如何折爱心吸附无细胞百白破联合疫苗

2020年12月18日发(作者：甲营养不良是什么病)

吸附无细胞百白破联合疫苗
Xifu Wuxibao Bai Bai Po Lianhe Yimiao
Diphtheria，Tetanus and Acellular Pertussis Combined Vaccine，Adsorbed


本品系由无细胞百日咳疫苗原液、白喉类毒素原液及破伤风类毒素原液加入氢氧化铝
佐剂制成。用于预防 百日咳、白喉、破伤风。
1基本要求
生产、检定用设施、水、器具、动物等应符合“凡例” 要求；生产用原辅材料应符合
现行《中国药典》的要求。
2制造
2.1混合前单价原液
2.1.1无细胞百日咳疫苗原液制造应符合本品种附录的规定。
2.1.2白喉类毒素原液制造应符合“吸附白喉疫苗”中2.1～2.2项的规定。
2.1.3破伤风类毒素原液制造应符合“吸附破伤风疫苗”中2.1～2.2项的规定。
2.1.4原液检定
2.1.4.1百日咳疫苗原液检定
按本品种附录中 2项进行。
2.1.4.2白喉类毒素原液检定
按“吸附白喉疫苗”中3.1项进行。
2.1.4.3破伤风类毒素原液检定
按“吸附破伤风疫苗”中3.1项进行。
2.2半成品
2.2.1配方
每1ml半成品中各种抗原成分含量如下：
无细胞百日咳疫苗原液
不高于
18μg PN
白喉类毒素
不高于
25 Lf
破伤风类毒素
不高于
7 Lf
2.2.2佐剂配制
2.2.2.1配制氢氧化铝，可用三氯化铝加氨水法或三氯化铝 加氢氧化钠法。用氨水配
制者需透析除氨后使用，也可用其他适宜方法配制。
2.2.2.2配制成的氢氧化铝原液应为浅蓝色或乳白色的胶体悬液，不应含有凝块或异
物。
2.2.2.3氢氧化铝原液应取样测定氢氧化铝及氯化钠含量。
2.2.3合并及稀释 < br>将白喉类毒素、破伤风类毒素及无细胞百日咳疫苗原液加入已稀释的佐剂内，调节pH
值至5.8 ～7.2。
2.2.4半成品检定
按3.1项进行。
2.3成品
2.3.1分批
应符合“生物制品分批规程”规定。
2.3.2分装
应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。
2.3.3规格
每瓶0.5ml、1. 0ml、2.0ml、5.0ml。每1次人用剂量0.5ml，含无细胞百日咳疫苗效
价应不低于4. 0IU，白喉疫苗效价应不低于30IU，破伤风疫苗效价应不低于40IU。
2.3.4包装
应符合“生物制品包装规程”规定。
3检定
3.1半成品检定
无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。
3.2成品检定
3.2.1鉴别试验
3.2.1.1无细胞百日咳疫苗
抽取本品按3.2.4.1进行，应产生相应抗体，或采用其他适宜的抗原抗体反应试验。
3.2.1.2白喉类毒素
可选择下列一种方法进行：（1）疫苗注射动物应产生抗体（附录Ⅺ C）；（2）疫苗加
枸橼酸钠或碳酸钠将佐剂溶解后，做絮状试验（附录Ⅺ D），应出现絮状反应；（3）疫苗经
解聚液溶解佐剂后取上清，做凝胶免疫沉淀试验（附录Ⅷ C），应出现免疫沉淀反应。
3.2.1.3破伤风类毒素
可选择下列一种方法进行：（1）疫苗注射动物后应产生破伤风抗体（附录Ⅺ B）；（2）
疫苗加入枸橼酸钠或碳酸钠将吸附剂溶解后做絮状试验（附录Ⅺ D），应出现絮状反应；（3）
疫苗经解聚液溶解佐剂后取上清，做凝胶免疫沉淀试验（附录Ⅷ C），出现免疫沉淀反应。
3.2.2物理检查
3.2.2.1外观检查
振摇后应呈均匀乳白色混悬液，无摇不散的凝块或异物。
3.3.2.2 装量
按附录ⅠA中装量项进行，应不低于表示量。
3.2.3化学检定
3.2.3.1pH值
应为5.8～7.2（附录Ⅴ A）。
3.2.3.2氯化钠含量
应为7.5～9.5gL（附录Ⅶ G）。
3.2.3.3氢氧化铝含量
应为1.0～1.5mgml（附录Ⅶ F）。
3.2.3.4硫柳汞含量
应不高于0.1gL（附录Ⅶ B）。
3.2.3.5游离甲醛含量
应不高于0.2gL（附录Ⅵ L）。
3.2.3.6戊二醛含量
应小于0.01gL（附录ⅥⅠ）
3.2.4效价测定
3.2.4.1 无细胞百日咳疫苗
按“吸附百白破联合疫苗”中附录2进行。以适宜的稀释 倍数稀释至第一个免疫剂量，
再按5倍系列稀释。免疫时间为21天。每1次人用剂量的免疫效价应不低 于4.0IU；且95%
可信限的低限应不低于2.0IU。如达不到上述要求时可进行复试，但所有的 有效试验结果必
须以几何平均值（如用概率分析法时，应用加权几何平均）来计算。达到上述要求即判为 合
格。
3.2.4.2白喉疫苗
每1次人用剂量中白喉类毒素的免疫效价应不低于30IU（附录Ⅺ C）。
3.2.4.3破伤风疫苗
每1次人用剂量中破伤风类毒素的免疫效价应不低于40IU（附录Ⅺ B）。
3.2.5无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。
3.2.6特异性毒性检查
3.2.6.1无细胞百日咳疫苗
按本品种附录中2.5项进行。
3.2.6.2白喉、破伤风疫苗
用体重250～ 350g豚鼠，每批制品不少于4只，每只腹部皮下注射2.5ml，分两侧注
射，每侧1.25ml， 观察30天。注射部位可有浸润，经5～10天变成硬结，可能30 天不完
全吸收。在第10天、第2 0天、第30天称体重，到期体重比注射前增加，局部无化脓、无
坏死、无破伤风症状及无晚期麻痹症者 为合格。
3.2.7毒性逆转试验
每批供试品置37℃ 4周，按本品种附录中2.6项进行。
4保存、运输及有效期
于2～8℃避光保存和运输。 自
生产
之日起有效期为2年，自百日咳原液脱毒之日起总
有效期不得超过3年。
5附录
无细胞百日咳疫苗原液制造及检定要求
6使用说明
应符合“生物制品包装规程”规定和批准的内容。


附录 无细胞百日咳疫苗原液制造及检定要求

本品系由百日咳杆菌的培养物或其上清液，经硫酸铵 盐析和密度梯度离心法提取百日
咳毒素（PT）和丝状血凝素（FHA）等有效组分，经脱毒制成。用于 制备吸附无细胞百白破
联合疫苗。
1.制造
1.1菌种
生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。
1.1.1名称及来源
采用百日咳Ⅰ相CS菌株或其他适宜菌株。
1.1.2种子批的建立
应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。
1.1.3种子批的传代
工作种子批菌种启开后传代不应超过10代用于生产。
1.1.4种子批菌种的检定
1.1.4.1培养特性
于包-姜（Bordet- Gengou）培养基或其他适宜培养基上培养，各菌株应具有典型的形
态及生化特性。
1.1.4.2血清学试验
取经35～37℃培养40～48小时的菌苔，混悬于生理氯化钠 溶液或PBS内，制成适宜
浓度的菌悬液，与Ⅰ相参考血清做定量凝集反应，凝集效价应达到血清原效价 之半。
并同时
进行Fim2,Fim3的检测。
1.1.4.3皮肤坏死试验 取经35～37℃培养40～48小时的菌苔，混悬于PBS内，并稀释成不同浓度的菌液；
取家兔 或豚鼠至少2只，分别用每一稀释度的菌液皮内注射0.1ml，经72小时观察注射部
7
位的 皮肤反应，如其中1只家兔或豚鼠在注射含菌4.0×10以下稀释度的部位出现出血性
坏死者，为阳性 反应，判为合格。
1.1.4.4毒力试验
用体重16～18g的小鼠至少3组，每组至少 10只，在麻醉状态下从鼻腔滴入经培养
20～24小时、以PBS稀释的菌液0.05ml，观察14 天，记录小鼠生死情况，按Reed-Muench
8
法计算LD
50
，1L D
50
的菌数应不高于1.2×10。
1.1.4.5效价测定
按“吸附百白破联合疫苗”附录2进行。
1.1.5菌种保存
种子批应冻干保存于8℃以下。
1.2原液
1.2.1生产用种子
将工作种子批菌种启开后，接种于改良包-姜培养基
或活性炭半综合培养基
或其他适< br>宜培养基上，于35～37℃培养不超过72小时，以后各代不超过48小时。传代菌种保存不
得 超过14天，工作种子批启开后用于生产时不应超过10代。
1.2.2生产用培养基
应选用
S-S（Stainer-Scholte）培养基
或其他适宜培养基。
1.2.3培养
可采用静置培养法或发酵罐培养法，培养过程应取样做纯菌检查。
1.2.4收获和杀菌
培养物于对数生长期后期或静止期前期收获。在培养物中加入硫柳汞杀菌。
1.2.5纯化
采用硫酸铵盐析和蔗糖密度梯度离心去除内毒素，收集PT、FHA有效组分。
1.2.6蛋白氮含量测定
依法测定（附录Ⅵ B第二法）。
1.2.7纯度测定
采用聚丙烯酰胺凝胶电泳或SDSPT和
FHA两种组分，且批间比例应保持一致。PT和FH A等有效组分应不低于总蛋白含量的85% 。
1.2.8脱毒和匀化
采用甲醛溶液或戊二醛溶液脱毒，然后用适宜方法除去脱毒剂，再经超声波匀化处理
即为原液。
2.检定
2.1染色镜检
取供试品的沉淀物，涂片染色镜检，不应有百日咳杆菌和其他细菌。
2.2效价测定
按“吸附百白破联合疫苗”附录2 进行。即先将原液稀释至成品的浓度后，以适宜的
稀释倍数 为第一个免疫剂量，再按5倍系列稀释，免疫21天后攻击。
2.3无菌检查
依法检查（附录Ⅻ A），应符合规定。
2.4不耐热毒素试验
用生理氯化钠溶液 将供试品稀释至半成品浓度的2倍，用48～72小时龄的乳鼠至少4
只，每只皮内注射0.025ml ，或用体重2.5kg的家兔至少2只，每只皮内注射0.1ml，观察
4日，受试动物不得出现不耐热 毒素引起的任何局部反应。
2.5特异性毒性检查
毒性参考品按照每批标示进行稀释，将供试品稀释至与成品相同浓度
。
用体重14～16g
NIH小鼠（雌性或雌雄 各半），毒性参考品的每一稀释度和供试品各用一组，每组至少10只。
每只小鼠腹腔注射0.5ml， 分别进行2.5.1～2.5.3项试验。
2.5.1小鼠体重减轻试验
于注射前和注射后
16～18小时
分别称取小鼠体重，试验结果经统计学方法处理后，
注射供试品的小鼠 体重减轻毒性的活性应不高于10 BWDUml。
2.5.2小鼠白细胞增多试验
于注射 后3日分别取小鼠末梢血进行白细胞计数。试验结果经统计学方法处理后，注
射供试品的小鼠白细胞增多 毒性的活性应不高于0.5LPUml。
2.5.3小鼠组胺致敏试验
于注射后4日，每只 小鼠腹腔注射0.5ml溶液（含二盐酸组胺4mg或二磷酸组胺2mg），
30分钟后分别测小鼠肛温 。试验结果经统计学方法处理后，供试品的小鼠组胺致敏毒性的
活性应不高于0.8 HSUml，
且无动物死亡
。
2.6毒性逆转试验
每批供试品置37℃ 4周，然后按2.5.3项进行试验。
2.7热原检查
用生理氯化钠溶液将供试品稀释成半成品浓度的150，依法检查（附录Ⅻ D），应符
合规定。注射剂量按家兔体重每1kg注射1ml。
3.保存、运输及有效期
于2～8℃避光保存和运输。原液自脱毒之日起总有效期为3年。

吸附无细胞百白破联合疫苗使用说明

[药品名称]
通用名：吸附无细胞百白破联合疫苗
英文名称： Diphtheria, Tetanus and Acellular Pertussis Combined Vaccine
Adsorbed
汉语拼音：Xifu Wuxibao Baibaipo Lianhe Yimiao
[成分和性状]
本品系由无细胞百日咳疫苗原液、白喉类毒素原液及破伤风类 毒素原液加氢氧化铝佐
剂制成，为乳白色悬液，放置后佐剂下沉，摇动后即成均匀悬液，含防腐剂。
辅料：按批准的执行。


[接种对象]
3个月～6周岁儿童。
[作用与用途]
接种本疫苗后，可使机体产生免疫应答。用于预防百日咳、白喉、破伤风。
[规格]
每瓶0.5ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml。每1次人用剂量0.5m l，含百日咳效价不低于4.0IU；
白喉效价不低于30IU；破伤风效价不低于40IU（豚鼠法） 。
[用法用量]
[免疫程序和剂量]
(1) 臀部或上臂外侧三角肌肌内注射。
(2)基础免疫：共3针，自3月龄开始至12月龄，每针间隔4～6周，每次注射0.5ml。
加强免疫通常在基础免疫后18～24月龄内进行，注射剂量为0.5ml。
[不良反应]
注射本品一般无不良反应，有的接种部位有轻度红晕、痒感或有低热，一般不须特殊处理，
即自 行消退，如有严重反应及时诊治。
常见不良反应：
⑴

注射部位可出现红肿、疼痛、发痒。
⑵

全身性反应可有低热、哭闹等，一般不需处理即可自行缓解。
罕见不良反应：
⑴

烦躁、厌食、呕吐、精神不振等。
⑵

短暂发高热反应：应给予物理及药物方法进行对症处理，以防高热惊厥。
⑶

局部硬结，1～2月即可吸收。严重者可伴有淋巴管或淋巴结炎，应及时就诊。
极罕见不良反应：
⑴

局部无菌性化脓
:
一般要用注射器反复抽出脓液，严重时（ 破溃）需扩创清除坏死组
织，病程较长，最后可吸收愈合。

⑵


过敏性皮疹：个别接种者在接种疫苗后
72
小时内出现荨麻疹病例，出现反应时，应< br>及时就诊，给予抗过敏治疗。

⑶

过敏性休克：一般在注射疫苗后
1
小时内发生。应及时抢救，注射肾上腺素进行治疗。

⑷

过敏性紫癜：极个别接种者可出现过敏性紫癜病例，出现过敏性紫癜反应时应及 时就
诊，应用皮质固醇类药物给予抗过敏规范治疗，治疗不当或不及时有可能并发紫癜性肾炎。

⑸

血管神经性水肿。

⑹
神经系统反应，临床表现为 抽搐、痉挛、惊厥、嗜睡及异常哭叫等症状，神经炎及神
经根炎，变态性脑脊髓膜炎。

[禁忌]
(1) 有癫痫、神经系统疾病及惊厥史者；
(2) 患急性传染病(包括恢复期)及发热者，暂缓注射；
（3）有过敏史者。
⑴

已知对该疫苗的任何组分过敏者。
⑵

患急性疾病、严重慢性疾病、慢性疾病的急性发作期和发热者。
⑶

对脑病、未控制的癫痫和其他进行性神经系统疾病者。
⑷

注射百日咳、白喉、破伤风类疫苗后发生神经系统反应者
。

[注意事项]

⑴

以下情况者慎用：家族和个人有惊厥史者、患慢性疾病者、有癫痫史者、过敏体质者。
⑵ 使 用时应充分摇匀，如出现摇不散之凝块、异物、疫苗曾经冻结、疫苗瓶有裂纹或标签
不清者，均不得使用 。
⑶

疫苗开启后应立即使用，如需放置，应置2～8℃，并于1小时内用完，剩余均应废弃。
⑷ 注射后局部可能有硬结，
1～2个月即
可逐步吸收，注射第2针时应换另侧部位。
⑸

接种本品和注射免疫球蛋白，应至少间隔1个月以上，以免影响免疫效果。
⑹ 应备有肾上腺素等药物，以备偶有发生严重过敏反应时急救用。接受注射者在注射后应
在现 场休息片刻
观察至少30分钟
。
⑺ 注射第1针后出现高热、惊厥等异常情况者，不再注射第2针。
⑻ 严禁冻结！
[贮藏]
于2~8℃避光保存和运输。
[有效期]
2年
24个月

[执行标准]
[批准文号]
[生产企业]
企业名称：
生产地址：
邮政编码：
电话号码：
传真号码：
网址：
[参考文献]

附录：无细胞百日咳疫苗鉴别试验（ELISA方法）

本法系采用酶联免疫法测定无细胞百日咳疫苗有效组分百日咳毒素（PT）和丝状血凝
素（FHA）。
试剂（1）包被液（pH9.6 碳酸盐缓冲液）称取碳酸钠1.59g，碳酸氢钠2.93g，加水溶
解，定容至1000ml。
（2） 磷酸盐缓冲液（pH7.4）称取氯化钠 8.0g、氯化钾 0.20g、磷酸氢二钠 1.44g、
磷酸二氢钾 0.24g，加水溶解并稀释成1000ml，121℃灭菌15分钟。
（3）洗涤液（PBS-Tween20） 取聚山梨酯20(Tween20) 0.5ml，加磷酸盐缓冲液至
1000ml。
（4）封闭液 称取牛血清白蛋白 1.0g，加洗涤液溶解，并稀释至100ml。
（5）稀释液 称取牛血清白蛋白 0.5g，加洗涤液溶解，并稀释至100ml。
（6）底物缓冲液（0.005molL醋酸钠- 枸橼酸缓冲液） 称取醋酸钠 0.68g、枸橼酸
（C
6
H
8
O
7
·H
2
O）1.05g，加水溶解并稀释至1000ml，调节pH值至3 .6。
（7）底物液A 称取3, 3’,5, 5’-四甲基联苯胺（TMB）0.08g，加二甲基亚砜 40ml溶
解，加甲醇 60ml，混匀，加底物缓冲液100ml，避光搅拌 2小时至完全溶解，室温静置 4
小时后使用。
（8）底物液B 取 1.5%过氧化氢溶液 3.2ml，加底物缓冲液至 1000ml。
（9）底物液 取底物液A和底物液B等体积混匀，临用现配。
（10）终止液 2molL硫酸溶液。
对照品溶液的制备 用纯化的PT或FHA参考品作阳性对照（2-8
其他适宜的对照品作阴性对照。
供试品溶液的制备 取疫苗供试品适量，加枸橼酸纳或其他适宜的试剂进行疫苗解吸
附处理。
测定法 分别取抗PT或FHA抗体（2-5 gml）适量，以100μl孔加至酶标板内，
用封口膜封好，2~8℃ 放置16~20小时；用洗涤 液洗板3次；用洗涤液制备的1%牛血清白
蛋白溶液作为封闭液，以200μl孔加至酶标板内，用封口 膜封好，37℃放置1小时；将封闭
好的酶标板用洗涤液洗板3次；以100μl孔加入PT或FHA阳 性对照和供试品溶液，37℃放
置1小时后，洗板6次，稀释辣根过氧化物酶标记的抗PT抗体或抗FH A至适当浓度，以
100μl孔加至酶标板内，用封口膜封好，37℃放置1小时；洗板6次；以100 μl孔加入底物
液，室温避光放置5~15分钟；以50μl孔加入终止液终止反应。用酶标仪在适宜波 长处测定
吸光度。
结果判定 Cutoff值为阴性对照吸光度的2.1倍。
阳性对照和供试品溶液的吸光度大于Cutoff值者为阳性。

gml），用PBS或