天线宝宝下雪了荧光定量PCR法检测乙型肝炎病毒研究

2020年12月29日发(作者：反复细菌性阴炎怎么办?有哪些解决的地方?)
荧光定量PCR法检测乙型肝炎病毒研究

摘要：目的：探究荧光定量PCR法检测乙型肝炎病毒
的意义及其原理。

方法：对临床1025份血清标本用荧光定量聚合酶链反
应的方法进行HBV DNA定量测试，然后进行研究。
结果：HBsAg（+）、HBeAg（+）、HBcAb（+）模式HBV
DNA阳性率为99.2 %（390393），其平均拷贝数为4.65×108
拷贝ml；在HBsAg（+）、HBeAb（ +）、HBcAb（+）模式中
HBV DNA阳性率为62.5%（261417）；而68例HBs Ag（+）、
HBcAb（+）模式中，26例（占38.2%）检出HBV DNA。
结论：荧光定量PCR法是检测乙型肝炎的常用方法，该
方法有较高的灵敏性，较高的准确性可以对是否 感染乙型肝
炎做出比较精准的判断。
关键词：荧光定量PCR法 乙型肝炎 聚合酶链反应
Doi：.1671-8801.2014.06.596
【中图分类号】R9 【文献标识码】B 【文章编号】
1671-8801（2014）06-0368-01
乙型肝炎又叫乙 肝，以肝脏炎性病变为主，并会引起众
多器官损害。是一种病毒性疾病，如今已广泛流行于世界各
国，也是我国现在较为流行，发病广泛，危害性强的一种疾
病[1]。现在最为广泛测试方法就是PC R法。所谓的PCR法
其实是一种分子生物学方法，PCR法的全名为聚合酶链反
应。笔者通过 对临床的1025份血清标本进行荧光定量聚合
酶链反应探讨荧光定量PCR法的意义及其原理，为甲肝 患者
的治疗进行指导。
1 材料与方法
1.1 研究对象。选择20 13年1月至2013年10月来本院
疑似乙肝患者及确诊的乙肝患者共1025人其中男565人，< br>女460人。年龄15至70不等，平均年龄33岁。
1.2 处理标本。取1025位 患者和疑似患者静脉血2ml，
放置在4摄氏度的冰箱内冷藏2小时，分离血清，从血清中
提取 HVB-DNA。
1.3 仪器。自动荧光PCR仪为美国stratagene Mx3000p，
酶标仪为美国宝特的ELX-800。
1.4 试剂。HBV- DNA荧光定量试剂盒操作及原理见文
献[2]。
2 结果
准确的测出乙型肝炎病毒的数量，并且比以前的方法在
时间上大大的缩短。
3 讨论
DNA的天然复制有些相似，它的特异性依赖于存在与靶
序列两端互补的寡核苷酸引物其步 骤为先将模板DNA变性
也就是第一步变性，加热使模板DNA至93摄氏度，加热后
形成DN A单链，可以便于与引物结合。第二步将DNA退火，
当模板DNA经过加热变成DNA单链后使其温度 降低到55
摄氏度左右，让引物和模板DNA单链结合。第三步延伸，
将结合好的结合物在酶的 作用下，产生新链一般进行三十次
的循环，在一开始的循环阶段，原来的DNA链会充当模板
桥 梁的角色，随着循环次数的增多引物延伸链的急剧增多而
变成主要的模板，如此循环之后在二至三小时之 后基因就会
放大几百万倍。[3]
PCR在复性和延伸温度上有着其特殊的要求复性的 温
度是PCR扩增能否顺利进行的关键，一般在50摄氏度到60
摄氏度之间。具体的温度主要 是由引物的tm值决定的。延
伸温度大多数设定在72摄氏度，如果复性的温度很高，可
以将延 伸温度和复性温度设置成同一个温度。基于PCR三步
骤的原理，大致可以将PCR的温度化为三段，先 设置90至
95摄氏度这是双链DNA变性，然后迅速的讲温度设置到40
至60摄氏度再快速 升温到70至75度，完成后两步。反应
时间变性一般在30秒就可以了，如果模板=DNAG+C含量 较
高，或者直接用细胞做模板，这样变性的时间就可以根据情
况而增长。而复性的时间一般来说 30秒就足够了。同时PCR
在循环次数上也跟模板DNA有着密切关系，通常为25倒35
次 。
HVB-DNA定量检测方法的出现从本质上改变了只是单
一的免疫学方法间接检测 的局限性，不仅可以判断疾病的严
重程度和传染性，而且HVB-DNA是直接反应HBV复制状
态以及传染性的最佳指标。通过PCR定量结果与血清免疫学
的结果进行综合评价，并用荧光定量PC R检测乙型肝炎病毒
的DNA，将二者进行结合，这样一来对已经感染乙肝的病人
的今后的治疗 就会更佳的科学。已知HbsAg在血清中被检验
出来的时候一般在乙肝病毒感染后的2到4月出现，平 均为
56天左右。而HBV-DNA的检出可以将通常人们说的“窗口
期“提前六到十五天，这 对乙肝病人在早期被诊断和治疗有
着重要的意义。一般来说HBV-DNA持续阳性超过六个月就
会转变成慢性肝炎。通过这一技术，往往几个星期的乙肝检
测，用PCR区区几个小时就可以完成了。
因为PCR法的灵敏度高可以对HBV-DNA检测治疗前进
行病毒量的检测，这样可以更 准确的选择相应的药品，避免
盲目择药。同样PCR检测法可以在HBV-DNA检测治疗后准
确的测出病毒数量，有利于判断病情，对下一步治疗做出一
个合理的参考。这样来看荧光定量PCR法H BV-DNA在乙肝
的治疗中起着非常重要的作用，当荧光定量PCR法
HBV-DNA测出的 指标降低时这对乙肝治疗的实施有着至关
重要的意义，这种状态是乙肝转阴前的征兆，是康复前非常关键的一步[4]，只有当体内HBV-DNA定量指标降低了，病
毒的克隆繁殖才会有所停止并得 以终止，只有这样乙肝才可
以得以控制，乙肝的根治才会看到希望。实时的荧光定量
PCR的出 现，极大的减少了定量检测的过程中的不必要因
素，而且实现了真正的绝对定量。随着生物芯片技术和荧 光
技术的不断更新换代，荧光定量PCR在医学检测领域的前景
会更加开拓。荧光定量PCR技 术还可以不断的提高，这就需
要我们科技人员不断进取，不断发展的科学技术鞭策着我们
前进。
参考文献
[1] 《乙型病毒性肝炎》人民军医出版社
[2] 《中华医学检验杂志》荧光定量聚合酶链反应检测
乙型肝炎病毒1999年22期
[3] 《实时量PCR检测lgh基因重排的研究》昆明医学
院，2004年
[4] 《湖南省乙肝病毒基因型分布及临床意义》刘映霞，
胡国龄湖南医科大学学报，2002年01期