最佳自体脂肪隆胸医院植物总抗氧化能力(TAC)比色法(ABTS)定量检测试剂盒

2020年12月25日发(作者：【卵巢畸胎瘤】卵巢畸胎瘤是怎么形成的_卵巢畸胎瘤影响生)

植物总抗氧化能力（TAC）比色法（ABTS）定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

植物总抗氧化能力（TAC）比色法（ABTS）定量检测 试剂盒是一种旨在通过过硫酸钾的参与，使染料ABTS
氧化，在抗氧化剂的存在下，通过分光光度仪， 观察其峰值下降的变化，来定量检测对应于标准水溶性生
育酚Trolox的总抗氧化能力，即抑制氧化 等值浓度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功
实验证明的。适用于各种体液包括血浆、 血清、尿液、脑脊液、唾液、精液等各种体液的总抗氧化能力检
测。产品严格无菌，即到即用，操作简易 ，性能稳定。

技术背景

超氧自由基阴离子（superoxide radical；O
2
-
）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H< br>2
O
2
）、羟自由基或氢氧基
（hydroxyl radical；OH
-
）、过氧化基（peroxyl radical；ROO
-
）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷
氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO
-
）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO
-
）
次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等
细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产 生和增多，将导致细胞衰老或凋亡，甚而导致诸如
冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理 状况。在生物系统内，通过抗氧化酶例如超氧化物
歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶等，大分子 ，例如白蛋白、铜蓝蛋白（ceruloplasmin；CER）、
铁蛋白（ferritin）和抗 氧化因子，例如生育醇、类胡萝卜素、抗坏血酸、还原性谷胱甘肽和尿酸胆红素
（bilirubin） 等，产生抗氧化能力，即捕获自由基的能力，达到消除或降低ROS的损害。通过过硫酸钾
（potas sium persulfate）氧化2,2’-连氮-双（3-乙基苯并噻唑-6-磺酸）（2,2'-Azino- bis(3-ethylbenzthiazoline-
6-sulfonic acid)，diammonium salt；ABTS）产生的ABTS自由基，衡量体系中抗氧化剂捕获自 由基或者消耗
抗氧化剂的能力，在分光光度仪（730nm波长）的帮助下，观察其峰值下降的变化，并 与标准化抗氧化剂
水溶性生育酚Trolox对照。


产品内容

缓冲液（Reagent A）



































毫升
管
毫升
毫升
微升
1份
染色液A（Reagent B1）
染色液B（Reagent B2）
氧化液（Reagent C）
标准液（Reagent D）
产品说明书




保存方式

保存在－20℃冰箱里，有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管：用于样品存放和标准品配制的容器
4℃微型台式离心机：用于样品处理
96孔板：用于比色的容器
分光光度仪或酶标仪：用于比色变化

实验步骤

一、 样品准备

选择一：血浆样品
1． 准备好肝素或ACD抗凝管（注意：
避免使用
EDTA
抗凝管
）
2． 抽取1毫升血液，置于抗凝管里
3． 放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
4． 小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血浆成分（注意：
避免触碰白色液体层
）
5． 即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存
6． 移取10微升上述制备的血浆到新的1.5毫升离心管
7． 加入xx微升 缓冲液（Reagent A），混匀
8． 放在冰槽里待测

选择二：血清样品
1． 准备好不含抗凝剂的储存管
2． 抽取1毫升血液，置于储存管里
3． 室温下，静置30分钟，直至血液凝结
4． 放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为2000g（或5000RPM，例如eppendorf 5415）
5． 小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血清成分（注意：
避免触碰白色液体层
）
6． 即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存
7． 移取10微升上述制备的血清到新的1.5毫升离心管
8． 加入xx微升 缓冲液（Reagent A），混匀
9． 放在冰槽里待测

选择三：尿液脑脊液唾液精液样品
1． 准备好1.5毫升离心管
2． 移取1毫升液体到离心管
3． 放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
4． 小心移取上清液到新的1.5毫升离心管
5． 即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存
6． 移取10微升到新的1.5毫升离心管
7． 加入xx微升 缓冲液（Reagent A），混匀
8． 放在冰槽里待测

二、标准液准备

1． 准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管
2． 移取xx微升 标准液（Reagent D）到1号管
3． 小心移取xx微升 缓冲液（Reagent A）和xx微升 标准液（Reagent D）到2号管，混匀
4． 小心移取xx微升 缓冲液（Reagent A）和xx微升 标准液（Reagent D）到3号管，混匀
5． 小心移取xx微升 缓冲液（Reagent A）和xx微升 标准液（Reagent D）到4号管，混匀
6． 小心移取xx微升 缓冲液（Reagent A）到5号管
7． 将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表

管号 缓冲液（Reagent A） 标准液（Reagent D） 测定体系
标准 Trolox浓度
1
2
3
4
5

三、 样品测读

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂置于室温下融化，移取xx毫升 染色液B（Reagent B2）到1管 染色
液A（Reagent B1）里，混匀，置于暗室里室温下孵育过夜（16小时）后，标记为 染色工作液，避免光
照。然后进行下列操作。

1． 准备1个96孔板，做好标记：空白对照孔、标准对照孔、样品孔
2． 分别移取xx微升 缓冲液（Reagent A）到96孔板里的每个孔里
3． 分别加入xx微升 染色工作液
4． 分别加入xx微升 氧化液（Reagent C）
5． 加入xx微升 缓冲液（Reagent A）到空白对照孔
6． 加入xx微升上述配制的 标准液（Reagent D）到相应标准对照孔里
7． 加入10微升体液样品到样品孔里
8． 轻轻摇动96孔板，使其混匀
9． 室温下孵育1分钟
10． 即刻放进酶标仪里测读：730nm波长
11． 分析结果：
1） 构建标准曲线：纵座标 （Y轴）为吸光单位（OD
730
nm）；横座标（X轴）为标准Trolox浓
度（ 微摩尔升）
2） 空白对照孔为最大吸光单位（OD
730
nm）读数
3） 标准对照孔和样品孔为实际吸光单位（OD
730
nm）读数
4） 根据标准曲线获得样品对应Trolox浓度（微摩尔升）
5） 计算样品实际总抗氧化能力


6） 根据下列公式计算测定体系中样品量的总抗氧化能力（实际抑制百分率）

7） IC50：50％抑制率所需的样品单位：TROLOX等值或样品蛋白浓度（毫克毫 升）或样品容
量（微升）


xx微升
xx微升
xx微升
xx微升
xx微升
xx微升
xx微升
xx微升
xx微升
0
xx微摩尔升
xx微摩尔升
xx微摩尔升
xx微摩尔升
0

注意事项

1． 本产品为50次操作
2． 本产品测试范围为高浓度30至150微摩尔
3． 操作时，须戴手套
4． 体液制备的所有操作均须在4℃状态下进行
5． 测试前，样品须处于新鲜收集
6． 样品须清澈
7． 样品避免含有Tris、EDTA和还原剂等
8． 空白对照孔的吸光读数应为2.0以上，如果低于1.5，不能用于高浓度检测，须增加 染色工作液的室
温孵育时间
9． 染色工作液避免反复在室温空气中久置。如果空白对照孔 的吸光读数为3.5以上，建议使用无离子水
稀释到2.5至3.0则可
10．样品读数越低，抗氧化能力越高
11．样本量不宜超过20微升
12．可以使用比色皿检测
13．如果样品抗氧化剂浓度过高或过低， 建议稀释或增加样品浓度
14．如果测试样品很多，建议使用排枪移液
15．如果用户没 有730nm波长滤波器，可以使用640nm至810nm之间的任一波长替代；或者使用405nm
波长替代
16．人体体液的总抗氧化能力在0.2至2毫摩尔标准水溶性生育酚Trolox的浓度
17．本公司提供低浓度测试试剂产品
18．本公司提供系列抗氧化分析试剂产品


质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定检测敏感