世界奇妙物语奶奶各种动物或人外周血和脐带血内皮祖细胞分离液-天津灏洋

2020年12月30日发(作者：哪个奶粉没有问题?已解决)



NK细胞分离系列
试剂盒规格：3×100mlKit
试剂盒内容：
全血及组织匀浆稀释液
细胞洗涤液
试剂B
试剂D
试剂E
说明书

100ml
100ml
100ml
100ml
100ml
1份
本系列产品目录
1. 适用于各种动物血液及脏器组织本系列产品名称及货号
2. 相关试剂及耗材
3. 注意事项
4. 应用
5. 产品性能指标
6. 贮藏及保存期限
7. 实验前准备
8. 使用方法说明及图例
9. HES-TBD550使用说明
10. 组织单细胞悬液的制备
11. 生产企业
12. 参考文献

1. 适用于各种动物血液及脏器组织本系列产品名称及货号如下：
货号
NK2011H
NK2011RAT
NK2011RATP
NK2011M
NK2011MP
名称
人NK细胞分离液试剂盒
大鼠外周血NK细胞分离液试剂盒
大鼠脏器组织NK细胞分离液试剂盒
小鼠外周血NK细胞分离液试剂盒
小鼠脏器组织NK细胞分离液试剂盒
规格
3×100mlkit
3×100mlkit
3×100mlkit
3×100mlkit
3×100mlkit
价格
600.00
600.00
600.00
600.00
600.00
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NK2011G
NK2011GP
NK2011R
NK2011RP
NKHY2011H
NKHY2011HP
NKHY2011M
NKHY2011MP
NKHY2011P
NKHY2011PP
NK2011GO
NK2011GOP
NK2011B
NK2011BP
NK2011C
NK2011CP
NK2011D
豚鼠外周血NK细胞分离液试剂盒
豚鼠脏器组织NK细胞分离液试剂盒
兔外周血NK细胞分离液试剂盒
兔脏器组织NK细胞分离液试剂盒
马外周血NK细胞分离液试剂盒
马脏器组织NK细胞分离液试剂盒
猴外周血NK细胞分离液试剂盒
猴脏器组织NK细胞分离液试剂盒
猪外周血NK细胞分离液试剂盒
猪脏器组织NK细胞分离液试剂盒
羊外周血NK细胞分离液试剂盒
羊脏器组织NK细胞分离液试剂盒
牛外周血NK细胞分离液试剂盒
牛脏器组织NK细胞分离液试剂盒
鸡外周血NK细胞分离液试剂盒
鸡脏器组织NK细胞分离液试剂盒
狗外周血NK细胞分离液试剂盒
3×100mlkit
3×100mlkit
3×100mlkit
3×100mlkit
3×100mlkit
3×100mlkit
3×100mlkit
3×100mlkit
3×100mlkit
3×100mlkit
3×100mlkit
3×100mlkit
3×100mlkit
3×100mlkit
3×100mlkit
3×100mlkit
3×100mlkit
600.00
600.00
600.00
600.00
600.00
600.00
600.00
600.00
600.00
600.00
600.00
600.00
600.00
600.00
600.00
600.00
600.00

NK2011DP 狗脏器组织NK细胞分离液试剂盒 3×100mlkit 600.00
注：脏器组织分离液主要用于脾脏细胞的分离，外周血及全血分离液也可用于骨髓细胞的
分离。

2.相关试剂及耗材
A． 试剂
货号
HES-TBD550
RPMI1640
名称
羟乙基淀粉550
规格
200ml
价格
150.00
300.00 RPMI 1640 无血清培养基（含稳定的谷氨酰胺、含酚红） 500ml
B． 耗材
货号
3516
3513
3524
3548
3599
430168
名称及规格
6孔细胞培养板 50块箱
12孔细胞培养板 50块箱
24孔细胞培养板 100块箱
48孔细胞培养板 100块箱
96孔细胞培养板 100块箱
25CM细胞培养瓶(密封盖) 20个包
生产厂商
Costar
Costar
Costar
Costar
Costar
Corning
价格
686.00
675.00
1287.00
1542.00
1367.00
113.00
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430639
430720
430641
430823
430825
431079
431080
431081
431082
430790
430828
430776
4485
4486
4487
430659
430663
GP2012
GT201210
GT201250
25CM细胞培养瓶(透气盖) 20个包
75CM细胞培养瓶(密封盖) 5个包
75CM细胞培养瓶(透气盖) 5个包
150CM细胞培养瓶(密封盖) 5个包
150CM细胞培养瓶(透气盖) 5个包
175CM细胞培养瓶(密封盖) 5个包
175CM细胞培养瓶(透气盖) 5个包
225CM细胞培养瓶(密封盖) 5个包
225CM细胞培养瓶(透气盖) 5个包
15ml离心管（含泡沫架） 50支包
50ml离心管（含泡沫架） 25支包
250ml离心管 102支箱
1ml移液管 50支包
2ml移液管 50支包
5ml移液管 50支包
2ml冻存管（可立外旋） 50支包
5ml冻存管（可立外旋） 50支包
玻璃吸管 10支包
10ml玻璃离心管 10支包
50ml玻璃离心管 5支包
Corning
Corning
Corning
Corning
Corning
Corning
Corning
Corning
Corning
Corning
Corning
Corning
Costar
Costar
Costar
Corning
Corning
TBD
TBD
TBD
132.00
56.00
59.00
102.00
107.00
133.00
139.00
167.00
176.00
92.00
55.00
1176.00
55.00
63.00
92.00
117.00
131.00
30.00
90.00
120.00


3. 注意事项
A． 本分离液是敏光型的，在运输和贮藏过程中应在18℃-25℃避光保存，启封后置4 ℃
保存避免微生物污染。另外，本品为真空包装，未启封前置于10℃ 以下易出现白色结晶，
影响分离效果。
B． 待分离的血液、组织及细胞要求新鲜，避免冷冻 和冷藏。分离液和所分离样本一
定在20℃水浴箱中复温20分钟保证分离液和所分离样本温度在20℃ ±2℃时分离效果最好，
且所有操作过程一定要在无菌条件下进行。
C． 由于各品牌离心机 的性能不同，国内南北地区温度环境和四季的差异，可能影响
分离效果，用户可以调节离心转数，调节离 心的时间，摸索最佳的分离条件（具体分离条件
各实验室自定）。
D． 最好使用无静电反应的离心管，推荐使用未经过碱处理的玻璃离心管。
E． 最优抗凝剂选择：EDT A、枸橼酸、肝素。应注意在血液稀释过程中应去除抗凝剂
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体积。


4. 应 用
适用于从动物血液或脏器组织中分离NK细胞。

5. 产品性能指标
pH 7.0-7.5
渗透压 280-340mOsmolkg
内毒素 ≤0.5EUml
无菌 直接接种培养14天后培养基澄清
澄明度及不溶性颗粒物 每50ml溶液中含10μm以上的不溶性微粒20粒以下，
含25μm以上的不溶性微粒5粒以下

6. 贮藏及保存期限
18℃-25℃避光保存，有效期两年。启封后置4℃保存，有效期一周。
注：若保证无微 生物污染，启封后可置4℃长期保存。但应注意保存温度较低时本分离液易
出现白色结晶，影响分离效果 。

7. 实验前准备
A． 试剂
NK细胞分离液试剂盒所含试剂
B． 器材
玻璃离心管、玻璃滴管
水平转子离心机、无菌工作台

8. 使用方法说明及图例
A. 在10ml或15ml玻璃离心管中依次小心加入B、D两 种液体各2ml,制成梯度界面（各液
面分层一定要清晰）；
B．取 1ml新鲜抗凝血或组 织匀浆单细胞悬液（细胞浓度为2×10-1×10个ml，具体制备方
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法参照“10.组织单细胞悬液的制备”）与全血及组织匀浆稀释液（Cat#：2010C 1119）1：
1混合后再按2:1的比例与试剂E混合。20℃-25℃静置30分钟，吸取上层浑浊 液备用，弃
去大部分红细胞；
C．将步骤B中吸取的上层浑浊液小心加于D液之液面上；
D. 以400g（约1500转分）离心15分钟(半径15cm水平转子)；
此时离心管 中由上至下细胞分为四层。第一层；为上清液层（包含血小板和血浆）。第
二层；为NK细胞层。第三层 ；为浑浊分离液层（含大量T、B及粒细胞）。第四层；为极少
量红细胞层。收集第二层NK细胞放入含 4-5ml细胞洗涤液（Cat#：2010X1118）的试管中，
充分混匀后，以500g（约18 00转分）离心20分钟，弃去上清留沉淀细胞重新悬起。重复
洗涤2次即得所需细胞。
注：A. 提取率大于80%。
B．分离大量样品时，具体操作方法请参照我公司“ 淋巴细胞快速分离技巧”，查询路径：
登陆我公司网站→在产品搜索中输入GX→点击查
询→点 击详细→在产品相关技巧中下载PDF格式技巧说明。


分离图例













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9. HES-TBD550使用说明
HES 是从支链淀粉衍生出来的，是富含淀粉的复合 物，其生理和化学特性主要由羟乙基
取代度即取代级、平均分子量决定。大量实验表明平均分子量越大对 红细胞的凝集作用越强，
有效提高红细胞的沉降速度，从而使红细胞与其它细胞分离。故而，使用HES -TBD550（羟
乙基淀粉 550）沉淀法是一种高效的细胞分离方法。
间充质干细胞(mesenchymal stem cells ,MSCs) 是指一群可向成骨细 胞、成脂肪细胞、
骨髓基质细胞、肝脏细胞、心肌细胞和神经细胞等多种细胞分化的多潜能组织干细胞, 是在
细胞治疗、基因治疗中有效发挥作用的理想工程细胞。MSCs 不仅存在于骨髓,也可从脐血、
外周血中以及脂肪组织、肌肉、胎儿器官、大脑、牙齿中分离。UCB - MSCs 的分离、筛选、
增殖、分化与脐血样本的选择、培养基的差异以及分离、扩增分化过程中 操作技术等多种因
素有关。目前用于UCB - MSCs 分离的方法有:贴壁筛选法、密度梯度离心 法、流式细胞仪
法和免疫磁珠法。流式细胞仪法对细胞损伤较大，免疫磁珠法价格相对较贵且由于抗原抗 体
反应也容易改变细胞原有特性，而HES-TBD550（羟乙基淀粉 550）联合密度梯度离心法常
与贴壁筛选法结合使用,可提高所得 UCB - MSCs 的纯度， 目前研究多采用此法。国内不少
学者采用羟乙基淀粉沉淀红细胞，然后再进行离心分离单个核细胞，也取 得不错结果。实验
证明采用随机数字表法，将每份脐血随机分入两个不同处理组，从而将脐血样本的个体 差异
减小到最小程度。结果证实，HES-TBD550（羟乙基淀粉 550）联合密度梯度离心法获得的有
核细胞数量明显多于 FICOLL 密度梯度离心法。本实验采用的羟乙基淀粉商品名为
HES-TBD550（羟乙基淀粉 550），克分子渗透压为308mosm／L，胶体渗透压为68／36 mmHg,
可影响红细胞集聚性沉降率。红细胞集聚是可递性桥接结构形成的结果，由大的HES- TBD550
（羟乙基淀粉 550）分子处在红细胞之间联接而成。HES- TBD550（羟乙基淀粉 550）同时还
阻碍白细胞和内皮细胞的黏附，并使平均血小板容积呈现微 弱地降低，从而有轻度抑制血小
板集聚的功能。脐血经HES-TBD550（羟乙基淀粉 550）处 理后，可使红细胞沉积至试管底，
对其它主要成分包括干细胞无影响。经这样处理后，实验时间相对较短 （平均为1.5 h），
步骤相对较少，细胞污染几率小，从而使细胞数损失减少。结论证明，与相应的 干细胞分离
液联合分离使用羟乙基淀粉沉淀法是一种高效的脐血干细胞分离方法。

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10. 组织单细胞悬液的制备
注：A. 本说明只提供机械匀浆制备 单细胞悬液的方法，酶消化法由于各实验室选取的消化
酶种类各不相同，请各实验室自行选择进行试验。
B. 全过程及所需试剂要求无菌环境。

剪碎法：将组织块放入平皿后，加入少量 PBS+20%胎牛血清；用眼科剪将组织剪至匀浆状，
加入10ml PBS+20%胎牛血清；用吸 管吸取组织匀浆，用100目不锈钢滤网过滤到试管内；
离心沉淀1500rpm×3 min，再用P BS+20%胎牛血清洗3次，每次以500rpm短时低速离心除
去细胞碎片，以200目不锈钢滤网 过滤去细胞团块。作细胞计数并调整细胞浓度为（2～5）
×10个ml。常温下放置, 待测细胞的活 力。分离前用20%胎牛血清悬起细胞浓度为2×10-1
×10个ml的单细胞悬液备用。
匀浆器法：用眼科剪将组织剪成小块；放入70ml组织研磨器内，加入2ml PBS+20%胎牛血
清；缓慢转动研棒，研磨至匀浆；用10ml PBS+20%胎牛血清冲洗研器 ；收集细胞悬液，经
200目不锈钢滤网过滤；离心沉淀800prm×2min ，再用PBS洗3次，离心沉淀。以下处理
同剪碎法。
细胞计数方法:
细胞计数法 是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。一般利用计数板（血球计数板）
进行。既可用于分离（散） 细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，也可用于
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对培养物的细胞数量进行计数。不论计数的对象如何，均须制备分散的细胞悬液。
计数与计算过程
1）、在细胞计数板中央放置计数专用的盖玻片。
2）、用玻璃虹 吸管吸取细胞，让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹蹧处流出悬液，至
盖玻片被液体充满为止。 3）、置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。对于压线的细胞只计数在上线和左线者，
对于细胞 团按单个细胞计数。
4）、按下式计数细胞悬液的密度：
细胞密度＝（4个大格细胞总数4）×10个ml×稀释倍数
公式中乘以10因为计数板中每一个大格的体积为：
1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）＝0.1mm 而 1ml＝1000mm
细胞计数要点：
A． 进行细胞计数时，要求悬液中细胞数目不低于10个ml，如果细胞 数目很少要进行离
心再悬浮于少量培养液中；显微镜下计数时，遇到2个以上细胞组成的细胞团，应按单 个细
胞计算。如果细胞团>10％，说明细胞分散不充分; 或细胞数<200个10mm或>500个10 mm
时，说明稀释不当，需重新制备细胞悬液。
B． 要求细胞悬液中的细胞分散良好，否则影响计数准确性。
C． 取样计数前，应充分混匀细胞悬液，尤其是多次取样计数时更要注意每次取样都要混
匀，以求计数准确；
D． 数细胞的原则是只数完整的细胞，若细胞聚集成团时，只按照一个细胞计算。如果细
胞压 在格线上时，则只计上线，不计下线，只计左线，不计右线。
E． 操作时，注意盖玻片下不能有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中，否则要重新计数。
初学者易犯的错误：
A． 计数前未将待测悬液吹打均匀。
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4
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B． 滴入细胞悬液时盖玻片下出现气泡。
C． 滴入悬液时的量太多，至使细胞悬液流入旁边的槽中。


11. 生产企业
企业名称：天津市灏洋生物制品科技有限责任公司
地址：中国医学科学院生物医学工程研究所2号楼2层
天津市南开区白堤路 236 号 201-216（科技园）
邮政编码：300192
电话：
传真号码：
网址：
邮箱：gx@

12. 参考文献
［1］ Meier C, Middelanis J, Wasielewski B, et al. Spastic paresis after perinatal
brain damage in rats Is reduced by human cord blood mononuclear cells［J］. Pediatric
Research, 2006,59(2):244-249.
［2］ Boyle AJ, Schulman SP, Hare JM , et al. Stem cell therapy for cardiac
repair:ready for the next step［J］. Circulation, 2006, 114(4):339-352.
［3］ 程范军,邹 萍,杨汉东,等.人脐血间充质干 祖细胞诱导为心肌样细胞的实验研究［J］.
中华器官移植杂志,2003,24:220-222.
［4］Dennis JE,Charbord and differentiation of human and murine stroma
［J］.Stem Cells,2002,20(3):205.
［5］ Yu JC, Daniel TS, Ching PT, et al. Disparate mesenchyme-lineage tendencies
in mesenchymal stem cells from human bone marrow and Umbilical Cord Blood［J］. Stem
Cells, 2006,24(3) : 679-685.
［6］ Compagnoli C, Roberts IAG, Kumar S, et al. Identification of mesenchymal
stemprogenitor cells in human first trimester fetal blood, liver and bone marrow
［J］. Blood, 2001,98:2396-2402.
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［7］ Miura M, Gronthos S, Zhao M, et al. SHED: stem cells from human exfoliated
deciduous teeth［J］. Proc Natl Acad Sci USA, 2003,100:5807–5812.
［8］ 迟作华, 张 洹, 何冬梅, 等. 脐血间充质干细胞培养条件的优化［J］. 中国实用内
科杂志,2006, 26(5):372-375.
［9］ 向 静, 江德鹏, 王昌铭，等. 脐血单个核细胞体外培养和诱导后神经干细胞标志物
mRNA 的表达［J］. 重庆医科大学学报,2005 ,30 (3):352-355.
［10］ 孙海梅，季凤清，李荣平，等.不同培养条件下人脐血间充质干细胞的差异［J］. ***，
2006, 10( 45 )：51-53.
［11］ 朱美玲，伍新尧，陈汝光，等.不同分离方法分离脐血造血细胞效率的比较［J］. 中
国输血杂志,2002 , 15 (3):179-780.
［12］ 郑德先，吴克复 ，褚建新.现代实验血液学研究方法与技术.北京医科大学中国协和
医科大学联合出版社，1999.
［13］ 鄂征.组织培养.北京出版社，1995.
［14］ 朱立平，陈学清.免疫学常用实验方法.人民军医出版社，2000.



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