义】
1．同试管法CT测定，但较其敏感，重复性也较好，可检出因子Ⅷ：C小于45%的亚临
床型血友病。
2．是监测体外循环肝素用量的良好指标之一。

ο
白陶土部分凝血活酶时间（KPTT）测定

【实验原理】 白陶土可 激活凝血因子Ⅺ和Ⅻ。部分凝血活酶即脑磷脂可代替血小板3
因子，也可加速因子X的活化。白陶土部分 凝血活酶和钙离子的存在下，测定血浆凝固所需
时间，故该试验是白陶土脑磷脂的复钙时间，为内源性凝 血系统较敏感和常用的筛选试验。
【试剂】
1．部分凝血活酶的制备 取干燥兔脑 粉1.2g，加丙酮25ml，放室温下2h，过滤；取
其滤液置烧杯中，室温蒸发成黄色腊状物，刮入 玻璃研钵内，加12ml生理盐水，研磨成均
匀乳剂，每安瓶0.25ml分装，冰箱保存备用。
２．４０gL白陶土生理盐水悬液 取白陶土２ｇ，加生理盐水50ml，室温保存，用前
摇匀。
３．白陶土部分凝血活酶悬液 上述部分凝血活酶用巴比妥缓冲液做1∶5稀释，加等
量的４０gL白陶土悬液混合而成，冰箱内可保存 一周。
4． 0.25molL CaCl
2
溶液 。
【操作方法】
１．取0.1molL草酸钠抗凝液0.2ml，加静脉血1.8ml，离心分离血浆。
２．取血浆0 .1ml，加白陶土部分凝血活酶悬液0.1ml，摇匀，置37℃水箱内温育3min
（其间轻轻振荡 ）。
3．加入0.025molL CaCl
2
溶液 0.1ml，立即开动秒表， 置水浴箱内不断振荡，且仔细
观察，至出现纤维蛋白丝时，记录时间，即为KPTT值。
【质量控制】
1．标本应及时检查，最迟不能超过2h。分离血浆应以3000rmin以除 去血小板。血浆
加白陶土部分凝血活酶后激活时间不得少于3min。
2．白陶土质量可影响测定结果。若正常对照延长，提示白陶土部分凝血活酶悬液质量
不佳。
【临床意义】 KPTT较正常（35～45s）对照延长10s以上有意义。本试验较CT敏感，
凡参与血浆凝血活酶生成的各种因子缺乏时，均可引起KPTT延长，尤其Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ因子含
量 减少所致的各种血友病时多见延长，能检出因子Ⅷ∶C <25%的轻型血友病。凝血酶原、纤
维蛋白原 严重减少以及有抗凝物质存在时亦可延长。也可作为血友病治疗和抗凝药物治疗过
程中的观察指标之一。 KPTT缩短见于DIC高凝期、血小板增多症等。

活化部分凝血活酶时间测定

【实验原理】 在抗凝血中，加入足够量的活化接触因子激活剂（如白陶土）和部分凝
血活酶 （代替血小板的磷脂），再加入适量的钙离子即可满足内源凝血的全部条件。从加入
钙离子到血浆凝固所 需的时间即称为活化部分凝血活酶时间（activated partial
thromboplastin time,APTT）。APTT的长短反映了血浆中内源凝血系统凝 血因子（Ⅻ、Ⅺ、
Ⅸ、Ⅷ）、共同途径中凝血酶原、纤维蛋白原和因子Ⅴ、Ⅹ的水平。本试验是目前最常 用的
检查内源凝血系统敏感的筛选试验。
【试剂】
1．受检血浆 以0.109 molL枸橼酸钠溶液1:9抗凝，3000rmin，离心5～10min，获
贫血小板血浆。
2．4%白陶土-脑磷脂悬液（同ACT）。
3．0.025molL氯化钙溶液。
【操作方法】
1．受检血浆、白陶土- 脑磷脂悬液各0.1ml，混匀，37C水浴3min，其间轻轻振摇数
次。
ο
2． 加入0.025molL氯化钙溶液0.1ml，立即启动秒表，不停振摇并观察出现纤维蛋白
丝的时间 。重复2次，取平均值，同时作正常对照。
【参考值】
男性：37±3.3(31.5～43.5)s。
女性：37.5±2.8(32～43)s。
受检者的测定值较正常对照延长超过10s以上才有病理意义。
【质量控制】
1．抗凝剂与血液的比例要准确，抗凝剂过多或抽血不足都可使结果假性延长。如红细
胞压积大于50%，则血浆中抗凝剂浓度增高，APTT就会假性延长；相反，如红细胞压积小于
20% ，则APTT就会假性缩短，应适当增加抗凝剂用量。
2．标本放置不宜超过3h，温育时间不宜少于3min。
3．分离血浆时，离心速度和时间 要够，务必除去血小板，特别是用于肝素治疗监测时，
因为残留血小板中PF
4
可影响 肝素的效应。并且此时最好用塑料管收集血液，以免玻璃管引
起血小板释放PF
4
。
4．若正常对照延长，应重新配制试剂。
5．APTT测定因所用的激活剂不同，以及部分凝 血活酶来源及制备的不同，均可影响测
定结果。部分凝血活酶（磷脂）主要来源于兔脑组织（脑磷脂）。 不同制剂质量不同，一般
选用对因子Ⅷ：C、Ⅸ和Ⅺ在血浆浓度为200～250UL时敏感的试剂。
6．APTT是一个较为敏感且简便的试验，可替代普通试管法凝血时间测定或血浆复钙时
间测 定。用自动血液凝固仪测定APTT，可提高检测速度和结果精确性，但仪器本身也会产
生一定误差， 1995年国际血栓与止血委员会（International Committee of Thrombosis and
Haemostasis,ICTH）和ICSH已开始合作研究应用 APTT监测肝素治疗时的标准化问题。
【临床意义】 基本与凝血时间意义相同，但敏感性高。目 前所用的大多数APTT测定
方法，凡当血浆凝血因子低于正常水平的15%～30%即可异常。
1．APTT延长 （超过正常对照10s以上）主要用于发现轻型的血友病。虽可检出因子
Ⅷ：C水平低于25%甲型血友病，但对亚临床血友病（因子Ⅷ大于25%）和血友病携带者敏
感性欠佳 。结果延长也见于因子Ⅸ（血友病乙）、Ⅺ和Ⅻ缺乏症；血中抗凝物如凝血因子抑
制物或肝素水平增高时 ；当凝血酶原、纤维蛋白原及因子Ⅴ、Ⅹ缺乏时也可延长，但敏感性
略差；其他尚有肝病、DIC、大量 输入库存血等。
2． APTT缩短 见于DIC，血栓前状态及血栓性疾病。
3．肝素治疗的监护 APTT对血浆肝素的浓度很为敏感，故是目前广泛应用的实验室监
护指标。此 时，要注意APTT测定结果必须与肝素治疗范围的血浆浓度呈线性关系，否则不
宜使用。一般在肝素治 疗期间，APTT维持在正常对照的1.5～3.0倍为宜。

血浆凝血酶原时间（PT）测定

【实验原理】 在受检血浆中加入过量的组织凝 血活酶和适量的钙离子后，测其凝固时
间为PT。是反映血浆中凝血酶原、因子V、Ⅶ、X及纤维蛋白原 的试验，也是外源性凝血系
统常用的筛选试验之一。
【试剂】
1．兔脑粉浸出液 取150mg干燥兔脑粉，置于试管中，加生理盐水2.5ml，放入37℃
水浴，充分搅拌10min ，并置其水浴中备用。
2．0.025molL CaCl
2
溶液。
【操作方法】
1．在试管中加入109mmolL枸橼酸钠或0.1molL草酸钠溶液 0.2ml，然后加受检血
1.8ml混匀，低速离心，分离血浆。
2．取小试管1支，加入 血浆和兔脑粉浸出液各0.1ml，37℃预温，再加入0.1mlCaCl
2
溶液37℃预温 ，立即开动秒表，不断倾斜试管，至液体流动停止所需时间，即为凝血酶原
时间。重复操作2～3次，取 平均值，并作正常对照。
【参考区间】 12～14s（一期法）
【质量控制】
1．抽血要顺利，抗凝要充分，否则PT延长。
2．采血后宜在1小时内完成，置冰箱保存不能超过4h。
3．试验温度要恒定于37℃±1℃，否则影响结果。
【临床意义】
凝血酶原时间延长（超过正常对照3s以上）见于：
1．先天性凝血因子异常，如Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ 、Ⅶ、Ⅹ因子之一或两种以上异常时。但单一
凝血因子异常时，其活性要减少到一定水平，PT才延长。 如因子I要<1000mgL，Ⅶ<5%，
Ⅱ、Ⅶ、Ⅹ要<10%。
2．后天性凝血因子异常 ，如严重肝病、维生素K缺乏（慢性胃肠疾患、阻塞性黄疸）、
纤溶亢进、DIC后期、血液中抗凝物质 增多及使用抗凝药物，如双香豆素类等。
凝血酶原时间缩短 见于DIC早期及血栓性疾病，如心肌梗塞、脑血栓形成、急性血栓
性静脉炎等。
PT测定通 常用于以下三种情况：（1）出血性疾病的病情观察和出血及手术时应补何种
凝血因子的检查；（2）用 于检查肝合成维生素K依赖因子（因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅹ）是否减少，是
维生素K缺乏、肝脏病的一项检查指标 ；（3）用于缺血性心脏病（如心肌梗塞）和人工瓣膜
使用者，在应用双香豆素等口服抗凝剂进行抗凝治 疗时的监控项目。

实验三十五、凝血酶时间测定
（TT）

【实验原理】 凝血酶可使纤维蛋白原转变为纤维蛋白。在血浆中加入“标准化”的凝
血酶后，血浆凝 固所需时间称为凝血酶时间。
【试剂】
1．0.1 molL草酸钠溶液。
2．凝血酶溶液 用生理盐水调至使正常血浆在16-18s凝固为标准。
【操作方法】 取抗凝血浆0.1 ml于小试管内，置37℃水浴中，加凝血酶溶液0.1ml，
同时开动秒表，记录凝固时间。重复2- 3次，求平均值。
【质量控制】 血浆在室温下放置不能超过3h，EDTA盐和肝素抗凝 血不宜做本试验。
TT终点以出现混浊的初期凝固为准。
【临床意义】 正常为16-18 s，超过正常对照3s为异常。TT延长见于肝素增多或类
肝素抗凝物质存在，如SLE、肝病、肾病等 ；低（无）纤维蛋白原血症、FDP增多、DIC等。