肝在人体的哪个部位欧蒙抗核抗体谱(IgG)检测标准操作规程

2021年1月4日发(作者：豆腐的营养价值)

欧蒙抗核抗体谱(IgG)检测标准
操作规程

抗核抗体谱(IgG)检测标准操作规程

1.目的
规范抗核抗体谱(IgG)检测，保证结果的准确性。

2.适用范围
检验科免疫组工作人员。

3.试剂规格名称与组成
型号名称：ANA 谱 1
靶抗原：nRNPSm，Sm，SS-A，Ro-52，SS-B，Scl-70，
J o-1，CENP B，dsDNA，核小体，组蛋白，核糖体 P 蛋
白
类型：IgG
基质：抗原包被的检测膜条
规格：16×01(16)

4.预期用途：用于体外定性检测人血清或血浆中的抗
nRNP、Sm、SS-A（天然 SS-A 和 Ro-52）、SS-B、Scl-70、
PM-Scl、Jo-1、CENP B、PCNA、dsDNA、核小体、组蛋
白、核糖体P 蛋白和 AMA M2 共 14 种不同抗原 IgG
类抗体。



5.适应症：夏普综合征（ MCTD），系统性红斑狼疮（SLE），
干燥综合征，进行性系统性硬化 症，多肌炎皮肌炎、
重叠综合征、局限型进行性系统性硬化症（CREST 综合
征），原发性胆汁 性肝硬化。

6.临床意义：抗核抗体识别是各种细胞核组 分（细胞核
的生化成份）[1,2]，包含核酸、细胞核蛋白 及核糖蛋
白。可特征性地出现于 许多疾病中，尤其是风湿性疾病
[3,4,5]。在炎症性风湿性疾病 中，这些抗核抗体的阳
性率在 20%到 100%之间，以风湿性关节炎的阳性率最
低，在 20%至40%之间。因此，ANA 鉴别诊断在对个别
风湿疾病的确认十分必要，而且对自身免疫性疾病的进
一步诊断也很有价值。[3,6,7,8,9,10,11]
风湿疾病
—夏普综合征（混合结缔组织病＝MCTD)[8]
—系统性红斑狼疮（SLE)[8, 12, 13, 14, 15, 16, 17,
18, 19, 20, 21, 22]
—干燥综合征（原发性干燥综合征）[5],
—系统性硬化症（系统性硬皮病,SSc)[1, 23],
—局限型系统性硬化症（CREST 综合征） [28]
—多肌炎皮肌炎[12,15]
—类风湿性关节炎[5]



7.主要组成成分：





























成份
1. 包被抗原的检测膜条：nRNPSm、Sm、SS-A
（天然 SS-A 和 Ro-52）、SS-B、Scl-70、PM-
Scl 、Jo-1 、CENP B 、PCNA 、dsDNA 、核小
体、组蛋白、核糖体 P 蛋白、AMA M2。
2. 阳性对照
人 IgG，100 倍浓缩
3. 酶结合物
碱性磷酸酶标记的羊抗人 IgG，10 倍浓缩
4. 样本缓冲液
直接使用
5. 清洗缓冲液
10 倍浓缩
6. 底物液
NBTBCIP（四唑硝基苯胺兰5-溴-4-氯啶-3-
吲 哚-磷酸盐），直接使用
7. 温育盘
8. 产品说明书
LOT 试剂批号
IVD 体外检测


1x0.02m
l
1x3ml
1x100ml
4x0.02ml POS CONTROL 100x
4x3ml
3x100ml
CONJUGATE 10x
SAMPLE BUFFER
16 条 4x16 条
STRIPS

规格 规格 标识
1x 50 ml 1x 100 ml WASH BUFFER 10x

1×30ml

2x8 槽
1 份

4×30ml



储存温度
未开封可稳定至
---
1 份
SUBSTRATE


8.储存条件及有效期： 2-8°C 保存，不要冷冻。未开
封前，除非特别说明，试剂盒自生产日起可稳定 18 个
月。稀释后的酶结合物和清洗缓冲液需在一个工作日内
用完。

9.样本要求
样本：人血清或 EDTA、肝素或柠檬酸盐抗凝的血浆。
稳定性：待检患者样本于 2-8°C 可稳定 14 天，稀释


后的样本应在同一个工作日内检测。
样本稀释：
患者样本用样本缓冲液 1:101 稀释，如可取 15ul 血
清用 1.5ml 样本缓冲液稀释并用漩涡混匀器充分混
匀。不可用加样器混匀。

10.检验方法
10.1试剂的准备和稳定性
注意：使用前所有试剂均必须于室温（18-25°C）平衡
30 分钟。从第一次使用起，试剂盒如保存 在 2-8°C，
并且在没有污染的情况下，可稳定至所标示的有效期。
- 包被抗原的检测膜 条：直接使用。为防止膜条发生
冷凝，只有当膜条平衡到室温后才可打开包装。取出膜
条后应立 即密封好原包装并将其保存于 2-8°C。
- 阳性对照：100 倍浓缩。使用时用干净的吸管从瓶
中吸取所需阳性对照，用样本缓冲液 1:101 稀释如：
15ul 阳性对照用 1.5ml 样本缓冲液稀释并充分混匀。
已稀释的阳性对照应在同一个工作日用完。

- 酶结合物：10 倍浓缩。使用时用干净的吸管从瓶
中吸取所需酶结合物，并用样本缓冲液 1:10 稀释。如
需温育一条检测膜条，用 1.35 ml 样本缓冲液稀释
0.15 ml 酶结合物。已稀释的酶结合物应在同一个工作


日用完。

- 样本缓冲液：直接使用。

- 清洗缓冲液：10 倍浓缩。使用时用干净的吸管从
瓶中吸取需要量用蒸馏水 1:10 稀释。如需温育一条膜
条，用 9ml 蒸馏水稀释 1ml 浓缩缓冲液。稀释后的缓
冲液应在同一个工作日用完。

- 底物液：直接使用，对光敏感，使用后应立即盖
紧瓶盖。

10.2操作流程

预处理:取出所需的膜条，将其放入温育槽内。膜条上
有编号的一面朝上。在温育槽中分 别加入 1.5ml 样本
缓冲液，于室温在摇摆摇床上温育 5 分钟后，吸去温
育槽中的液体。

血清温育第一次:
在温育槽中分别加入 1.5 ml 已稀释的血清样本，在摇
摆摇床上室温（18°C-
25°C）温育 30 分钟。



清洗: 吸去槽内液体，在摇摆摇床上用 1.5ml 清洗缓
冲液清洗膜条 3 次，每次 5 分钟。

酶结合物温育第二次:
在温育槽中加入 1.5ml 已稀释的酶结合物（碱性磷酸
酶标记的抗人 IgG），于摇 摆摇床上室温温育 30 分
钟。

清洗: 吸去槽内液体，在摇摆摇床上用 1.5ml 清洗缓
冲液清洗膜条 3 次，每次 5 分钟。

底物温育第三次:
在温育槽中分别加入 1.5ml 底物液，于摇摆摇床上室
温（18°C-25°C）温育 10
分钟。

终止: 吸去槽内液体，用蒸馏水清洗膜条 3 次，每次
1 分钟。

结果判断: 将检测膜条放置在结果判定模板中，风干
后判断结果。
在欧蒙印迹法自动操作仪（EURO BlotMaster）中使用该
产品时，请选择方法列表中的 Euro01AAb EL30。










抗核抗体谱（

IgG）检测试剂盒（欧蒙印迹法）实验操

作
11.参考范围： 检测 50 例健康献血员血清的中 ANA
谱水平，结果显示：所有献血员均为阴性。

12：检测结果的解释
方法：对已温育的检测膜条，我们推荐使用


EUROLineScan 软件评价结果。采用去离子水或者蒸馏
水终止反应后，用镊子将检测膜条放在绿色纸的粘性塑
料 膜上。当膜条还是湿的时候，可以调整位置。当把膜
条置于结果判定模板中的塑料膜上，并与标志对齐， 用
力按压，膜条完全干后 将粘附于塑料膜上。干透后的
检测膜条，可用台式扫描仪(EUROIMMUN AG) 扫描，并
采用 EUROLineScan 软件评价结果。关于
EUROLineScan 程序的相关信息，请参照 EUROLineScan
使用手册(EUROIMMUN AG)。该检测膜条相应的Test 代
码是 Ana3b。
如果您需要进行目测,可以从欧蒙公司订购结果判定模
板（订货号：ZD 1590-0101-3G） 。

检测膜条上有一条质控带，如果质控带出现强的颜色反< br>应说明实验操作正确。膜条包被抗原的位置上出现的白
色条带应判为阴性。

抗原及其在检测膜条上的位置：DL 1590-3G 欧蒙印迹
法检测膜条包被有如下抗原：
nRNPSm：小牛和兔胸腺提取物，经亲和层析纯化的天
然 U1-nRNP。
Sm：牛脾脏和胸腺提取物，经亲和层析纯化的天然 Sm。
SS-A：牛脾脏和胸腺提取物，经亲和层析纯化的天然


SS-A。
Ro-52：重组的 Ro-52（52kDa），相应的人 cDNA 用杆
状病毒系统在昆虫细胞中表达。
SS-B：小牛和兔胸腺提取物，经亲和层析纯化的天然
SS-B。
Scl-70：牛和兔胸腺提取物，经亲和层析纯化的天然
Scl-70（DNA 拓扑异构酶 1）。
PM-Scl：重组抗原，相应的人 cDNA 用杆状病毒系统在
昆虫细胞中表达。
Jo-1：小牛和兔胸腺提取物，经亲和层析纯化的天然
Jo-1（组氨酰-tRNA 合成酶）。
CENP B：重组的着丝点蛋白 B，相应的人 cDNA 用杆状
病毒系统在昆虫细胞中表达。 PCNA：重组的 PCNA
（36kDa），相应的人 cDNA 用杆状病毒系统在昆虫细胞
中表达。 dsDNA：从鲑鱼睾丸提取物中高度纯化的天然
双链 DNA。
核小体：从牛胸腺提取物中纯化的天然核小体。 组蛋
白：从牛胸腺提取物中纯化的各种类型组蛋白的混合
物。
核糖体 P 蛋白：小牛和兔胸腺提取物，用亲和层析纯
化的天然核糖体 P 蛋白。
AMA M2：从猪心脏提取物中纯化的天然 M2 抗原（丙酮
酸脱氢酶复合物）。




根据抗原带着色的深浅，可将结果分为阴性、可疑和阳
性。
抗原带着色的深浅
无色
着色非常弱
着色中到较强
同
根据 EUROLineScan 判读结果，可将结果分为阴性、可
疑和阳性。
等级
o
(+)
+
++
+++
EUROLineScan 结果
着色强度
0 - 5
6 - 10
11 - 25
26 - 50
51 - 256
阴性
可疑
弱阳性
阳性
强阳性
结果
阴性
可疑
阳性
着色与质控带强度相强阳性
用欧蒙印迹法检测自身抗体时，应同时采用间接免
疫荧光法实验。这样一方面可确保结果的可靠性，排除
假阳性反应；另一方面，欧蒙 HEp-2 细胞，特别是
HEp-2 细胞与灵长类肝冰冻组织切片的生物薄片马赛


克的间接免疫荧光法可检测抗核抗体的范围非常广，而
欧蒙印迹法检测膜条上的抗原种类非常有限，只 能检测
有限的抗体。
13.产品性能指标
13.1定标：检测膜条上各种抗原的反 应性已用疾病控
制中心（美国亚特兰大）提供的人参考血清

这些 CDC 血清的特异性已用免疫荧光模型（基质：
HEp-2 细胞和灵长类肝脏）、双向免疫扩散或对流免疫
电泳的结果进行验证，这些血清不是单一特异性的。

13.2检测范围：欧蒙印迹法为定性检测方法，没有检
测范围，样本稀释度为 1:101。

13.3交叉反应：高质量抗原（抗原和抗原的来源）确
保了检测系 统的高特异性。本欧蒙印迹法检测试 剂可
特异检测IgG 类抗nRNPSm 、Sm 、SS-A 、Ro-52 、
SS-B 、PM-Scl 、Jo-1 、CENP B 、PCNA、dsDNA、核


小体、组蛋白、核糖体P蛋白、AMA M2抗体，未发现
与其它自身抗体之间的交叉反应。

13.4干扰：血红蛋白浓度小于 5 mgml 的溶血、甘油
三脂浓度小于 20mgml 的脂血和胆红素浓度小于
0.4mlml 的黄疸对检测结果没有影响。

13.5 批内和批间差异：通过比较同一样本在相同时间
内多次检测结果的差异来研究批内差异；批批差异为用< br>不同批号产品对同一样本进行检测所得的差异。每一次
实验，抗原带着色的深浅都在额定 范围内。该欧蒙印
迹法试剂具有很好的批内和批间重复性。

14.注意事项
14.1警示：(1) 本检测试剂仅用于体外诊断。
(2) 质控血清的 HBsAg、抗 HCV、HIV-1 和
HIV-2 抗体均为阴性。但是，试剂盒中 所有组分都应视
作潜在的传染源小心处理。其中部分试剂（缓冲液、底
物液）有毒性，应避免接 触皮肤。

14.2废物处理：患者样本、质控血清和温育过的检测
膜条应视作传染 源处理，其它试剂如果没有特殊规定不
需单独处理。