血培养基.doc

2021年1月10日发(作者：小孩心理不健康的表现)
血培养基基础的选择和补充剂的改进

卢先雷 喻华

[摘要] 目的 从文献报道的几种血培养基基础中选择最佳者作为基础，并对血培养
基补 充剂进行改进以提高血培养阳性率。方法 通过对比研究：研究三种不同基础培养基
（哥伦比亚肉汤、 脑心浸液、胰大豆肉汤）与两种补充剂（文献补充剂A与改进补充剂B）
交叉搭配下各种细菌生长情况， 确定最佳配方后进行临床验证，并统计出临床试验阳性率。
结果 采用哥伦比亚肉汤优于脑心浸液，优 于胰大豆肉汤；而传统MgSO
4
葡萄糖肉汤效果
不佳。对文献提供的补充剂配方加以 改进后，增效作用显著。哥伦比亚肉汤辅以改进补充
剂B配方的培养基，细菌生长最快。654份血培养 阳性率12.2%。肺炎链球菌、无乳链球菌、
草绿色链球菌、莫拉氏菌、巴斯德氏菌、JK棒状杆菌等 苛养菌，均能从血培养中检出。 结
论 采用哥伦比亚肉汤辅以改进补充剂B的培养基效果最佳，能提高血培养阳性率。

[关键词] 培养基 血培养 分离率

Selection of blood culture base medium and improvement of supplement .

Lu

Xianlei .
Clininal Microbial Laboratory,The NO.5 Hospital of Chengdu .
Chengdu Wenjiang 611130
[Abstract] Objective To select the best effective base medium from some documents
report, and improve quicken agent for increasing isolation rate of blood culture. Methods
Three different base media and two different prescription quicken agents was compared and
grouped crisscross,then selected the best effective the clinical testing was being
assayed ,the isolation rate was count . Results Colomcia broth was best base
medium ,secondaryly brain heart infuction was better ,and tryptic sorbean infuction broth was
good ,but the MgSO
4
glucose broth was improved quicken agent ,it’s effection of
acceleration to bacterial growth was increaed than that of non- improved agent .And the
Colombia broth with the improved quicken agent was best effective for bacterial growth .clinical
testing: isolation rate is 12.2% by 654 speciments of blood culture ,
iae ,tiae ,rius ,Moraxella bacterium, Pasteurella
bacterium ,um ,et al ,could be isolated from speciments of blood culture. Conclusions
The Colombia broth with improved quicken agent was best effective to be used for blood
culture,isolation rate of blood culture was increased with it.

[Key words ] medium blood culture isolation rate

败血症是感染性疾病的危重阶段，如何快速、准确地诊断，对于临床的抢救治疗有着
重要意义
[1]
，它将直接影响疾病的转归。这在当前细菌耐药性日趋严重的情况下显得尤为
重要。 < br>目前，败血症的诊断、治疗主要依赖于血液（骨髓）的细菌学诊断——血培养，而血
培养基效果的 优劣是能否获得阳性结果的前提之一，是诸多因素中影响血培养阳性率的最
重要的一环。而培养基配方、 应用形式的设计直接决定了培养基的性能和效果的优劣
[2][3]
。
而现在市场上商 品血培养基因厂家不同而配方也不统一，其品质良莠不齐。为了能从中选
择最佳者，作者对文献报道的各 商品血培养基普遍采用的几种基础培养基及其补充剂进行
了研究，取得了一些的结果，现介绍如下：
————————
作者单位：611130成都市第五人民医院检验科（卢先雷）；四川省人民医院检验科（喻华）

材料与方法


一、材料
1、 试剂：脑心浸液干粉 购自生物梅里埃公司、哥伦比亚肉汤为DIFCO公司产品；胰
大豆胨、示胨、酵母粉等购自英国OXO ID公司；胰蛋白胨、蛋白胨、血红素、及
各种成品培养基、生化管购自杭州天和微生物试剂厂；辅酶Ⅰ 、糖类、氨基酸、
维生素、嘌呤、嘧啶等生物化学试剂为国产或进口分装。聚茴香脑磺酸钠（S.P.S .）
为杭州天和微生物试剂厂蕙赠。
2、 试验菌株：ATCC25922大肠艾希菌（

）、ATCC25923金黄色葡萄球菌（）
、
ATCC27853铜绿假单胞菌（
nosa）
、AATCC492 47流感嗜血杆菌（
nzae）
，
购自卫生部临检中心；肺炎链球菌（
nia e）
、草绿色链球菌（
rius）
为本实验室保存菌株。
3、 培养基：（ 1）血培养双相瓶：共七组配方，先按基础液配方配制，将13体积的
基础液作固相，加入10gL纯化 琼脂，加热溶解分装20ml瓶；剩余23体积的基
础液作液相，加入SPS 0.3gL, 溶解, 分装输液瓶，500ml瓶。121℃高压灭菌
15min后，趁热将固相瓶放入60℃水浴中，用无菌 注射器无菌操作穿刺加入过滤
除菌的补充物0.1ml，混匀后放平待凝；在500ml液相瓶中加入过 滤除菌的补充物
2.5ml瓶，混匀后用无菌注射器将液体分装入已凝固的固相瓶内，40ml瓶，如此
制成双相瓶。48h无菌试验后备用：
（2）[双相瓶配方]：由基础配方+补充物组成：
①基础配方：脑心浸液、胰大豆肉汤、哥伦比亚肉汤，以传统MgSO
4
葡萄糖肉汤< br>作对照；
②补充剂 (所注含量为培养基内最终浓度)：
补充剂A：[略].
[1][2][3]
；
补充剂B：［略］。
（3）配方组合：
配方一：脑心浸液+补充物A
配方二：胰大豆肉汤+补充物A
配方三：哥伦比亚肉汤+补充物A
配方四：脑心浸液+补充物B
配方五：胰大豆肉汤+补充物B


配方六：哥伦比亚肉汤+补充物B
（4）血琼脂、巧克力血琼脂、麦康凯琼脂等为本实验室制备。
4、 标本来源：654份血培养标本 中639份来自我院住院病人，15份来自门诊。体温
均>39℃，有近期抗生素应用史，其中我院住院 病人均已使用了多种抗生素。所有
测试者均是抗生素经验治疗无效而自愿进行者。
二、方法
1、 配方筛选：
（1） 按七种配方分别制作双相瓶各18瓶，无菌试验后备用。
（2） 菌液制备：草绿色链球菌（
rius）
、肺炎链球菌（
niae）< br>采用15%兔血清脑心浸液增菌后，4000rmin离心,取细菌沉淀用无菌
盐水调整浊度为0 .5麦氏浊度，再稀释10
7
，各取0.1ml接种双相瓶
及血平皿（作菌落计数）各 三个；计数结果取平均值，结果为20
CFUml，即双相瓶内细菌浓度：2 CFU瓶；其余各菌采 用16h琼脂培
养物作直接盐水悬浮，按上法稀释并测定出浊度：金黄色葡萄球菌
（
）
18 CFUml、大肠艾希菌（

）32 CFUml、铜绿假
单胞菌（
nosa）
10 CFUml、流感嗜血杆菌（
nzae）
44
CFUml。
（3） 菌液用量：0.1ml瓶；
（4） 人血用量：采用血库过期存血，经无菌试验后应用，3.9ml瓶；
（5） 接种方法：将菌液和人血 先后分别用无菌空针注入瓶内，每种菌接种
3瓶，放入35℃，5%CO
2
孵箱培养， 每4h观察一次，并在8h时摇动
倾斜培养瓶一次。
（6） 用肉眼观察并记录各瓶生长情况：上层液体浑浊时间及固相菌落出现
时间。
（7） 经以上测试后，对七组配方所得数据采用多样本秩和检验，比较差异。
2、 临床试验：将验证合格的 配方六培养瓶发放临床各科，对发热病人志愿者进行血
培养。成人5ml瓶，小儿2-3ml瓶。对于阳 性瓶及时转种血琼脂、巧克力琼脂、
麦康凯琼脂，并作药敏试验，按三级报告制度执行，并记录阳性出现 时间。最后
统计阳性率并制作细菌分布表。

结果

1、七种配方培养瓶中各种细菌的生长情况比较：见表1，
该表反映出配方六培养基在受试菌的检出方面优于其它六种，经秩和检验，差异具有
显著性P<0.05 。并显示传统MgSO
4
葡萄糖肉汤（对照）效果不佳。另外，当采用同一补
充剂时， 哥伦比亚肉汤优于脑心浸液、脑心浸液优于胰大豆肉汤；采用同一基础培养基时，
改进补充剂B优于补充 剂A。
2、654份血培养共检出阳性菌80株，阳性菌分布及阳性出现时间见表2
表1 七种配方培养瓶中各种细菌生长情况（n=3）
菌种（浓度）


(1.8 cfuml)
(3.2 cfuml)
nzae(4.4cfuml)
平均阳性出现时间（h）
配方一 配方二 配方三 配方四 配方五 配方六 配方七
浑浊 菌落 浑浊 菌落 浑浊 菌落 浑浊 菌落 浑浊 菌落 浑浊 菌落 浑浊 菌落
8 12 8 16 8 12 8 12 8 16 8 12 24 24
4 12 8 12 4 12 4 12 8 12 4 12 16 24
36 细 48 细 48 48 24 细 36 细 24 24 72 -
nosa(1.0 cfuml) 8 12 12 16 8 12 8 12 8 12 8 12 24 24
niae(2.0 cfuml) 24 24 24 - 24 36 16 24 24 - 16 16 48 -
rius(2.0 cfuml) 12 16 16 - 24 36 12 16 16 - 12 16 48 -
n
i
11 9 12 11 9 12 9
T
i
354.5 330.5 478.5 330.5 295 373 539
经多样本秩和检验：H=13.72 > H
0.05（6）
=12.59，P<0.05.








表2 80份阳性标本中各种细菌的分布及阳性出现时间

菌种 株数 平均阳性时间
（h）

革兰阴性杆菌：（28）
肠杆菌科：
大肠艾希菌 11 12
肺炎克雷伯氏菌 5 12
产酸克雷伯氏菌 1 16
甲型副伤寒沙门菌 2 12
伤寒沙门菌 1 24
都柏林沙门菌 1 12
假单胞菌属：
非液化莫拉菌 1 24
产碱假单胞菌 2 24
醋酸钙不动杆菌 1 16
其他Gb：
支气管鲍特氏菌 1 24
产酸巴斯德菌 1 16
碳酸噬胞菌 1 48
革兰阳性球菌： （36）
葡萄球菌属：
中间葡萄球菌 3 19
施氏葡萄球菌 2 20
腐生葡萄球菌 2 15
金黄色葡萄球菌 3 15
头状葡萄球菌 1 18
里昂葡萄球菌 2 20

-
菌种 株数 平均阳性时间（h）

表皮葡萄球菌 1 24
模仿葡萄球菌 1 48
耳葡萄球菌 2 52
人葡萄球菌 1 48
链球菌属
牛链球菌 1 24
无乳链球菌 1 16
肺炎链球菌 6 16
草绿色链球菌 3 16
肠球菌
空肠肠球菌 1 16
屎肠球菌 2（1例15h,1例4d）
微球菌属
西宫微球菌 2 72
藤黄微球菌 2 48
克氏微球菌 1 48
革兰阳性杆菌： （16）
产单核细胞李斯特菌 2 18
蜡样芽胞杆菌 2 12
干燥棒状杆菌 1 72
牛棒状杆菌 2 24
库氏棒状杆菌 2 12
JK棒状杆菌 1 72
马红球菌 6 15（有1例72h）



讨论


在血培养基的配方和形式设计中，对于如何能获得更高的阳性率，以及更快地反映出
阳性现象，同时又要尽量减少污染，减少漏诊等诸多因素都必须要在设计中一一考虑。
影响血培养基质量的主要因素大致有以下几点：
培养基的营养程度，对抗生素的灭活能力，对 抗体、补体、溶菌酶等不利因素的中和
消除方法，如何缩短细菌生长周期中的迟滞期以刺激细菌快速生长 繁殖从而缩短培养时间、
如何延长对数生长期以便获得明显的阳性现象，如何快速、直观地反映出细菌在 瓶内的生
长现象以便尽早观察到阳性现象，减小接种时污染的同时使接种方法更为简便。
本文 根据以上八点设计要求，探讨了几种血培养基础培养基的优劣并对血培养基补充
剂中的营养成分：如必须 氨基酸、全面的维生素及特殊细菌所缺乏的各种生长因子、辅酶、
微量元素、核酸类物质及为细菌提供充 足能源的物质及各种组分用量进行了研究（即应既
满足细菌生长需要同时又要避免过量毒害），并在此基 础上增加了烟酸、谷氨酸钠有利于链
球菌的生长，添加了酵母粉有利于嗜血杆菌的生长。另外，在沿用聚 茴香脑磺酸钠（S.P.S.）
作为抗凝剂及抗生素灭活和抗体补体灭活剂同时针对其他抗生素设计了多 重灭活体系
(2.5glMgSO
4
、0.5gl半胱氨酸、50mgl 对氨基苯甲酸、6mgl Zn)。此外，作者采用了
独特的生长刺激剂用以激活细菌酶系统以缩短迟滞 期，采用缓冲剂中和代谢产物，以延长
对数生长期。
在形式上，作者采用双相瓶，既可观察液 相的混浊、气泡、溶血、菌膜等现象，又可
直接观察固相菌落的生长请况：菌落有无、大小、形态、色素 、透明度等特征，可初步鉴
定细菌。并且，在全封闭设计下，标本接种采用直接穿刺注入，无需开启瓶塞 ；传代在瓶
内进行，既简便又有效地防止了污染。为了延长培养基保存时间，还添加了特殊稳定剂，经观察该培养基放置4月后，品质仍旧未变。
通过实验室研究和临床试验结果表明，采用哥伦比亚 肉汤辅以改进补充剂B效果良好，
细菌生长迅速，种属适应面广，特别是苛养菌生长良好，明显优于传统 MgSO
4
葡萄糖肉
汤。在检出的80株阳性血培养分离菌中最早阳性时间为12h ，主要是大肠杆菌，肺炎克雷
伯菌，比文献仅慢4h；72h阳性者占总体阳性的92.5%，4d后阳 性的仅有1例；平均阳
性时间24.3h，与文献
[6]
平均阳性时间22.4h相 差1.9h左右。另外，对654份血标本的
临床测试阳性率为12.2%与文献
[4][5] [6]
阳性率基本一致。而文献报道均采用血培养仪作为观
察手段，但作者仅以肉眼观察，而所 得到的平均阳性时间结果相差不大，故作者认为血培
养阳性率的关键因素可能不在是否采用仪器，而培养 基的质量才是关键因素之一。并且，
在一些经济基础相对薄弱，无力使用全自动血培养仪的医院的实验室 中，选择一种优质双
相血培养基以提高血培养阳性率则更为实用。



参考文献
[6]
2+
1、周贵民. 努力提高血培养阳性率. 中华医学检验杂志,1999,22:69-70.
2、周贵民，张军民.血培养方法研究进展. 中华医学检验杂志,1999,19:331-333.
3、刘恭植.血培养研究进展.临床检验杂志,1996,14:48-50.
4、许淑珍,张淑兰,陈力. BACTEC 9120血培养系统检测细菌影响因素的探讨. 中华医学检验杂志,1997,20：
272-274.
5、程彦国，张军民，赵莉萍.全自动血培养仪的临床应用及评价. 中华医学检验杂志,1999,22：74-76.
6、张秀珍,宣天芝,胡云建. 全自动血培养系统临床应用评价. 中华医学检验杂志,1998,5：297-299.