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需氧或兼性厌氧革兰阳性杆菌及检验

作者:陕西保健网
来源:http://www.xapfxb.com/yuer
更新日期:2021-01-13 18:27

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2021年1月13日发(作者:小孩子鼻炎有什么症状)
第二十三章 需氧或兼性厌氧革兰阳性杆菌及检验

本章考点:
1.概述:概念
2.棒状杆菌属(白喉棒状杆菌)、炭疽芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、产单核李斯特菌
●生物学性状
●临床意义
●微生物学检查
常见的与临床有关的需氧革兰阳性杆菌有 棒状杆菌属、芽胞杆菌属、李斯特菌属、丹毒丝菌属、加特
纳菌属。上述菌属的主要区别见表5-23- 1。
表5-23-1 革兰阳性杆菌属的鉴别

形态
触酶
动力
对氧
G+Cmol%

一、棒状杆菌属
(一)简述:
棒状杆菌属是①一群革兰阳性杆菌,菌体粗细、长短不一,一端或两端膨大呈棒状. 故名棒状杆菌。②
本菌着色不匀,有异染颗粒。③无鞭毛、无荚膜、无芽胞。(无特殊结构)④需氧,⑤ 营养要求较高,能
分解一些糖类,产酸不产气。本属细菌种类较多,有白喉棒状杆菌、假白喉棒状杆菌、 干燥棒状杆菌、溃
疡棒状杆菌等。引起人类致病的主要是白喉棒状杆菌,棒状杆菌除白喉棒状杆菌外,其 余统称为类白喉棒
状杆菌,大多数为条件致病菌。
(二)白喉棒状杆菌
1.生物学特征
(1)形态与染色:菌体细长微弯,一端或两端膨大的革兰阳性杆菌,大小为(2 ~5)μm×(0.5~1.0)
μm。无荚膜、无芽胞、无鞭毛、无菌毛。细菌排列呈散在L、V、Y 字形及不规则栅栏状。
染色特点:在细菌的一端或两端有浓染的颗粒,和菌体着色不均匀,称为异 染颗粒,这是白喉棒状杆
菌的形态学特征,对鉴别细菌有重要意义。
美蓝染色菌体着色不均匀,呈现着色深浅相间的节段或着色较深的颗粒;
Neisser(奈瑟)染色,菌体染成黄褐色,颗粒被染成紫黑色;
Albert(阿培特)染色,菌体呈蓝绿色,异染颗粒蓝黑色。
棒状杆菌属
棒状
+
-
51~65
芽胞杆菌属
杆菌有芽胞
+
V
32~69
李斯特菌属
+
+
兼性厌氧
36~38
丹毒丝菌属 加特纳菌属
-
-
兼性厌氧
36~40
-
-
兼性厌氧
42~44
短杆、链或丝状 细杆或线状 杆菌、多形性
需氧、兼性厌氧 需氧、兼性厌氧



(2)培养特性:需氧或兼性厌氧,生长最适温度为35℃~37℃,pH为 7.2~7.8。营养要求高,常用
下列培养基进行分离培养。
1)血液琼脂平板:灰白色S型菌落,有狭窄的β溶血环。
2)吕氏(Loeffler)血清斜 面培养基:生长迅速,10~18h形成灰白色、湿润、S型菌落。涂片染色
形态典型,异染颗粒明显。
3)亚碲酸钾血琼脂:本菌能在亚碲酸盐琼脂平板上能还原碲盐为元素碲,使菌落呈黑色。可作为鉴 别
依据。
4)液体培养基:除重型白喉杆菌形成菌膜和沉淀外,其他为浑浊生长。
(3)生化反应:本菌触酶试验阳性,氧化酶试验阴性。能分解葡萄糖、麦芽糖、果糖、半乳糖,产 酸
不产气。不分解乳糖,极少分解蔗糖。能还原硝酸盐,不液化明胶,不产生吲哚,不分解尿素。
根据亚碲酸钾血琼脂培养基、肉汤培养基的生长特点及生化反应,可将本菌分为轻、中、重三型。在
我国以轻型多见。分型与所致疾病的严重程度无关,可用于流行病学调查。
2.致病性
致病物质:白喉杆菌的致病因素为白喉外毒素,抗原性强,毒性剧烈。K抗原(表面抗原)及索状因 子
亦与其致病力有关。
临床意义:白喉棒状杆菌可引起人类白喉,白喉是一种急性呼吸道 传染病。该病原菌存在于患者及带
菌者的鼻咽腔中,随飞沫或污染的物品传播。白喉棒状杆菌可致气管、 支气管假膜,是白喉早期死亡的主
要原因。菌一般不侵入血流,但其产生的大量外毒素可吸收人血,引起 毒血症。毒素能与敏感的心肌、肝、
肾、肾上腺等组织细胞及外周神经,尤其与支配咽肌和腭肌的神经结 合,引起细胞变性、坏死、内脏出血
和神经麻痹等严重损害,是白喉晚期死亡的主要原因。
白喉棒状杆菌引起白喉,多在秋冬季节流行。以咽白喉最常见,喉白喉及鼻白喉次之,偶亦引起眼结

膜、外耳道、阴道及皮肤的局部病变。
免疫性:白喉的免疫主要是抗毒素免疫,同时巨噬细胞吞噬消化能力也加强。
调查人群在感染或计划免疫后对白喉是否产生免疫力,可用锡克试验或致敏红细胞凝集试验。
3.微生物学检验
(1)标本采集:用无菌长棉拭子,从可疑的伪膜边缘采集分泌物,未见伪膜的 疑似患者或带菌者可采
集鼻咽部或扁桃体黏膜上的分泌物。若为培养,应在使用抗生素或其他抗菌药物前 采集双份标本。如不能
立即送检,应将标本浸于无菌生理盐水或15%甘油盐水中保存。
(2)检验方法及鉴定
1)直接镜检:将标本涂于2~3张载玻片上,分别作革兰染色和异染颗粒 染色(奈瑟法或阿培特法)。
镜检如见革兰阳性形态典型的棒状杆菌,并有明显的异染颗粒,可初步报告 “检出形似白喉棒状杆菌”。
2)分离培养:将另一份标本接种下列培养基。①吕氏血清斜面:本 菌在此培养基上生长较标本中的杂
菌迅速,于35℃培养8~12h后,即形成灰白色的菌落,而其他杂 菌则尚未形成菌落。本菌在甘油吕氏血清
斜面上形成的异染颗粒更为明显;②亚碲酸钾血琼脂平板:经3 5℃培养24~48h,观察菌落特点。在此培
养基上,大部分杂菌被抑制,白喉杆菌则生长缓慢,故应 结合吕氏血清斜面培养基进行观察。
吕氏血清斜面培养基
+
-
+
-

(3)生化反应:主要用于鉴别白喉棒状杆菌与类白喉棒状杆菌。尿素分解 试验:白喉棒状杆菌(-),
类白喉棒状杆菌(+)。
(4)毒力试验:可作为鉴定致病 菌株的重要依据。试验方法分体外法和体内法两大类。体外法有双向
琼脂扩散法(作琼脂平板毒力试验, Elek平板毒力测定)、SPA协同凝集试验、对流免疫电泳;体内法可
用豚鼠作毒素中和试验。
5.治疗原则:用青霉素或红霉素等进行抗感染治疗,同时应尽早注射足量白喉抗毒素。注射抗毒索 前,
应做皮试。
(二)其他棒状杆菌
棒状杆菌除白喉棒状杆菌外,其余统 称为类白喉棒状杆菌。此类细菌种类多,一般无致病性或仅能与
其他化脓细菌产生混合感染,有的可能为 条件致病菌。类白喉棒状杆菌常寄生于人类或动物鼻腔、咽喉、
外耳道、眼结膜、外阴及皮肤表面等处。 临床标本中较常见的类白喉杆菌有溃疡棒状杆菌、假白喉棒状杆
菌、干燥棒状杆菌、溶血棒状杆菌、化脓 棒状杆菌等。

二、芽胞杆菌属
芽胞杆菌属是①一大群需氧,能产生芽胞 的革兰阳性大杆菌。②大多数菌种在有氧环境下形成芽胞。
③有动力(除炭疽芽胞杆菌),④非抗酸性, ⑤营养要求不高。
它们广泛分布于空气、土壤、尘埃及腐烂物中,绝大多数为腐生菌,许多菌种成 为实验室等环境的污
染菌。少数寄生于动物或昆虫并对人类及动物致病,其中炭疽杆菌是人畜共患的重要 致病菌,蜡样芽胞杆
菌能致食物中毒。
(一)炭疽芽胞杆菌
炭疽芽胞杆菌主要引起食草动物患炭疽病,也可经一定途径感染人类,为人畜共患的急性传染病。
1.生物学特性

亚碲酸钾血琼脂平板
+
+
-
-
报告
+
+
可疑
(72h后)-
(1)形态与 染色:是致病菌中最大的革兰阳性杆菌,约(5~10)μm×(1~3)μm。两端齐平,呈
竹节状。 在组织内生长呈单个或短链,试管内可形成长链,无鞭毛,机体内或含血清培养基上可形成荚膜。
人工培 养或在外界环境中易产生芽胞,形状椭圆,位于菌体中央,其直径小于菌体。
(2)培养特性:专性需氧,在普通培养基上生长良好。生长适温35℃~37℃,pH7.0~7.4。
在普通琼脂平板上经37℃,18~24h培养后,形成灰白色、不透明、无光泽、边缘不整齐、大 而扁平
的粗糙型菌落,在低倍镜下观察,呈卷发状。
在血液琼脂平板上,35℃培养24h后出现轻微溶血。
在普通肉汤中培养后,管底有絮状卷绕成团的沉淀物生长,表面稍混但不形成菌膜,中层肉汤清亮。
有毒株在碳酸氢钠琼脂平板上,置于5%C0
2
环境中37℃培养24h后,形成粘稠、有光泽 的粘液型(M型)
菌落,这是有荚膜的菌体构成的。无毒株的菌落仍保持粗糙型(R型)。
(3)生化反应:本菌能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖,产酸不产气。能水解淀粉,不分解乳糖,不产生
靛 基质及H
2
S。能迟缓液化明胶,沿穿刺线向四周扩散,形如倒松树状。触酶阳性。
(4)抗原构造:抗原包括①菌体多糖抗原;②荚膜多肽抗原;③芽胞抗原;④炭疽毒素抗原。
(5)本菌芽胞体抵抗力很强,煮沸10min或干热140℃ 3h,高压蒸气121.3℃,15min才能 杀灭。在
干燥土壤或皮毛中常温下可存活数十年。一般对碘及氧化剂较敏感。
2.致病性:炭疽的两个毒力因子-荚膜和炭疽毒素。炭疽毒素是致死的主要因素。
炭疽芽胞杆菌 可经皮肤、呼吸道和胃肠道侵入机体引起炭疽病。临床类型有皮肤炭疽、肺炭疽、肠炭
疽,病死率很高。
免疫性:病后可获得持久性免疫力,再感染者少见。主要是产生特异性抗体和吞噬细胞的吞噬作用加
强所致
3.微生物学检查
(1)标本采集:皮肤炭疽取病灶分泌物;肺炭 疽采取痰液;肠炭疽采取粪便;炭疽脑膜炎采取脑脊液;
各型炭疽均可采取血液。
(2) 检验方法及鉴定:炭疽杆菌的检查要特别注意芽胞型的实验室感染,故应有专门防护的实验室,
并对用过 的器具、检材等进行严格的消毒处理。
1)直接镜检:将可疑材料涂片,组织标本可作压印片,用 1:1000的升汞固定5min,再行革兰染色和
荚膜染色。镜检发现有荚膜的革兰阳性竹节状大杆菌 ,可初步诊断。荚膜荧光抗体染色,链状或竹节状大
杆菌周围有发荧光的荚膜者为阳性。
2)分离培养:一般标本接种血平板,37℃培养维持24h后观察菌落特点。
3)动物试验:将 标本或培养物制成悬液,皮下接种于豚鼠(1ml)或小白鼠(0.2ml)。均可引起败血
症,并于1 ~3日后死亡。内脏和血液中存在大量有荚膜的细菌。
4)鉴定试验:①串珠试验:炭疽芽胞杆菌 在每毫升含0.05~0.5IU青霉素的肉汤培养基中,可发生形
态变异,形成大而均匀的圆球形并相 联如串珠状;而类炭疽及其他需氧芽胞杆菌则无此现象。本试验鉴别
意义较大;②噬菌体裂解试验;③重 碳酸盐毒力生长试验:将待检菌接种于含0.5%碳酸氢钠和10%马血清
琼脂平板上,置10%C0< br>2
环境下,37℃培养24~48h,观察菌落形态,有毒力的炭疽芽胞杆菌能产生大量的谷氨酸物质,形成荚膜,菌落呈M型;无毒力芽胞杆菌不形成荚膜,呈R型菌落;④青霉素抑制试验:在含10、100U/ml青霉素的平板上受抑制而不生长;⑤植物凝集素试验(菌体多糖是植物凝集素受体)。
5)判定标准:革兰阳性、两端平整、竹节状成双或呈短链排列,有荚膜之粗大杆菌,或荚膜肿胀试 验
阳性,串珠试验阳性;重碳酸盐毒力试验出现M型菌落可作出诊断。
(二)蜡样芽胞杆菌
1.生物学性状及临床意义:G阳性大杆菌,芽胞位于菌体中心或次末端不突 出菌体。引起食物中毒的菌
株多为周毛菌,有动力,不形成荚膜。能耐受接100℃ 30min。呈链状排列。营养要求不高,菌落较大,表

面粗糙似毛玻璃状或融腊状,故名蜡 样杆菌。在血琼脂平板上呈β溶血。食物中如被大量的蜡样杆菌污染
(10~10/g)可致食物中毒, 有腹泻型与呕吐型之分。
2.微生物学检查:除作分离培养外,细菌计数对本菌所致食物中毒有诊 断价值,因暴露于空气中的食
品均在一定程度上受本菌污染。食物中毒菌株的游离芽胞耐受100℃30 min,而于热l20℃经60min才能杀
死。

三、产单核李斯特菌
产单核李斯特菌隶属于李斯特菌属。该属包括8个种,主要包括产单核李斯特菌、格氏李斯特菌和默
氏李斯特菌,其中只有产单核李斯特菌对人有致病性。李斯特菌属广泛存在于自然界,动物、人类、植物 、
土壤、水及青贮饲料均能分离到此菌。
(一)生物学特性
1.形态染色 :菌体短小为(1~2)/μm×(0.4~0.5)μm,常呈V字形或成对排列,偶呈丝状。有
鞭毛 、无芽胞,20℃有动力,37℃动力缓慢,一般不形成荚膜。幼龄菌呈革兰阳性,陈旧培养物多转为革
兰阴性。
2.培养特性:需氧或兼性厌氧,营养要求不高,在血琼脂平板上35℃培养数天后形成 小而透明的S型
菌落,周围有狭窄的β溶血环。因其能生长于4℃,故可进行冷增菌。在半固体培养基中 可出现倒伞形生
长。通常在25℃培养时,显示有动力。
3.生化反应:该菌不发酵甘露 醇和木糖,硝酸盐还原阴性,CAMP阳性。可发酵多种糖类如葡萄糖、果
糖、麦芽糖等,产酸不产气, 触酶阳性,不形成吲哚,不分解尿素,能水解七叶苷,能水解精氨酸产氨。
4.根据菌体及鞭毛抗 原的不同,可分4个血清型,1、3、4型尚可分为若干亚型。本菌耐碱不耐酸。对
热较为敏感,加热5 0℃10分钟可死亡。
(二)致病性
本菌由带菌动物或人粪便污染动物制品,而经 口感染。通过胎盘或产道感染新生儿是本病的重要特点。
官内感染常可导致流产、死胎及新生儿败血症, 死亡率较高。本菌常伴随EB病毒引起传染性单核细胞增多
症,此外可引起脑膜炎。致病物质主要是溶血 素和菌体表面成分。机体主要靠细胞免疫功能清除本菌。
(三)微生物学检验
1. 标本采集:根据感染部位不同而采取相应标本。如全身感染采取血液,局部采取分泌物或脓液,感
染动物 则用组织匀浆。
2.检验方法与鉴定
(1)分离培养:将血液标本(3~5ml) 或脑脊液的离心沉淀物接种两支脑心浸液(标本量的10倍)
培养基中。其中一支置10%C0
2
环境中,37℃培养24~48h,各作一次血平板分离;另一支置4℃培养,每24h
作一 次血平板分离,连续4天,以后每周一次至四周。咽喉拭子、组织及粪便接种于肉汤培养基中,置4℃
培 养,进行冷增菌;转种和培养方法同上。从血平板上挑取口溶血环的菌落,做涂片染色镜检并进一步鉴
定 。
(2)鉴定:本菌可根据下列特点加以确定:在血琼脂上有狭窄的β溶血环,25℃动力最强, 在半固
体培养基上呈伞状生长,可在4℃冷增菌生长,木糖、甘露醇和H
2
S阴性CA MP(与金黄色葡萄球菌协同溶
血)阳性。触酶阳性。

四、丹毒丝菌属
红斑丹毒丝菌为革兰阳性杆菌,单个存在或形成短链。在血琼脂平板上可形成两种菌落。光滑型菌落
细小、圆形、突起有光泽;粗糙型菌落大,表面呈颗粒状。厌氧或微需氧菌。无芽胞、无鞭毛、无荚膜。
触酶阴性。48h发酵葡萄糖、乳糖,产酸不产气。对湿热及化学消毒剂敏感。
68

红斑丹毒丝菌引起红丹毒丝病,主要发生在动物身上,人类也可感染发病,主要因接触动物或其产品
经皮肤损伤而引起类丹毒。以局部感染为主,全身感染者少见。感染局部的皮肤发红、肿胀、疼痛、或有
痒感。也可引起急性败血症或心内膜炎。因污染奶制品而引起食物中毒。本菌对青霉素、头孢菌素、红霉
素和四环素等菌敏感。

五、阴道加特纳菌
引起非淋菌性阴道炎的主要病原菌之一。
新鲜标本分离菌株趋向革兰染色阳性,保存菌株趋向革兰 染色阴性。本菌无芽胞、无荚膜、无鞭毛,
多形性。
本菌营养要求较高,在5%人血平板 上,在3%~5%C0
2
、35℃环境中培养48h,可形成针尖大小菌落,在
人血和 兔血平板上可出现β溶血环。对氨苄青霉素、羧苄青霉素、苯唑青霉素、青霉素、万古霉素和甲硝
唑敏感 。对萘啶酸、新霉素、粘菌素和磺胺嘧啶耐药。

本章练习题:
疑为白喉患者的最佳取材部位为
A.血液
B.淋巴液
C.假膜深处
D.假膜表面
E.假膜边缘
[答疑编号5]


具有异染颗粒的细菌是
A.布鲁菌
B.破伤风梭菌
C.白喉棒状杆菌
D.结核分枝杆菌
E.脑膜炎奈瑟菌
[答疑编号5]
『正确答案』C
调查人群对白喉有无抵抗力,可采用
平板毒力试验
B.外斐试验
C.锡克试验
D.狄克试验
E.肥达试验
[答疑编号5]
『正确答案』C
白喉患者的特异性治疗,应选择
A.适量输血
『正确答案』E

B.大量输血
C.足量抗生素
D.适量类毒素
E.早期足量抗毒素
[答疑编号5]
『正确答案』E
青霉素串珠试验阳性的细菌是
A.破伤风梭菌
B.肉毒梭菌
C.产气荚膜梭菌
D.炭疽芽孢杆菌
E.白喉棒状杆菌
[答疑编号5]
『正确答案』D
下列既有荚膜又有芽胞的细菌是
A.伤寒沙门菌
B.铜绿假单胞菌
C.炭疽芽胞杆菌
D.脂肪芽孢杆菌
E.蜡样芽孢杆菌
[答疑编号5]
第二十四章 分支杆菌属及检验

本章考点:
1.概述:概念
2.结核分枝杆菌
●生物学性状
●临床意义
●微生物学检查及方法学评价
3.非典型分支杆菌
●概念、种类
●鉴别培养方法
●检验方法学评价
4.麻风分支杆菌:概述
分枝杆 菌属是①一类细长或略带弯曲、为数众多(包括54个种)呈分支状生长的需氧杆菌。因其繁殖
时呈分支 状生长故称分枝杆菌。本属细菌的主要特点②是细胞壁含有大量脂类,可占其干重的60%,这与其
染色 性、抵抗力、致病性等密切相关。③一般不易着色,若经加温或延长染色时间而着色后,能抵抗3%盐
酸 酒精的脱色作用,故又称抗酸杆菌。④需氧生长,⑤无鞭毛,无芽胞和荚膜。引起的疾病均为慢性,有
肉 芽肿病变的炎症特点。
分枝杆菌的种类较多,包括结核分枝杆菌、非典型分枝杆菌和麻风分枝杆菌。

『正确答案』C

一、结核分枝杆菌
结核分枝杆菌简称结核杆菌,是引起 人和动物结核病的病原菌。目前已知在我国引起人类结核病的主
要有人型和牛型结核分枝杆菌。
(一)生物学特性
1.形态与染色:结核分枝杆菌为细长或略带弯曲的杆菌,其大小 约(1~4)μm×0.4μm。在培养基中
可呈球状或丝状,陈旧培养物或干酪化的淋巴结中可见到分 枝状。抗酸染色时菌体呈红色。显微镜下常堆
积成团、成束,排列无序,也有呈链状、索状者。革兰染色 阳性,既往在组织中曾发现革兰阳性的非抗酸
颗粒,接种动物可产生典型的结核病变,后被称为Much 颗粒。金胺“0”等染色,在荧光显微镜下菌体可
发生荧光。
2.培养特性:本菌专性需 氧,在无氧条件下迅速死亡,在5%~10%C0
2
环境中可刺激其生长。烛缸不适
合 本菌培养,需用二氧化碳培养箱。培养温度适应范围较大,35~40℃均可生长,最适温度为35~37℃。< br>最适pH为6.5~6.8。兼性胞内寄生菌,在细胞内外均可发育繁殖,强毒株可长期生存于巨噬细胞内 。生长
时还需适当的湿度。本菌生长缓慢,最快的分裂速度为18h一代。
在固体培养基 上,一般需2~6周才能长出菌落。菌落呈干燥颗粒状,不透明,乳白色或米黄色,表面
呈皱纹状,形似 菜花。
在液体培养基中生长较快,多为表面生长,形成菌膜,且干燥易碎而沉于管底。此种特性与 菌体的疏
水性有关。有毒力菌株在液体培养基中可呈索状生长,无毒株则无此现象。
结核 分枝杆菌营养要求较高,必须在血清、卵黄、马铃薯、甘油以及某些无机盐类的特殊培养基(罗
氏培养基 )上才能生长。但经多次传代或长期保存的菌种,也能在营养较简单的培养基中生长。
据报道少量 铁质可促进结核分枝杆菌生长,铁质可使细菌产生分枝杆菌生长素。选择培养基加有抗微
生物药物,以抑 制标本中杂菌、真菌等污染菌的生长。常用的选择剂有结晶紫、孔雀绿、青霉素、萘啶酸、
林可霉素、多 粘菌素B等。
3.生化反应:各型结核杆菌均不发酵糖类,能产生过氧化氢酶,耐热触酶试验、聚 山梨酯-80水解试验
和耐热磷酸酶试验均为阴性,脲酶试验和中性红试验均为阳性。人型结核分枝杆菌 烟酸试验、硝酸盐还原
和烟酰胺酶试验均为阳性,借此可与牛型结核分枝杆菌鉴别。
4.抵抗力:对酒精敏感。
5.变异性:形态、菌落、毒力、免疫原性和耐药性等变异。
毒力变异:卡介苗(BCG)——将有毒的牛型结核分枝杆菌培养于含有甘油、胆汁、马铃薯的培养 基中
经13年传种230代,获得减毒菌株,再接种动物,不能致病而使其获得免疫力。用于预防结核病 。
(二)临床意义
1.致病性:该菌不产生内毒素和外毒素和侵袭性酶。可在细胞 内、外生长与大量繁殖,致病物质主要
是荚膜、脂质、蛋白质。结核分枝杆菌主要通过呼吸道、消化道和 受损伤的皮肤侵入易感机体,引起多种
组织器官的结核病,其中以通过呼吸道引起的肺结核最多见。肺部 感染可分为原发性感染和继发性感染。
肺外感染可发生在脑、肾、肠、及腹膜等处。机体对菌体成分和其 代谢产物引起免疫损伤以及变态反应,
从而导致一系列组织学上的病理变化。(机理)
现 象:机体对结核分枝杆菌的特异性免疫和迟发型超敏反应同时存在。结核的特异性免疫是通
过结核分枝杆 菌感染后所产生,试验证明,将有毒结核分枝杆菌纯培养物初次接种于健康豚鼠,不产生速
发型过敏反应 ,而经10~14d,局部逐渐形成肿块,继而坏死,溃疡,直至动物死亡。若在8~12周之前给
动物 接种减毒或小量结核分枝杆菌,第二次接种时则局部反应提前,于2~3d内发生红肿硬结,后有溃疡
但 很快趋于痊愈。此现象为Koch在1891年观察到的,故称为Koch现象。免疫性和迟发型超敏反应由不同
的T细胞亚群介导。
3.结核菌素试验:利用Ⅳ型变态反应的原理,检测机体是否感染过结核杆菌。本实验对婴幼儿结核病

的诊断有意义。
(三)微生物学检验
1.标本采集:根据感染部位的不同 ,可采集不同标本。结核患者各感染部位的标本中大多都混有其他
细菌,为此应采取能抑制污染菌的方法 。若作分离培养,必须使用灭菌容器,患者应停药1~2天后再采集
标本。可采集痰、尿、粪便、胃液、 胸水、腹水、脑脊液、关节液、脓液等。
2.检验方法
(1)涂片检查
直接涂片包括:
1)薄涂片:挑取痰或其他处理过的标本约0.01ml,涂沫于载玻片上,用萋 -尼(热染法)或Kinyoun
(冷染法)抗酸染色,油镜镜检,报告方法:-:全视野(或100个 视野)未找到抗酸菌;+:全视野发现3~
9个;++:全视野发现10~99个;+++:每视野发现 1~9个;++++:每视野发现10个以上(全视野发现1~
2个时报告抗酸菌的个数)。
2)厚涂片:取标本0.1ml,涂片,抗酸染色、镜检,报告方法同上。
3)集菌涂片:主要方法有沉淀集菌法和漂浮集菌法。
4)荧光显微镜检查法:制片同前。用金铵“O”染色,在荧光显微镜下分枝杆菌可发出荧光。
(2)分离培养
1)固体培养法:结核分枝杆菌的分离培养对于结核病的诊断、疗效观察及抗结核 药物的研究均具有重
要意义。培养前针对标本应做适当的前处理,如痰可做4%H
2
S 0
4
或4%NaOH处理20~30min,除去杂菌再接种
于罗氏培养基,37℃5 %~10%C0
2
培养,定时观察,至4~8周。此方法可准确诊断结核杆菌。
2)液体培养法:Bactec-460半自动培养方法,Bact,Vitck-3D,全自动快速培养系统。
3)噬菌体法。
(3)基因快速诊断:PCR反向膜探针杂交,DNA探针,16s rRNA基因序列测定,高效液相色谱(HPLC)
监测分枝菌酸。简便快速、灵敏度高、特异性强。但 需注意实验器材的污染问题,以免出现假阳性。
(4)耐药性:结核杆菌对多种抗结核药物产生耐 药性,对利福平耐药是由rpoB的基因突变,链霉素
耐药是和编码核糖体S12蛋白的rpsl基因发 生突变以及编码16SrRNA的rrs基因发生突变,异烟肼的耐药
与过氧化氢酶和过氧化物酶的失活 有关。
(四)治疗原则
利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素为第一线药物。利福平 与异烟肼合用可以减少耐药的产生。对于
严重感染,可用吡嗪酰胺与利福平及异烟肼联合使用。

二、非典型(非结核)分枝杆菌
分枝杆菌属中除结核杆菌和麻风杆菌以外 ,均称为非结核分枝杆菌或非典型分枝杆菌。因其染色性同
样具有抗酸性亦称非结核抗酸菌,其中有14 ~17个非典菌种能使人致病,可侵犯全身脏器和组织,以肺最
常见,其临床症状、X线所见很难与肺结 核病区别,而大多数非典菌对主要抗结核药耐药,故该菌的感染和
发病已成为流行病学和临床上的主要课 题,与发达国家一样,我国近年来发现率也有增高趋势。以第Ⅲ群
鸟-胞内分枝杆菌和第Ⅳ群偶发分枝杆 菌及龟分枝杆菌为多。

三、麻风分枝杆菌
麻风分枝杆菌(M Leprae)简称麻风杆菌,是麻风病的病原菌。首先由Han-senl937年从麻风病人组
织中 发现。麻风分枝杆菌亦为抗酸杆菌,但较结核杆菌短而粗。抗酸染色着色均匀,呈束状或团状排列。
为典 型的胞内寄生菌,该菌所在的细胞胞质呈泡沫状称麻风细胞。用药后细菌可断裂为颗粒状,链状等,
着色 不均匀,叫不完整染色菌。革兰阳性无动力、无荚膜和芽胞。

麻风分枝杆菌是麻风的病 原菌,麻风是一种慢性传染病,早期主要损害皮肤、黏膜和神经末梢,晚期
可侵犯深部组织和器官,此菌 尚未人工培养成功,已用犰狳建立良好的动物模型。人类是麻风分枝杆菌的
唯一宿主,也是唯一传染源。 本病在世界各地均有流行,尤以第三世界较为广泛。
麻风病根据机体的免疫、病理变化和临床表现可将多数患者分为瘤型,结核样型和界线类综合征。
治疗原则:早发现,早治疗。治疗药物主要有砜类、利福平、氯苯吩嗪及丙硫异烟胺。一般采用二或
三种 药物联合治疗。麻风病目前尚无特异性预防方法。

本章练习题:
卡介苗是经反复传代培养而获取的毒力减弱而抗原性保留的变异株,其用于预防
A.结核病
B.百日咳
C.白喉
D.破伤风
E.哮喘
[答疑编号5]
『正确答案』A
痰标本经抗酸染色找到结核分枝杆菌,报告为“++”的细菌数量为
A.每100个油镜视野1~9个
B.每10个油镜视野1~9个
C.每个油镜视野1~9个
D.每100个油镜视野10~100个
E.每5个油镜视野1~9个
[答疑编号5]
『正确答案』B
与结核分枝杆菌抗酸性有关的成分是
A.磷脂
B.蜡质D
C.分枝菌酸
D.索状因子
E.硫酸脑苷脂
[答疑编号5]
『正确答案』C
不以内毒素或外毒素为致病物质的细菌是
A.铜绿假单胞菌
B.炭疽芽孢杆菌
C.布鲁菌
D.结核分枝杆菌
E.白喉棒状杆菌
[答疑编号5]
『正确答案』D
卡介苗是
A.经甲醛处理后的人型结核分枝杆菌

B.发生了抗原变异的人型结核分枝杆菌
C.发生了抗原变异的牛型结核分枝杆菌
D.保持了免疫原性的减毒牛型结核分枝杆菌
E.保持了免疫原性的减毒人型结核分枝杆菌


[答疑编号5]
『正确答案』D

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